Agente terapéutico celular para la incontinencia urinaria que comprende células madre originadas a partir de decidua.

Un agente terapéutico celular que contiene células madre derivadas de la decidua de la placenta o fluidos menstruales,

para uso en el tratamiento de la incontinencia urinaria, en donde las células madre derivadas de la decidua de la placenta tienen las siguientes características:

(a) muestran inmunofenotipos positivos para CD29 y CD90, pero negativos para CD31 y CD45;

(b) muestran inmunofenotipos positivos para Oct4, SSEA-4 y Cripto-1;

(c) se desarrollan fijadas a plástico, mostrando características morfológicas de forma redonda o de husillo, y formando esferas en medio SFM de manera que sean capaces de ser mantenidas en un estado no diferenciado durante un largo periodo de tiempo; y

(d) tienen la capacidad de diferenciarse en miocitos.

Agente terapéutico celular para la incontinencia urinaria que comprende células madre originadas a partir de decidua CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a un agente terapéutico celular para el tratamiento de la incontinencia urinaria, y más particularmente a un agente terapéutico celular para el tratamiento de la incontinencia urinaria, que contiene células madre derivadas de la decidua de la placenta o el fluido menstrual.

TÉCNICA DE ANTECEDENTES

Células madre se refieren a células que tienen no sólo capacidad de autorreplicación, sino también la capacidad de diferenciarse en al menos dos células, y pueden dividirse en células madre totipotentes, células madre pluripotentes y células madre multipotentes.

Células madre totipotentes son células con propiedades totipotentes, capaces de desarrollarse para formar un individuo perfecto, y estas propiedades son poseídas por las células hasta el estadio de 8 células tras la fertilización de un oocito y un espermatozoide. Cuando estas células se aíslan y trasplantan en el útero, pueden desarrollarse para formar un individuo perfecto. Células madre pluripotentes, que son células capaces de desarrollarse para formar diversas células y tejidos derivados de las capas ectodérmica, mesodérmica y endodérmica, se derivan de una masa celular interna situada dentro de blastocistos generados 4-5 días después de la fertilización. Estas células se denominan "células madre embrionarias", y pueden diferenciarse en otras diversas células del tejido, pero no forman nuevos organismos vivos. Células madre multipotentes son células madre capaces de diferenciarse en sólo células específicas para los tejidos y órganos que contienen estas células.

Las células madre multipotentes fueron aisladas por primera vez de médula ósea de adultos (Y. Jiang et al., Nature, 418:41, 22), y luego también se encontraron en otros diversos tejidos adultos (C.M. Verfaillie, Trends Cell Biol., 12:52, 22). En otras palabras, a pesar de que la médula ósea es la fuente de células madre más ampliamente conocida, las células madre multipotentes también se encontraron en la piel, vasos sanguíneos, músculos y cerebros (J.G. Tomas et al., Nat. Cell Biol., 3:778, 21; M. Sampaolesi et al., Science, 31:487, 23; Y. Jiang et al., Exp. Hematol., 3:896, 22). Sin embargo, las células madre están muy rara vez presentes en los tejidos adultos tal como la médula ósea, y este tipo de células son difíciles de cultivar sin inducir una diferenciación y, por lo tanto, son difíciles de cultivar en ausencia de medios rastreados específicamente. Es decir, es muy difícil mantener las células madre aisladas in vitro.

Recientemente, se encontró que el tejido adiposo era una nueva fuente de células madre multipotentes (B. Cousin et al., BBRC, 31:116, 23; A. Miranville et al., Circulation, 11:349, 24; S. Gronthos et al., J. Cell Physiol., 189:54, 21; M.J. Seo et al., BBRC, 328:258, 25). A saber, se informó que un grupo de células no diferenciadas están incluidas en tejido adiposo humano obtenida mediante liposucción y tiene la capacidad de diferenciarse en células grasas, células osteogénicas, mioblastos y condroblastos (P.A. Zuk et al., Tissue Eng., 7:211, 21; A.M. Rodríguez et al., BBRC, 315:255, 24). Este tejido adiposo tiene la ventaja de que se puede extraer en grandes cantidades y, por lo tanto, recibe atención como una nueva fuente de células madre, que pueden superar las deficiencias existentes. También, estudios recientes utilizando experimentos de modelo con animales describen que células derivadas de tejido adiposo tienen las capacidades de regenerar músculos y estimular la diferenciación de los vasos sanguíneos neurales. Por lo tanto, estas células derivadas de tejido adiposo están siendo la atención como una nueva fuente de células madre.

Los autores de la presente invención han cultivado previamente tejido de placenta finamente cortado en un medio que contiene colagenasa y bFGF, células de placenta aisladas del caldo de cultivo, y después se dejó que las células madre aisladas se diferenciaran en miocitos, células osteogénicas, neurocitos, adipocitos, condrocitos y células beta pancreáticas (Publicación de Patente Coreana N°. 27-11756 A).

Mientras tanto, la incontinencia urinaria en mujeres es causada por la flacidez de la uretra y la vejiga, lo cual resulta en un debilitamiento de los músculos del suelo pélvico que surgen de la lesión del nervio pudendo debido a partos frecuentes y al envejecimiento. En la actualidad, el número de pacientes de incontinencia urinaria femenina en Corea se estima en aproximadamente 4..-5.. y está aumentando cada año debido a un rápido aumento en el número de mujeres de edad. Por lo tanto, la incontinencia urinaria femenina se está convirtiendo en un problema social grave en todo el mundo. Para tratar a los pacientes de incontinencia urinaria, se utilizan la terapia de inyección o terapia quirúrgica para el apoyo a la uretra y la vejiga. Actualmente, la terapia quirúrgica, que es un método invasivo, tiene un problema debido a que pueden aparecer complicaciones, y la terapia de inyección tiene problemas debido a que

emplea sustancias caras y, por lo tanto, no se puede aplicar fácilmente a todos los pacientes y debido a que tiene una tasa de éxito de sólo 5-6%, de manera que se requieren de nuevo la inyección y la cirugía.

La terapia de inyección de células madre no necesita anestesia y permite una fácil inyección de células madre en el esfínter uretral. Por lo tanto, si la terapia de inyección de células madre puede mejorar la contractilidad del esfínter uretral y aumentar la presión del punto de fuga, la terapia de células madre se puede utilizar ventajosamente para tratar la incontinencia urinaria. Sin embargo, no existe ningún estudio sobre el uso de células madre para tratar la incontinencia urinaria, excepto la descripción del documento US 25/25755, en donde se utilizan células regenerativas derivadas de tejido adiposo.

Por consiguiente, los autores de la presente invención han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un agente para tratar la incontinencia urinaria que contiene células madre y, como resultado, encontraron que células madre derivadas de la decidua placentaria son eficaces para el tratamiento de la incontinencia urinaria, completando con ello la presente invención.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Por lo tanto, es un objeto principal de la presente invención proporcionar un agente terapéutico celular para el tratamiento de la incontinencia urinaria, que contenga, como ingrediente activo, células madre derivadas de la decidua de la placenta o el fluido menstrual.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para la preparación de un agente terapéutico celular para el tratamiento de la incontinencia urinaria, que contiene, como ingrediente activo, células madre derivadas de la decidua de la placenta o el fluido menstrual.

Todavía otro objeto de la presente invención es proporcionar el uso de células madre derivadas de la decidua de la placenta o el fluido menstrual para la prevención o el tratamiento de la incontinencia urinaria.

Otras características y formas de realización de la presente invención resultarán más evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones adjuntas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 es una fotografía microscópica que muestra la morfología de las células madre mesenquimales (MSCs - siglas en inglés) derivadas de la decidua de la placenta.

La FIG. 2 es un diagrama gráfico que muestra el nivel de duplicación de la población acumulada (CPDL- siglas en inglés) como una función del número de pases de las células madre derivadas de la decidua.

La FIG. 3 es una fotografía que muestra que las células deciduales de primer paso cultivadas en medio SFM formaban esferas.

La FIG. 4 es una fotografía que muestra los resultados obtenidos mediante el análisis de los antígenos de superficie de MSCs derivadas de la decidua, utilizando un citómetro de flujo (FACS).

La FIG. 5 es una fotografía que muestra los resultados del análisis inmunocitoquímico realizado utilizando los anticuerpos indicados [A: OCT4; B: SSEA4; y C: CD44, CD54y control].

La FIG. 6 muestra los resultados de la RT-PCR para OCT4 [pista 1: marcador; pista 2: control de reacción RT; pista 3: células madre amnióticas; pista 4: células madre derivadas de la decidua; y pista 5: control de la reacción PCR].

La FIG. 7 es una fotografía microscópica que muestra los resultados de análisis inmunocitoquímico (a Miosina-FITC) para células madre derivadas de la decidua inducidas durante 1 días en medio... [Seguir leyendo]

1. Un agente terapéutico celular que contiene células madre derivadas de la decidua de la placenta o fluidos menstruales, para uso en el tratamiento de la Incontinencia urinaria, en donde las células madre derivadas de la decidua 5 de la placenta tienen las siguientes características:

(a) muestran ¡nmunofenotipos positivos para CD29 y CD9, pero negativos para CD31 y CD45;

(b) muestran ¡nmunofenotipos positivos para Oct4, SSEA-4 y Cripto-1;

(c) se desarrollan fijadas a plástico, mostrando características morfológicas de forma redonda o de husillo, y formando esferas en medio SFM de manera que sean capaces de ser mantenidas en un estado no diferenciado

durante un largo periodo de tiempo; y

(d) tienen la capacidad de diferenciarse en miocitos.