(27/03/2019) Un procedimiento para el enriquecimiento de ácidos nucleicos con una longitud menor que 300 nucleótidos a partir de una muestra que se elige del grupo consistente en plasma, suero, un fluido corporal, un frotis y un lisado celular, que comprende las etapas de procedimiento i) provisión de una fase P1 fluida, preferiblemente acuosa, que contiene (α1) al menos un ácido nucleico con una longitud menor que 300 nucleótidos, así como (α2) al menos un componente distinto de este ácido nucleico (α1), ii) puesta en contacto de la fase P1 con una matriz de intercambio de aniones para la unión del ácido nucleico (α1) a la matriz de intercambio de aniones,…

(26/03/2019) Un procedimiento para medir partículas de virus de ARN libres de células a partir de gotas de sangre seca, que comprende: rehidratar una muestra de sangre seca aplicando una solución tampón a la muestra de sangre seca para producir una muestra de sangre seca rehidratada; opcionalmente fijar células presentes en la muestra de sangre seca rehidratada con un reactivo de fijación para contener ARN y/o ADN asociados a células con las células; eluir dichas partículas de virus libres de células de la muestra de sangre seca rehidratada con un reactivo de elución que comprende solución salina tamponada con fosfato (PBS) que eluye preferentemente dichas partículas de virus libres de células sin alterar el…

(20/03/2019) Un procedimiento para reducir la unión y/o la escisión de un ácido nucleico alejado del objetivo por un primer complejo que comprende una proteína Cas9 catalíticamente activa y un primer polinucleótido guía, comprendiendo el procedimiento: poner en contacto el primer complejo con un ácido nucleico objetivo seleccionado, en el que el primer polinucleótido guía comprende un espaciador adaptado para unirse al ácido nucleico objetivo seleccionado; y poner en contacto un segundo complejo con el ácido nucleico alejado del objetivo, en el que el segundo complejo comprende (i) una proteína Cas9 catalíticamente inactiva (proteína dCas9) que no escinde el ácido nucleico alejado del objetivo, y (ii) un segundo polinucleótido guía que comprende un espaciador adaptado para unirse al ácido nucleico alejado del objetivo; …

(13/03/2019) Un método para el aislamiento de pequeñas moléculas de ARN que tienen a lo sumo 100 nucleótidos o menos de una muestra que comprende: a) lisar las células de una solución de lisado para producir un producto lisado; en donde la solución de lisado comprende un agente caotrópico b) añadir al producto lisado una solución de etanol para formar una mezcla de producto lisado/etanol; c) aplicar la mezcla de producto lisado/etanol a un primer soporte sólido y recoger la mezcla de producto lisado/etanol del flujo continuo; d) añadir a la mezcla de producto lisado/etanol del flujo continuo de la etapa c) una solución de etanol; e) aplicar la mezcla de producto lisado/etanol de la etapa d) a un segundo soporte sólido; y f) eluir las pequeñas moléculas de ARN del soporte sólido, en donde…

(26/02/2019) Un procedimiento de producción de una pluralidad de polinucleótidos modificados que tienen diferentes combinaciones de mutaciones distintas en múltiples sitios, en el que las mutaciones son cambios de uno o más nucleótidos de la secuencia de una secuencia de ácido nucleico parental, comprendiendo dicho procedimiento: (a) la adición de al menos tres cebadores a un polinucleótido matriz de doble cadena en una única mezcla de reacción, en la que los al menos tres cebadores no se solapan, y en la que cada uno de los al menos tres cebadores comprende al menos una mutación diferente de la de los otros cebadores,…

(25/02/2019) Un metodo implementado por computadora para seleccionar un complejo CRISPR para dirigir y/o escindir una secuencia de acido nucleico diana candidata dentro de una celula, que comprende los pasos de: (a) determinar la cantidad, la ubicacion y la naturaleza de los desapareamientos de la secuencia guia del o de los complejos CRISPR potenciales y la secuencia de acido nucleico diana candidata, (b) determinar la contribucion de cada cantidad, la ubicacion y la naturaleza del o de los desapareamientos en la energia libre de hibridacion de la union entre la secuencia de acido nucleico diana y la secuencia guia del o de los complejos CRISPR potenciales a partir de un conjunto de datos de capacitacion, (c) basandose en el analisis de contribucion del paso (b), predecir la escision…

(20/02/2019) Un método de preparación de una biblioteca de ácidos nucleicos molde para obtener información de secuencia a partir de un ácido nucleico diana, comprendiendo dicho método: (a) compartimentar el ácido nucleico diana en una pluralidad de primeros recipientes proporcionando a cada primer recipiente una cantidad de ácido nucleico diana mayor que aproximadamente uno o más equivalentes haploides del ácido nucleico diana; (b) proporcionar un primer índice al ácido nucleico diana de cada primer recipiente, en donde el primer índice proporcionado al ácido nucleico diana de cada primer recipiente es distinto, en donde la etapa comprende poner…

(30/01/2019) Un ratón, que comprende: un segmento genético variable de cadena pesada de inmunoglobulina humana (hVH) sin reordenar, un segmento genético de diversidad de cadena pesada de inmunoglobulina humana (hDH) sin reordenar y un segmento genético que se une a cadena pesada de inmunoglobulina humana (hJH) sin reordenar que están unidos de forma operativa a un gen constante de cadena pesada (CH) de inmunoglobulina de ratón, y un segmento genético variable de cadena ligera λ de inmunoglobulina humana (hVλ) sin reordenar y un segmento genético que se une a λ humana (hJλ) que están unidos de forma operativa a un gen constante de cadena ligera κ (Cκ) de inmunoglobulina de ratón en un locus endógeno de cadena ligera κ de inmunoglobulina…

(23/01/2019) Una biblioteca de vaccinia recombinante que comprende una biblioteca de polinucleótidos que codifican una pluralidad de polipéptidos de fusión de inmunoglobulina que comprenden diferentes regiones variables de cadena pesada de inmunoglobulina; cada polipéptido de fusión de inmunoglobulina comprende, en orden N- a C-, un dominio variable de cadena pesada fusionado a un dominio constante CH1 fusionado a un segmento polipeptídico que comprende el dominio transmembrana de una proteína de membrana específica de EEV, donde la biblioteca de polinucleótidos se construye en un vector de virus vaccinia y donde cada polinucleótido en la biblioteca comprende los siguientes elementos: (a) un cebador polinucleótido que codifica…

(16/01/2019) Una colección de anticuerpos sintéticos o fragmentos funcionales de los mismos, en donde al menos el 50% de los anticuerpos o fragmentos funcionales comprenden parejas de la cadena pesada variable y de la cadena ligera variable, en donde las regiones estructurales de dichas parejas de la cadena pesada variable y de la cadena ligera variable consisten en veinticinco o más secuencias de proteínas de la línea germinal seleccionadas a partir de las parejas de la cadena pesada variable y de la cadena ligera variable que tienen las secuencias tal y como se definen en las figuras 25-36: VH1-18 (SEQ ID NO: 204)/VK1-39 (SEQ ID NO: 236); VH1-18 (SEQ ID NO: 204)/VK3-15 (SEQ ID NO:…

(09/01/2019) Un adaptador vesicular de oligonucleótido para construir una biblioteca de ácidos nucleicos, que comprende: una región bicatenaria emparejada en 5' en un primer extremo terminal del adaptador; una región bicatenaria emparejada en 3' en un segundo extremo terminal del adaptador, que comprende una primera cadena y una segunda cadena complementarias entre sí, en donde la primera cadena comprende un saliente en el extremo 3' de esta y la segunda cadena comprende una base fosforilada en el extremo 5' de esta para proporcionar un extremo terminal adhesivo; y una región vesicular no emparejada entre la región bicatenaria emparejada en 5' y la región bicatenaria emparejada en 3', en donde la región vesicular no emparejada…

(19/12/2018) Uso de una composición como agente de disgregación para células contenidas en sangre entera, como agente de estabilización para el ARN completo de la sangre entera y para el aislamiento mediante adsorción del ARN de una mezcla de la sangre entera con la composición a un agente de adsorción para ácidos nucleicos, caracterizado por que la composición en solución acuosa se compone de a. al menos una sal de guanidinio, b. al menos una sustancia tampón para el tamponamiento en un pH de 5,0 a 8,0, c. al menos un detergente no iónico y d. al menos un formador de complejos para cationes divalentes, e. y, opcionalmente, proteinasa y/o DNasa, y f. está exenta de agentes reductores, que impide la degradación y la…

(13/12/2018) Método para aislar ácidos nucleicos extracelulares a partir de una muestra uniendo los ácidos nucleicos extracelulares a una fase sólida que porta grupos de intercambio aniónico, en el que dicho método comprende las siguientes etapas: a. acidificar la muestra para establecer las condiciones de unión y unir los ácidos nucleicos extracelulares a la fase sólida en una mezcla de unión que tiene un primer pH de ≤ 6,5 que permite la unión de los ácidos nucleicos extracelulares a los grupos de intercambio aniónico de la fase sólida, en el que la fase sólida está dotada de partículas magnéticas; b. separar la fase sólida con los ácidos nucleicos extracelulares unidos; c. opcionalmente lavar los ácidos nucleicos extracelulares; …

(28/11/2018) Procedimiento para la identificación de aptámeros, que comprende - La puesta en contacto de una mezcla de oligonucleótidos con una estructura objetivo de aptámero, y el enlace de al menos una parte de los oligonucleótidos a la estructura objetivo, - La separación de oligonucleótidos que se han unido a la estructura objetivo de aptámero, de la estructura objetivo de aptámero y de oligonucleótidos no unidos a la estructura objetivo de aptámero, - La amplificación separada espacialmente de todos los nucleótidos que se han unido a la estructura objetivo de aptámero, y la generación de amplificados separados espacialmente para cada oligonucleótido, conteniendo cada amplificado predominantemente una clase de oligonucleótidos, - La asignación de una identificación de emplazamiento específica en cada amplificado…

(28/11/2018) Un procedimiento para formar una biblioteca de polipéptidos del dominio de fibronectina de tipo 3 (Fn3) útiles para explorar la presencia de uno o más polipéptidos que tienen una actividad enzimática o de unión seleccionada, donde dichos polipéptidos tienen las secuencias de aminoácidos de tipo silvestre en las regiones de cadena beta A, AB, B, C, CD, D, E, EF, F y G del 10º módulo de fibronectina de tipo III de la fibronectina humana que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1, el procedimiento que comprende las etapas de: (i) alinear secuencias de bucle de aminoácidos AB, CD y EF en una colección de polipéptidos…

(22/11/2018) Un método de aislar al menos un antiligando, en el que el antiligando es un polipéptido, frente a al menos un ligando diana expresado diferencialmente, en donde el ligando diana es un antígeno de la superficie celular, en donde el ligando diana expresado diferencialmente es un ligando de baja expresión, en donde el ligando de baja expresión se expresa a entre 5.000 y 20.000 copias por célula, en donde el método comprende las etapas de: (a) llevar a cabo la selección por afinidad diferencial sobre una biblioteca de moléculas antiligandos con el fin de aislar al menos un antiligando, en donde la etapa de selección por afinidad diferencial comprende además las subetapas de: (i) proporcionar una biblioteca de antiligandos; (ii) proporcionar una primera población de ligandos que…

(29/10/2018) Un procedimiento de selección de células de ovario de hámster chino (CHO) que tienen un nivel de cero fucosa útil como células anfitrionas para expresar proteínas recombinantes, preferentemente un anticuerpo o una proteína de Fc, comprendiendo el procedimiento: (a) introducir mutaciones genéticas en una población de células de CHO poniendo en contacto las células con metotrexato (MTX), en donde las células de CHO se seleccionan de CHO-KI, CHO-S, DUXB11, CHO-1E5, CH03F, CHO/DG44 y CHO-2.6; (b) poner en contacto la población de células de CHO que comprende células mutadas con un agente de unión a fucosa no tóxico durante un…