CIP-2021 : C12N 15/10 : Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00;

preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).

CIP-2021CC12C12NC12N 15/00C12N 15/10[2] › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).

Notas[t] desde C01 hasta C14: QUIMICA

C QUIMICA; METALURGIA.

C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.

C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00).

C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K).

C12N 15/10 · · Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).

CIP2021: Invenciones publicadas en esta sección.

Exposición de pIX en fagos independiente de secuencia de señal.

(11/09/2013) Un genoma de fago o un fagémido que comprende un ácido nucleico que codifica una proteína pIX de fusiónprocedente de un fago filamentoso, en el que la proteína de fusión no comprende una secuencia de señal de N-terminal de procariota.

Homólogos del factor de necrosis tumoral y ácidos nucleicos que los codifican.

(05/09/2013) Anticuerpo aislado que se une específicamente a un polipéptido DNA101848 que comprende los residuos deaminoácidos 1 a 297 de la SEQ ID NO: 6 y es capaz de inhibir la unión de EDA-A2 a dicho polipéptido DNA101848.

Procedimiento de extracción de los ácidos desoxirribonucleicos (ADN) de microorganismos eventualmente presentes en una muestra de sangre.

(04/09/2013) Procedimiento de extracción de ADN de microorganismos presentes en una muestra de sangre que comprendelas siguientes etapas: i) la filtración de una muestra de sangre a través de una membrana de filtración cuyos poros presentan undiámetro que va de 0,01 μm a 50 μm, en particular de 0,1 μm a 10 μm, y de manera más particular de 0,2 μm a 1&bu;m; ii) el lavado de dicha membrana de filtración, en el cual dicho lavado lisa los glóbulos rojos de la muestra desangre; y iii) la extracción de los ácidos desoxirribonucleicos de los microorganismos eventualmente presentes en dichamembrana de filtración.

Obtención de perfil de expresión génica en tejidos tumorales biopsiados.

(14/08/2013) Método de predicción de la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un paciente con cáncer de mamasin la recidiva de cáncer de mama, tras la extirpación quirúrgica del tumor primario, que comprende determinar el nivel del transcrito de ARN de BAG1 en una muestra de tejido de cáncer de mama obtenidade dicho paciente, normalizado frente al nivel de expresión de todos los transcritos de ARN sometidos aensayo en dicha muestra, o un conjunto de referencia de transcritos de ARN, en el que un aumento del nivel normalizado del transcrito de ARN de BAG1 en comparación con el nivelnormalizado del transcrito de ARN de BAG1 en un conjunto de referencia de tejidos de cáncer de mamaindica un aumento de la probabilidad de supervivencia a largo plazo sin recidiva de cáncer de mama.

Presentación en la superficie celular de isoformas polipeptídicas mediante ultralectura de codón de terminación.

(16/07/2013) Método para seleccionar al menos una célula huésped eucariota que expresa un nivel deseado de un polipéptidode interés, que comprende: a) proporcionar una pluralidad de células huésped eucariotas que comprenden un ácido nucleico heterólogo quecomprende al menos un casete (Cas-POI) que comprende al menos un primer polinucleótido (Pn-POI) que codificapara el polipéptido de interés, al menos un codón de terminación en el sentido de 3' del primer polinucleótido y unsegundo polinucleótido en el sentido de 3' del codón de terminación que codifica para un anclaje transmembrana deinmunoglobulina; b) cultivar las células huésped eucariotas para permitir la expresión del polipéptido…

Mediadores de interferencia por ARN específicos de secuencias de ARN.

(03/07/2013) ARN bicatenario de 21 a 23 nucleótidos aislado que media en la interferencia por ARN de un ARNm al quecorresponde, con la condición de que el ARN bicatenario no sea ucg age ugg acg gcg acg uaa, unido químicamenteen el extremo 3' al extremo 5' del ARN complementario mediante un grupo ligador C18.

Sistemas de despliegue de levaduras.

(02/07/2013) Una biblioteca de células huésped, en donde cada célula huésped comprende: (a) una molécula de la superficie de la célula unida a la superficie de la célula, (b) una molécula adaptadora que comprende un primer sitio de enlazamiento y un segundo sitio de enlazamiento, y (c) una molécula de despliegue que comprende un polipéptido modificado; en donde el primer sitio de enlazamiento se enlaza específicamente con la molécula de la superficie de la célula y no puede enlazarse con la molécula de despliegue y el segundo sitio de enlazamiento se enlaza específicamente con la molécula de despliegue y no puede enlazarse con la molécula…

Intercambio de nucleótidos seleccionados mejorado con oligonucleótidos modificados con ANB.

(13/06/2013) Un procedimiento para la altered& seleccionada de una secuencia de ADN aceptor bicatenario quecomprende la combinación de la secuencia de ADN aceptor bicatenario con un oligonucleotido donador en presenciade proteinas que sean susceptibles de intercambio de nucleotidos seleccionados, en el que la secuencia de ADNaceptor bicatenario contiene una primera secuencia de ADN y una segunda secuencia de ADN que es elcomplemento de la primera secuencia de ADN y en el que el oligonucleotido donador comprende un dominio quocomprende al menos una discrepancia con respecto a la secuencia de ADN aceptor bicatenario que ha de seralterada, preferentemente con respecto a la primera secuencia de ADN, y en el quo el nucleatido on la discrepanciano este modificado, en el que el oligonucleatido contiene mas de un AND, en el que cada…

Vectores de presentación eucariotas multicatenarios y usos de los mismos.

(31/05/2013) Un método para presentar una población heterogénea de polipéptidos multicatenarios biológicamente activos,comprendiendo cada polipéptido multicatenario dos o más cadenas polipeptídicas, sobre la superficie de células delevadura diploides, que comprende: proporcionar células de levadura, comprendiendo cada célula de levadura: (i) un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende una cadena de un polipéptidomulticatenario biológicamente activo, estando el polipéptido enlazado a un anclaje de la superficiecelular, y (ii) uno o más polinucleótidos adicionales que codifican uno o más polipéptidos que comprenden laotra cadena o cadenas del polipéptido multicatenario,…

Métodos para la formación de enlaces disulfuro.

(22/05/2013) Un método para formar un enlace disulfuro entre un primer residuo cisteína comprendido en un primer(poli)péptido/proteína y un segundo residuo cisteína comprendido en un segundo (poli)péptido/proteína,comprendiendo el método: (a) introducir artificialmente un aminoácido con un pI mayor que 8 en dicho primer (poli)péptido/proteína osegundo (poli)péptido/proteína, en donde dicho aminoácido afecta positivamente a la reactividad de al menos uno de dichos residuoscisteína, y (b) causar o permitir la fijación de dicho primer (poli)péptido/proteína a dicho segundo (poli)péptido/proteína,en donde dicha fijación…

Aislamiento de ácidos nucleicos mediante la utilización de polidocanol y derivados del mismo.

(09/05/2013) Composición que comprende: - un agente caotrópico, - una sustancia tamponadora, - una proteasa, y - polidocanol al 0,5% a 4,9% (v/v) o un derivado del mismo.

Ultrahumanización de anticuerpos por generación y selección de bibliotecas cohorte y blast de cdr maduras previstas.

(06/05/2013) Un procedimiento para producir una biblioteca de polinucleótidos que codifica al menos una región determinantede la complementariedad (CDR) en la que el procedimiento comprende: (a) determinar la variación de secuencia de aminoácidos de la CDR presente en una biblioteca de anticuerposde referencia que consiste en las CDR naturales como se define de acuerdo con el Índice EU, Kabat, Chothia odefinición de punto de contacto, en el que la variación de secuencia CDR se determina en cada posición deresto de aminoácido de la CDR; (b) alinear una secuencia peptídica CDR problema de un anticuerpo contra un antígeno diana con…

Un procedimiento para incrementar la concentración de una molécula de ácido nucleico.

(06/05/2013). Solicitante/s: MEDICAL RESEARCH COUNCIL. Inventor/es: GRIFFITHS, ANDREW, DR., TAWFIK,DAN.

Procedimiento para incrementar la concentración de una molécula de ácido nucleico, en donde dicho procedimiento comprende: (a) la formación de microcápsulas acuosas a partir de una emulsión de agua en aceite, en donde muchas de las microcápsulas contienen una molécula de ácido nucleico y una solución acuosa que comprende los componentes necesarios para la amplificación del ácido nucleico; y (b) la amplificación de la molécula de ácido nucleico en las microcápsulas para formar más copias amplificadas de dicha molécula de ácido nucleico, en donde las microcápsulas compartimentan una genoteca de moléculas de ácido nucleico.

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Método de identificación de compuestos que se unen a una molécula diana biológica.

(22/04/2013) Método de identificación de un compuesto que se une a una diana biológica, comprendiendo dicho método las etapas de (a) poner en contacto la diana biológica con una biblioteca de compuestos que comprende al menos aproximadamente 102 compuestos distintos, comprendiendo dichos compuestos un resto funcional que comprende dos o más componentes básicos que están unidos operativamente a un oligonucleótido que identifica la estructura del resto funcional en condiciones adecuadas para que al menos un miembro de la biblioteca de compuestos se una a la diana, en el que la biblioteca de compuestos consiste esencialmente en una multiplicidad de compuestos…

Nuevos métodos para construir bibliotecas de paquetes genéticos que presentan de forma colectiva los miembros de una familia diversa de péptidos, polipéptidos o proteínas.

(09/04/2013) Un método para preparar ácidos nucleicos, comprendiendo el método las etapas de: (i) amplificar un ácido nucleico usando un cebador complementario de al menos parte de una secuenciasintética localizada en el extremo 5' de la secuencia de ácido nucleico; (ii) hacer el ácido nucleico amplificado monocatenario; (iii) poner en contacto el ácido nucleico monocatenario amplificado con un oligonucleótido monocatenario,siendo el oligonucleótido monocatenario complementario del ácido nucleico monocatenario en una región en la quese desea escisión, en el que el ácido nucleico monocatenario y el oligonucleótido monocatenario se asocian paraformar una región localmente bicatenaria del ácido nucleico monocatenario, en el que la región localmentebicatenaria comprende un sitio de reconocimiento…

Transferencia y expresión de genes de alta eficacia en células de mamíferos por un método de transfección múltiple de secuencias de regiones de fijación a la matriz.

(08/04/2013) Una secuencia de DNA aislada y purificada que tiene una actividad que aumenta la producción de proteínas,caracterizada por que dicha secuencia de DNA comprende a) al menos un elemento de DNA curvado, en donde elelemento de DNA curvado contiene al menos 33% del dinucleótido TA y/o al menos 33% del dinucleótido AT en untramo de 100 pares de bases contiguos, b) al menos un sitio de unión para una proteína de unión a DNA, y porquees una secuencia de nucleótidos de MAR que tiene la secuencia SEQ ID No 27, o una de sus secuenciascomplementarias, o una secuencia que tiene una identidad de al menos 90% con dicha secuencia SEQ ID No 27.

Transferencia y expresión de genes de alta eficacia en células de mamíferos por un método de transfección múltiple de secuencias de regiones de fijación a la matriz.

(04/04/2013) Una secuencia de DNA aislada y purificada que tiene una actividad que aumenta la producción de proteínas,caracterizada por que dicha secuencia de DNA comprende a) al menos un elemento de DNA curvado, en donde elelemento de DNA curvado contiene al menos 33% del dinucleótido TA y/o al menos 33% del dinucleótido AT en untramo de 100 pares de bases contiguos, b) al menos un sitio de unión para una proteína de unión a DNA, y porquees una secuencia de nucleótidos de MAR que tiene la secuencia SEQ ID No 26, o una de sus secuenciascomplementarias, o una secuencia que tiene una identidad de al menos 90% con dicha secuencia SEQ ID No 26.

Transferencia y expresión de genes de alta eficacia en células de mamíferos por un método de transfección múltiple de secuencias de regiones de fijación a la matriz.

(04/04/2013) Una secuencia de DNA aislada y purificada que tiene una actividad que aumenta la producción de proteínas, caracterizada por que dicha secuencia de DNA comprende a) al menos un elemento de DNA curvado, en donde el elemento de DNA curvado contiene al menos 33% del dinucleótido TA y/o al menos 33% del dinucleótido AT en un tramo de 100 pares de bases contiguos, b) al menos un sitio de unión para una proteína de unión a DNA, y porque es una secuencia de nucleótidos de MAR que tiene la secuencia SEQ ID No 24, o una de sus secuencias complementarias, o una secuencia que tiene una identidad de al menos 90% con dicha secuencia SEQ ID No 24.

PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN DE MATERIALES MULTIFUNCIONALIZADOS.

(12/03/2013) Procedimiento de obtención de materiales multifuncionalizados. La presente invención describe un procedimiento de obtención de materiales multifuncionales que comprende las etapas de: a) activación química de grupos funcionales presentes en un material base micro o nanoparticulado; b) reacción de sustitución nucleófila entre al menos un grupo amino, carboxilo o tiol terminal de una cadena de PNA o ADN tipo A y al menos un grupo funcional activado del material base obtenido en la etapa (a); c) conjugación a una biomolécula mediante activación química de grupos funcionales de una cadena de PNA/ADN tipo B, complementaria a la cadena PNA/ADN tipo A,; y d) hibridación de las cadenas PNA/ADN tipo A, que están unidas al material base según la etapa b) y las cadenas de PNA/ADN tipo B que tienen unidas biomoléculas, según la etapa c) mediante reconocimiento…

Purificación y análisis de ADN en superficies formadas mediante nanoingeniería.

(06/03/2013) Un dispositivo que comprende: (a) un puerto de entrada ; (b) un puerto de salida ; y (c) un único canal de unión en comunicación líquida con el puerto de entrada y el puerto de salida, en elque dicho canal de unión tiene una sección transversal rectangular, y una pared superior, una pared inferior, ydos paredes laterales, y en el que una o dos de dichas paredes es una superficie de cristal lisa sin modificar paraunión de ácidos nucleicos y las otras paredes son de plástico.

Procedimientos de purificación de ADN.

(25/02/2013) Procedimiento para purificar ADN plásmido a partir de una mezcla del mismo que contiene al menos una impureza de la célula huésped que comprende las siguientes etapas: (a) formar una solución mediante la adición de suficiente sal a dicha mezcla en donde dicha solución tiene una concentración de sal en el rango de aproximadamente 2M a 4M para permitir la unión selectiva de dicha al menos una impureza de célula huésped a un medio de interacción hidrofóbica; (b) contactar dicha solución que contiene ADN plásmido con dicho medio de interacción hidrofóbica bajo condiciones en que dicha al menos una impureza se une al medio de interacción hidrofóbica para formar un complejo; y (c) recoger ADN plásmido no unido a partir…

Procedimiento para la obtención de anticuerpos monoclonales a partir de muestras complejas de antígenos.

(11/02/2013) Procedimiento para la obtención de anticuerpos monoclonales a partir de muestras complejas de antígenos. La presente invención se refiere a un proceso de selección, en un solo paso, de dominios variables de anticuerpos, preferiblemente de camello, unidos a fagos, de gran afinidad y especificidad para un antígeno concreto o diversas proteínas que comparten epítopos comunes. Además el procedimiento incluye de forma preferente una amplificación de los fagos que comprenden los dominios variables de interés, mediante la infección de bacterias por dichos fagos, lo que permite la obtención de un elevado número de copias del mismo anticuerpo, lo que permite…

Un método para la evolución molecular in vitro de la función proteínica.

(11/02/2013) Un método para la generación de una secuencia o población de secuencias de polinucleótidos a partir de secuencias de polinucleótidos madre, el método comprendiendo los pasos de (a) proporcionar una primera población de moléculas de polinucleótidos y una segunda población de moléculas de polinucleótidos, la primera y segunda población juntas constituyendo cadenas positivas y negativas de una molécula de polinucleótidos madre; (b) digerir la primera y la segunda población de moléculas de polinucleótidos con una nucleasa para generar fragmentos de polinucleótidos; (c) contactar dichos fragmentos de polinucleótidos generados de las cadenas positivas con fragmentos generados de las…

Utilización de TDE para el aislamiento de ácidos nucleicos.

(05/02/2013) Composición que comprende éter dimetílico de tetraetilenglicol (≥TDE), un tampón acuoso y un agente caotrópico

Procedimiento de selección para ácidos nucleicos internalizantes en células.

(31/01/2013) Un procedimiento para seleccionar moléculas que contienen ARN internalizables que comprende: a) poner en contacto una o más células con una colección de ácidos nucleicos aleatorios de moléculas quecontienen ARN, comprendiendo las moléculas que contienen ARN ácidos nucleicos estabilizados y conteniendoregiones de secuencia constante; b) lavar las células; c) exponer las células a una o más nucleasas, en las que la una o más nucleasas son ARNasas o ribonucleasas; d) extraer los ácidos ribonucleicos totales de las células; e) multiplicar los ácidos ribonucleicos internalizados; y f) repetir las etapas de selección a) - e).

MÉTODO PARA LA DETECCIÓN Y/O CUANTIFICACIÓN DE POLIELECTROLITOS ANIÓNICOS.

(29/11/2012) La presente solicitud de patente se refiere a un método calorimétrico y kit para la detección y cuantificación de receptores aniónicos de alta carga, como ADN de doble cadena y micelas aniónicas de SDS, mediante agregados de nanopartículas de oro protegidas con iones citrato (AuNPs).

MATERIALES FUNCIONALIZADOS.

(08/11/2012). Ver ilustración. Solicitante/s: UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA.. Inventor/es: SANTOS MARTINEZ DE LAGUNA,RUBEN, SANCHEZ ESPINEL,CHRISTIAN, GRAZÚ BONAVIA,MARÍA VALERIA, MARTÍNEZ DE LA FUENTE,JESÚS, DEL PINO GONZÁLEZ DE LA HIGUERA,Pablo Alfonso.

Procedimiento de obtención de materiales multifuncionalizados La presente invención describe un procedimiento de obtención de materiales multifuncionales que comprende las etapas de: a) activación química de grupos funcionales presentes en un material base micro o nanoparticulado; b) reacción de sustitución nucleófila entre al menos un grupo amino, carboxilo o tiol terminal de una cadena de PNA o ADN tipo A y al menos un grupo funcional activado del material base obtenido en la etapa (a); c) conjugación a una biomolécula mediante activación química de grupos funcionales de una cadena de PNA/ADN tipo B, complementaria a la cadena PNA/ADN tipo A; y d) hibridación de las cadenas PNA/ADN tipo A, que están unidas al material base según la etapa b) y las cadenas de PNA/ADN tipo B que tienen unidas biomoléculas, según la etapa c) mediante reconocimiento molecular PNA-PNA o PNA-ADN.

Nuevos métodos para construir bibliotecas de paquetes genéticos que presentan de forma colectiva los miembros de una familia diversa de péptidos, polipéptidos o proteínas.

(31/10/2012) Una biblioteca que comprende una colección de paquetes genéticos que presentan un miembro de una familia diversa de péptidos, polipéptidos o proteínas y que presentan colectivamente al menos una parte de la familia, codificándose los péptidos, polipéptidos o proteínas presentados por secuencias de ADN que comprenden secuencias que codifican (a) una CDR1 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la S-<1>Y-<1>-M-<1>, en la que <1> se selecciona del grupo que consiste en A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, y Y; (b) una CDR2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo…

Mutantes que tienen capacidad de producir 1,4-butanodiol y procedimiento para la preparación de 1,4-butanodiol utilizando los mismos.

(24/10/2012) Mutante que muestra elevada producción de 1,4-butanodiol, que es preparado introduciendo o amplificando genesque codifican enzimas que convierten succinato en 4-hidroxibutirato y 4-hidroxibutirato en 1,4-butanodiol, en unmicroorganismo capaz de producir succinato, en el que el microorganismo capaz de producir succinato es una bacteria, el gen que codifica la enzima que convierte succinato en 4-hidroxibutirato es seleccionado del grupo que consiste engenes que codifican succinil-CoA transferasa, semialdehído de succinato dehidrogenasa, 4-hidroxibutiratodehidrogenasa y 4-hidroxibutirato dehidrogenasa, y el gen que codifica la enzima que convierte 4-hidroxibutirato en 1,4-butanodiol es i) un gen que codifica 4-hidroxibutirato-CoA transferasa y un gen que codifica…

Método de amplificación y secuenciamiento de ácidos nucleicos.

(26/09/2012) Un método para secuenciar ácidos nucleicos que comprende: (a) fragmentar moléculas de ácido nucleico plantilla grandes para generar una pluralidad de ácidos nucleicosfragmentados; (b) suministrar una población de los ácidos nucleicos fragmentados de cadena sencilla a un sistema (array) de almenos 10.000 cámaras de reacción sobre una superficie plana, en donde una pluralidad de los pocillos nocomprende más de una partícula y un único ácido nucleico fragmentado de cadena sencilla; (c) amplificar los ácidos nucleicos fragmentados de cadena sencilla en las cámaras de reacción, en donde unapluralidad de copias amplificadas de los ácidos nucleicos fragmentados de cadena sencilla son inmovilizadossobre partículas; y (d) llevar a cabo una reacción de secuenciamiento simultáneamente en una pluralidad de las…

UN MÉTODO PARA EL DESARROLLO MOLECULAR IN VITRO DE UNA FUNCIÓN PROTEICA.

(21/09/2012) Un método para generar una secuencia de polinucleótidos o población de secuencias desde las secuencias de polinucleótido de filamento simple codificando una o más proteinas causales, el método comprende los pasos de: a) suministrar una primera población de moléculas de polinucleótidos de filamento simple, la primera y segunda poblaciones juntas constituyen los filamentos positivos y negativos de la secuencia de polinucleótidos progenitores; b) realizar una reacción para la asimilación de las primera y segunda poblaciones de moléculas de polinucleótidos de filamento simple con una exonucleasa para generar las correspondientes poblaciones de fragmentos de polinucleótidos de filamento simple; c) contactar dichos fragmentos de polinucleótidos generados desde los filamentos positivos con fragmentos generados desde los filamentos negativos; y d)…

Intercambio de nucleótidos seleccionados mejorado con oligonucleótidos modificados por propinilo.

(22/08/2012) Un procedimiento para la alteración seleccionada de una secuencia de AON aceptor bicatenario que comprendela combinación de la secuencia de AON aceptor bicatenario con un oligonucleótido donador, en el que la secuenciade AON aceptor bicatenario contiene una primera secuencia de AON y una segunda secuencia de AON que es elcomplemento de la primera secuencia de AON y en el que el oligonucleótido donador comprende un dominio quecomprende al menos una discrepancia con respecto a la secuencia de AON aceptor bicatenario que ha de seralterada, preferentemente con respecto a la primera secuencia de AON, y en el que…

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