Método para purificar variantes de fenilalanina amoníaco-liasa procariotas.

Un método para purificar una variante de fenilalanina amoniaco-liasa de Anabaena variabilis (AvPAL) con una agregación mínima que comprende:



(a) lisar células bacterianas que contienen la variante AvPAL por homogeneización para generar un lisado celular;

(b) calentar el lisado celular a 65ºC durante 30 a 120 minutos;

(c) centrifugar el lisado celular calentado, en el que se retiene un sobrenadante que comprende la variante AvPAL;

(d) filtrar el sobrenadante para eliminar los precipitados; y

(e) separar la variante AvPAL de las proteínas contaminantes mediante cromatografía secuencial sobre una columna de intercambio aniónico (AIEX) seguido de una columna de interacción hidrófoba (HIC), donde el eluato de la columna HIC comprende la variante AvPAL,

en donde los residuos de cisteína en las posiciones 503 y 565 de dicha variante AvPAL han sido sustituidos por residuos de serina (SEQ ID NO: 11).

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E15202466.

Solicitante: BIOMARIN PHARMACEUTICAL INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 105 DIGITAL DRIVE NOVATO, CA 94949 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: KAKKIS, EMIL D., VELLARD,MICHEL CLAUDE, WENDT, DANIEL, J., MUTHALIF,MUBARACK, OKHAMAFE,Augustus,O, BELL,SEAN M, ZECHERLE,G. NICK, ANTONSEN,KRIS, ZHANG,YANHONG, LY,KIEU Y, FITZPATRICK, PAUL A..

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K38/51 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Liasas (4).
  • A61K47/10 A61K […] › A61K 47/00 Preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos utilizados, p. ej. portadores, aditivos inertes. › Alcoholes; Fenoles; Sus sales.
  • A61K47/18 A61K 47/00 […] › Aminas; Compuestos de amonio cuaternario.
  • A61P3/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.Medicamentos para el tratamiento de trastornos del metabolismo (de la sangre o de fluido extracelular A61P 7/00).
  • C12N9/88 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Liasas (4.).

PDF original: ES-2690542_T3.pdf

 

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