Anticuerpos monoclonales específicos de beta A 1-42 con propiedades terapéuticas.

Un anticuerpo o una porción funcional del mismo, capaz de reconocer o unirse a un epítopo específico de amiloide beta,

en donde dicho anticuerpo o porción funcional del mismo comprenden un fragmento de unión al epítopo de un anticuerpo monoclonal obtenible a partir de una línea celular de hibridoma FP 12H3-C2, depositada el 1 de Diciembre de 2005 como DSM ACC2750.

Anticuerpos monoclonales específicos de beta A 1-42 con propiedades terapéuticas La presente invención se refiere a métodos y composiciones para el uso terapéutico y de diagnóstico en el tratamiento de enfermedades y trastornos que son causados por, o asociados con proteínas amiloides o de tipo amiloide incluyendo la amiloidosis, un grupo de trastornos y anomalías asociados con la proteína amiloide tales como la enfermedad de Alzheimer.

La amiloidosis no es un fenómeno patológico único, sino más bien un grupo diverso de procesos de enfermedad progresivos que se caracteriza por depósitos en el tejido extracelular de una proteína de tipo almidón, cérea denominada amiloide, que se acumula en uno o más órganos o sistemas del organismo. A medida que los depósitos de amiloide se acumulan, empiezan a interferir en el funcionamiento normal del órgano o sistema del organismo. Existen al menos 15 tipos diferentes de amiloidosis. Las formas principales son la amiloidosis primaria sin antecedente conocidos, la amiloidosis secundaria siguiente a alguna otra afección, y la amiloidosis hereditaria.

La amiloidosis secundaria se produce en personas que tienen una infección o una enfermedad inflamatoria crónicas, tales como tuberculosis, una infección bacteriana denominada Fiebre mediterránea familiar, infecciones de los huesos (osteomielitis) , artritis reumatoide, inflamación del intestino delgado (ileítis granulomatosa) , enfermedad de Hodgkin y lepra .

Los depósitos de amiloide contienen típicamente tres componentes. Las fibrillas de proteína amiloide, que representan aproximadamente 90% del material amiloide, comprenden uno de varios tipos diferentes de proteínas. Estas proteínas son capaces de plegarse en las denominadas fibrillas en lámina "beta-plegada", una configuración de proteína única que muestra sitios de unión para el rojo Congo que da como resultado las propiedades de tinción únicas de la proteína amiloide. Además, los depósitos de amiloide están estrechamente asociados con el componente amiloide P (pentagonal) (AP) , una glicoproteína relacionada con amiloide P de suero normal (SAP) , y con glicosaminoglicanos sulfatados (GAG) , hidratos de carbono complejos de tejido conectivo.

Muchas enfermedades de envejecimiento se basan en o están asociadas con las proteínas de tipo amiloide y se caracterizan, en parte, por la acumulación de depósitos extracelulares de material amiloide o de tipo amiloide que contribuyen a la patogénesis, así como al progreso de la enfermedad.

Estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a, trastornos neurológicos tales como la enfermedad de Alzheimer (EA) , incluyendo enfermedades o afecciones caracterizadas por una pérdida de la capacidad de memoria cognitiva, tales como, por ejemplo, deterioro cognitivo leve (DCL) , demencia por cuerpos de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Holandés) ; el complejo de Parkinson-demencia de Guam. Otras enfermedades que se basan en o están asociadas con las proteínas de tipo amiloide son la parálisis supranuclear progresiva, la esclerosis múltiple, la enfermedad de Creutzfeld Jacob, la enfermedad de Parkinson, la demencia relacionada con el VIH, la ELA (esclerosis lateral amiotrófica) , la miositis por cuerpos de inclusión (MCI) , la diabetes de inicio en la edad adulta; la amiloidosis cardíaca senil; tumores endocrinos, y otros, incluyendo la degeneración macular.

Aunque la patogenia de estas enfermedades puede ser diversa, sus depósitos característicos a menudo contienen muchos componentes moleculares compartidos. En un grado significativo, esto puede ser atribuible a la activación local de las rutas de pro-inflamatorias que conducen de ese modo al depósito simultáneo de componentes activados del complemento, reaccionantes en fase aguda, moduladores inmunitarios, y otros mediadores de la inflamación (McGeer et al., 1994) .

La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurológico que se piensa principalmente que está causado por placas amiloides, una acumulación de depósito anómalo de proteínas en el cerebro. El tipo más frecuente de amiloide encontrado en el cerebro de los individuos afectados se compone principalmente de fibrillas Aβ. La evidencia científica demuestra que un aumento en la producción y acumulación de la proteína beta-amiloide en la placas conduce a la muerte de las células nerviosas, lo que contribuye al desarrollo y la progresión de la EA. La pérdida de células nerviosas en zonas estratégicas del cerebro, a su vez, ocasiona una reducción en los neurotransmisores y el deterioro de la memoria. Las proteínas principalmente responsables de la acumulación de placa incluyen la proteína precursora amiloide (PPA) y dos presenilinas (presenilina I y presenilina II) . La escisión sucesiva de la proteína precursora amiloide (PPA) , que es expresada constitutivamente y catabolizada en la mayoría de las células, por las enzimas β y γ secretasa, conduce a la liberación de un péptido Aβ de 39 a 43 aminoácidos. La degradación de las PPA probablemente aumenta su propensión a agregarse en placas. Es especialmente el fragmento Aβ (1-42) el que tiene una alta propensión a acumular agregados debido a dos residuos de aminoácidos muy hidrófobos en su extremo C. Por lo tanto, se cree que el fragmento Aβ (1-42) está principalmente involucrado y es responsable del inicio de la formación de la placa neurítica en la EA y tiene, por lo tanto, un alto potencial patológico. Por tanto, existe una necesidad de anticuerpos específicos que pueden dirigirse a y difundir la formación de la placa amiloide.

Los síntomas de la EA se manifiestan lentamente y el primer síntoma puede ser solamente un leve mala memoria. En esta etapa, los individuos pueden olvidar acontecimientos recientes, actividades, los nombres de personas o cosas conocidas y pueden no ser capaces de resolver problemas matemáticos sencillos. A medida que la enfermedad avanza, los síntomas son percibidos más fácilmente y se convierten lo suficientemente graves como para hacer que la persona con EA o sus familiares busquen ayuda médica. Los síntomas de la EA en la fase media incluyen el olvido cómo realizar tareas simples, tales como el aseo, y problemas desarrollados con el habla, la comprensión, la lectura o la escritura. Los pacientes con EA en fase tardía pueden volverse ansiosos o agresivos, pueden alejarse del hogar y, finalmente, necesitar atención total.

En la actualidad, la única manera definitiva para diagnosticar la EA consiste en identificar placas y ovillos en el tejido cerebral de una autopsia después de la muerte del individuo. Por lo tanto, los médicos solamente pueden realizar un diagnóstico de una EA "posible" o "probable" mientras la persona todavía está viva. Utilizando los métodos actuales, los médicos pueden diagnosticar la EA correctamente hasta el 90 por ciento de las veces utilizando de varias herramientas para diagnosticar la EA "probable". Los médicos realizan preguntas sobre la salud general de la persona, los problemas médicos anteriores, y el historial de cualquiera de las dificultades de la persona para llevar a cabo las actividades diarias. Las pruebas conductuales de memoria, resolución de problemas, atención, recuento y lenguaje proprocionan información sobre la degeneración cognitiva y pruebas médicas tales como análisis de sangre, orina o líquido cefalorraquídeo, y escáneres cerebrales pueden proporcionar cierta información adicional.

La gestión de la EA consiste en tratamientos basados en medicación y no basados en medicación. Los tratamientos dirigidos a cambiar el curso de la enfermedad subyacente (retrasar o revertir la progresión) hasta ahora no han tenido éxito en gran medida. Se ha demostrado que los medicamentos que restauran el déficit (defecto) , o el mal funcionamiento, en los mensajeros químicos de las células nerviosas (neurotransmisores) , en particular inhibidores de colinesterasa (ICE) tales como la tacrina y la rivastigmina, mejoran los síntomas. Los ICE impiden la degradación enzimática de los neurotransmisores aumentando de este modo la cantidad de mensajeros químicos disponibles para transmitir las señales nerviosas en el cerebro.

Para algunas personas en las etapas inicial e intermedia de la enfermedad, los medicamentos tacrina (COGNEX®, Morris Plains, NJ) , donepezilo (Aricept®, Tokyo, JP) , rivastigmina (Exelon®, East Hanover, NJ) o galantamina (Reminyl®, New Brunswick, NJ) pueden ayudar a evitar que algunos de los síntomas empeoren durante un tiempo limitado. Otro medicamento, la memantina (Namenda®, Nueva York, Nueva York) , ha sido aprobado para el tratamiento de la EA moderada a grave. También están disponibles medicaciones para... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o una porción funcional del mismo, capaz de reconocer o unirse a un epítopo específico de amiloide beta, en donde dicho anticuerpo o porción funcional del mismo comprenden un fragmento de unión al epítopo de un anticuerpo monoclonal obtenible a partir de una línea celular de hibridoma FP 12H3-C2, depositada el 1 de Diciembre de 2005 como DSM ACC2750.

2. Un anticuerpo monoclonal o una porción funcional del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, producido por una línea celular de hibridoma FP 12H3-C2, depositada el 1 de Diciembre de 2005 como DSM ACC2750.

3. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores o las partes funcionales del mismo, que es un anticuerpo monoclonal, o un anticuerpo quimérico.

4. Un anticuerpo humanizado, o una porción funcional del mismo, cuyo anticuerpo o porción funcional del mismo comprenden las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de un anticuerpo monoclonal obtenible a partir de una línea celular de hibridoma FP 12H3-C2, depositada el 1 de Diciembre de 2005 como DSM ACC2750.

5. Un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.

6. Una línea celular productora de un anticuerpo o una porción funcional del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.

7. La línea celular de la reivindicación 6, que es una línea celular de hibridoma FP 12H3-C2, depositada el 1 de Diciembre de 2005 como DSM ACC2750.

8. Un método para producir un anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende cultivar la línea celular de la reivindicación 6 o 7.

9. Un anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 producido mediante el método de la reivindicación 8.

10. Una composición que comprende el anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, y que comprende opcionalmente de manera adicional un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, para su uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos que están causados por o asociados con proteínas amiloides o de tipo amiloide incluyendo la amiloidosis.

12. Una mezcla que comprende un anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y, opcionalmente, una sustancia biológicamente activa adicional utilizada en la medicación de enfermedades y trastornos que están causados por o asociados con proteínas amiloides o de tipo amilode y/o un vehículo y/o un diluyente y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables.

13. El uso de un anticuerpo y/o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una composición de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, o una mezcla de acuerdo con la reivindicación 12, para la preparación de un medicamento para el tratamiento o el alivio de los efectos de la amiloidosis incluyendo, pero no limitados a:

(a) trastornos neurológicos tales como la Enfermedad de Alzheimer (EA) ;

(b) enfermedades o afecciones caracterizadas por una pérdida de capacidad de memoria cognitiva tales como, por ejemplo, deterioro cognitivo leve (DCL) , demencia por cuerpos de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Holandés) , y el complejo de Parkinson-Demencia de Guam; y

(c) parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld Jacob, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, ELA (esclerosis lateral amiotrófica) , miositis por cuerpos de inclusión (MCI) , diabetes de comienzo en la edad adulta, amiloidosis cardíaca senil, tumores endocrinos, y degeneración macular.

14. Un método para la preparación de un anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una composición de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, o una mezcla de acuerdo con la reivindicación 12, para su uso en el tratamiento o alivio de los efectos de la amiloidosis incluyendo, pero no limitados a:

(a) trastornos neurológicos tales como la Enfermedad de Alzheimer (EA) ;

(b) enfermedades o afecciones caracterizadas por una pérdida de capacidad de memoria cognitiva tales como, por ejemplo, deterioro cognitivo leve (DCL) , demencia por cuerpos de Lewy, síndrome de Down,

hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Holandés) , y el complejo de Parkinson-Demencia de Guam; y

(c) parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld Jacob, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, ELA (esclerosis lateral amiotrófica) , miositis por cuerpos de inclusión (MCI) , diabetes de comienzo en la edad adulta, amiloidosis cardíaca senil, tumores endocrinos, y degeneración macular.

15. La composición de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, para su uso en:

(a) la reducción de la carga de placas o en la reducción de la cantidad de placas en el cerebro de un animal, concretamente un mamífero, pero especialmente un ser humano que padece una enfermedad o afección asociada con el amiloide; o

(b) la reducción de la cantidad de placas en el cerebro de un animal, concretamente un mamífero, pero especialmente un ser humano que padece una enfermedad o afección; o

(c) la disminución de la cantidad total de Aβ soluble en el cerebro de un animal, concretamente un mamífero, pero especialmente un ser humano que padece una enfermedad o afección asociadas con el amiloide; o

(d) la prevención, el tratamiento o el alivio de los efectos de la amiloidosis incluyendo, pero no limitados a:

(i) trastornos neurológicos tales como la Enfermedad de Alzheimer (EA) ;

(ii) enfermedades o afecciones caracterizadas por una pérdida de capacidad de memoria cognitiva tales como, por ejemplo, deterioro cognitivo leve (DCL) , demencia por cuerpos de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Holandés) , y el complejo de Parkinson-Demencia de Guam; y

(iii) parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld Jacob, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, ELA (esclerosis lateral amiotrófica) , miositis por cuerpos de inclusión (MCI) , diabetes de Comienzo en la edad adulta, amiloidosis cardíaca senil, tumores endocrinos, y degeneración macular; o (e) la conservación o el incremento de la capacidad de memoria cognitiva en un mamífero que muestra una enfermedad o afección asociadas con el amiloide.

16. La línea celular de la reivindicación 6, que es una línea celular de hibridoma.

17. Un método de diagnóstico de una enfermedad o afección asociadas con el amiloide en un paciente que comprende detectar la unión inmunoespecífica de un anticuerpo o un fragmento activo del mismo a un epítopo de la proteína amiloide en una muestra que incluye las etapas de:

a) poner en contacto la muestra que se sospecha que contiene el antígeno amiloide con un anticuerpo o porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, cuyo anticuerpo o porción funcional del mismo se unen a un epítopo de la proteína amiloide; b) permitir que el anticuerpo o porción funcional del mismo se unan al antígeno amiloide para formar un complejo inmunológico; c) detectar la formación del complejo inmunológico; y d) correlacionar la presencia o ausencia del complejo inmunológico con la presencia o ausencia de antígeno amiloide en la muestra.

18. Un método para diagnosticar una predisposición a una enfermedad o afección asociadas con el amiloide en un paciente que comprende detectar la unión inmunoespecífica de un anticuerpo o un fragmento activo del mismo a un epítopo de la proteína amiloide en una muestra que incluye las etapas de:

a) poner en contacto la muestra que se sospecha que contiene el antígeno amiloide con un anticuerpo o porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, cuyo anticuerpo o porción funcional del mismo se une a un epítopo de la proteína amiloide; b) permitir que el anticuerpo o porción funcional del mismo se unan al antígeno amiloide para formar un complejo inmunológico; c) detectar la formación del complejo inmunológico; d) correlacionar la presencia o ausencia del complejo inmunológico con la presencia o ausencia de antígeno amiloide en la muestra; y e) comparar la cantidad de dicho complejo inmunológico con un valor de control normal,

en donde un incremento en la cantidad de dicho agregado en comparación con un valor de control normal indica que dicho paciente está en riesgo de desarrollar una enfermedad o afección asociadas con el amiloide.

19. Un método para verificar una enfermedad residual mínima en un paciente después del tratamiento con un anticuerpo o porción funcional del mismo o una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho método comprende: a) poner en contacto la muestra que se sospecha que contiene el antígeno amiloide con un anticuerpo o porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, cuyo anticuerpo o porción funcional del mismo se une a un epítopo de la proteína amiloide; b) permitir que el anticuerpo o porción funcional del mismo se unan al antígeno amiloide para formar un complejo inmunológico; c) detectar la formación del complejo inmunológico; d) correlacionar la presencia o ausencia del complejo inmunológico con la presencia o ausencia de antígeno amiloide en la muestra; y e) comparar la cantidad de dicho complejo inmunológico con un valor de control normal,

en donde un incremento en la cantidad de dicho agregado en comparación con un valor de control normal indica que dicho paciente todavía padece una enfermedad residual mínima.

20. Un método para pronosticar la capacidad de respuesta de un paciente que está siendo tratado con un anticuerpo o porción funcional del mismo o una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende:

a) poner en contacto la muestra que se sospecha que contiene el antígeno amiloide con un anticuerpo o porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, cuyo anticuerpo o porción funcional del mismo se une a un epítopo de la proteína amiloide; b) permitir que el anticuerpo o porción funcional del mismo se unan al antígeno amiloide para formar un complejo inmunológico; c) detectar la formación del complejo inmunológico; d) correlacionar la presencia o ausencia del complejo inmunológico con la presencia o ausencia de antígeno amiloide en la muestra; y e) comparar la cantidad de dicho complejo inmunológico antes y después del comienzo del tratamiento,

en donde una disminución en la cantidad de dicho agregado indica que dicho paciente tiene un alto potencial de responder al tratamiento.

21. Un kit de ensayo para la detección y el diagnóstico de enfermedades y afecciones asociadas con el amiloide que comprende un anticuerpo o una porción funcional del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.