Viroterapia oncolítica para la prevención de la recidiva tumoral.

Parvovirus para su uso en un método para prevenir la recidiva de un tumor, en el que dicho parvovirus es H1 (H1PV).

Viroterapia oncolïtica para la prevenciïn de la recidiva tumoral

La presente invenciïn proporciona un parvovirus H1 (H1PV) para prevenir la recidiva de un tumor, preferiblemente un cïncer de pïncreas o tumor cerebral maligno.

El tratamiento a largo plazo insatisfactorio de tumores malignos se debe frecuentemente a recidiva tumoral. Esto es un problema en particular en la terapia de tumores cerebrales malignos. Incluso cuando es satisfactoria la extirpaciïn quirïrgica del tumor sin que se demuestre tumor residual en IRM, mïs del 90% de los pacientes desarrollarïn tumores con recidiva en el plazo de 2 a 3 aïos tras el tratamiento inicial. Las estrategias convencionales actuales para mejorar esta situaciïn incluyen el uso de radio-quimioterapia. Sin embargo, este tratamiento sïlo ha mostrado mejorar la supervivencia en de 3 a 4 meses pero no que altere la tasa de recidivas tumorales o supervivientes a largo plazo. Aunque actualmente estïn en investigaciïn diversos fïrmacos y

estrategias experimentales para prolongar la supervivencia y reducir la tasa de recidiva tumoral, hasta ahora no hay informes sobre ningïn avance decisivo importante.

El documento WO 2006/047301 A2 se refiere a mïtodos y composiciones basados en virus adenoasociado tipo 2 (AAV-2) para destruir cïlulas neoplïsicas.

El documento US 7.179.456 B2 y el resumen “Geletneky et al., 186 pïster, European J. of Cancer, Suplemento, Pergamon, Oxford, G.B., Vol. 3, N.ï 2, pïg. 53” describe el uso de parvovirus para la terapia de tumores cerebrales.

Por tanto, es el objeto de la presente invenciïn proporcionar medios para la prevenciïn de la recidiva tumoral.

Segïn la invenciïn, esto se logra mediante el contenido definido en las reivindicaciones. La presente invenciïn se basa en los hallazgos del solicitante de que la prevenciïn de la recidiva tumoral espontïnea y la inducciïn de inmunidad especïfica de tumor pueden lograrse mediante viroterapia oncolïtica con parvovirus H-1, ejemplificado para cïncer de pïncreas y gliomas experimentales. El tratamiento de tumores con el parvovirus oncolïtico H-1 da como resultado el desarrollo de inmunidad especïfica de tumor. Se detectï este efecto en ratas Wistar inmunocompetentes que portaban gliomas intracraneales RG-2. La inducciïn de inmunidad especïfica de tumor tras tratamiento satisfactorio de tumores cerebrales con parvovirus H-1 no se ha demostrado previamente.

Para analizar los efectos inmunolïgicos del tratamiento con H-1PV, se realizaron varios experimentos 35 independientes:

El experimento 1 describe la reexposiciïn de ratas Wistar tratadas satisfactoriamente con cïlulas tumorales RG-2. Se trataron ratas Wistar hembra (n = 7) que portaban grandes gliomas intracraneales RG-2 con parvovirus H-1PV (inyecciïn intratumoral: n = 4; inyecciïn intravenosa: n = 3) . Tras la remisiïn completa del tumor demostrada mediante IRM y un periodo de seguimiento de > 6 meses tras el tratamiento satisfactorio, se reexpusieron los animales a cïlulas tumorales RG-2 (inyecciïn intracraneal) y se observaron para determinar la formaciïn de tumor incluyendo obtenciïn de imïgenes mediante RM. El objetivo del experimento era evaluar si los animales estaban protegidos frente al crecimiento tumoral con recidiva mediante el primer tratamiento.

El experimento 2 describe el anïlisis de efectos inmunolïgicos especïficos de tumor tras la reexposiciïn tumoral en animales tras la terapia con parvovirus H-1PV satisfactoria. El objetivo de este experimento era evaluar si tras la reexposiciïn intracraneal a cïlulas RG-2, los animales que se habïan curado de un glioma experimental mediante inyecciïn de H-1PV mostraban una respuesta inmunitaria especïfica de tumor. Para someter esto a prueba, se recogieron linfocitos de ganglios linfïticos drenantes y se purificaron. Se estimularon los linfocitos purificados con cïlulas RG-2 irradiadas, con cïlulas RG-2 infectadas por H-1PV previamente e irradiadas o con cïlulas RG-2 congeladas y descongeladas. El tratamiento con concanavalina A de linfocitos sirviï como control para verificar la viabilidad de linfocitos especïfica. Tras 48 horas de exposiciïn al antïgeno respectivo, se pulsaron las cïlulas con 3H-timidina y se recogieron tras 72 horas.

El experimento 3 describe la participaciïn de cïlulas T en el efecto oncosupresor de H-1PV.

El experimento 4 muestra que la transferencia adoptiva de cïlulas inmunitarias especïficas de tumor a ratas que portaban tumor no infectadas da como resultado un efecto oncosupresor.

Breve descripciïn de los dibujos Figura 1: Ejemplo de obtenciïn de imïgenes mediante RM tras el tratamiento satisfactorio (i.c.) y reexposiciïn A1: RM (3 secciones en direcciïn crïneo-caudal) 1 dïa antes del tratamiento con H-1PV;

A2: RM 3 dïas tras el tratamiento i.c. con H-1PV que demuestra tumor en remisiïn; A3: RM 7 dïas tras el tratamiento i.c. con H-1PV con remisiïn tumoral casi completa;

A4: RM 150 dïas tras la reexposiciïn tumoral sin tumor visible.

Figura 2a: Recuentos absolutos (captaciïn de 3H-timidina) tras el cocultivo de linfocitos con antïgenos tumorales en 2 animales reexpuestos LN = linfocitos de ganglios linfïticos drenantes Figura 2b: Cambios relativos de la actividad de linfocitos tras el cocultivo de linfocitos con antïgenos tumorales en 2 animales reexpuestos (% de diferencia con respecto al animal control)

Figura 3: Transferencia adoptiva de esplenocitos de donantes tratados a receptores no tratados previamente (A) Representaciïn esquemïtica del protocolo de tratamiento de los donantes. Se trataron ratas (n = 16) que portaban tumores de pïncreas o bien con PBS (n = 8) o bien con H-1PV (1x109 unidades formadoras de placas por animal, n = 8) por vïa intratumoral. En ese momento, se indujeron tumores en 16 ratas que servïan como receptores de esplenocitos.

(B) ïndice de supervivencia de ratas receptoras 220 dïas tras la inoculaciïn tumoral. Se realizï transferencia adoptiva 21 dïas (flecha) tras el inicio del tumor en el receptor. Las ratas recibieron esplenocitos de controles tratados con PBS (cïrculos rellenos) o donantes tratados con H-1PV (cuadrados en blanco) .

La presente invenciïn proporciona un parvovirus (H1 (H1PV) para su uso en un mïtodo para prevenir la recidiva de 25 un tumor.

Preferiblemente, dicho parvovirus H1 (agente parvoterapïutico) se formula como una composiciïn farmacïutica, en la que el parvovirus estï presente en una dosis eficaz y se combina con un portador farmacïuticamente aceptable. “Farmacïuticamente aceptable” pretende englobar cualquier portador que no interfiere en la eficacia de la actividad biolïgica de los principios activos y que no es tïxico para el paciente al que se administra. Se conocen bien en la tïcnica ejemplos de portadores farmacïuticos adecuados e incluyen soluciones salinas tamponadas con fosfato, agua, emulsiones, tales como emulsiones de aceite/agua, diversos tipos de agentes humectantes, disoluciones estïriles, etc. Portadores farmacïuticamente compatibles adicionales pueden incluir geles, materiales de matriz bioabsorbibles, elementos para implantaciïn que contienen el agente terapïutico, o cualquier otro vehïculo,

material (es) o medio de suministro o dispensaciïn adecuado. Tales portadores pueden formularse mediante mïtodos convencionales y pueden administrarse al sujeto a una dosis eficaz.

Una “dosis eficaz” se refiere a cantidades de los principios activos que son suficientes para prevenir la recidiva de un tumor. Una “dosis eficaz” puede determinarse usando mïtodos conocidos por el experto en la tïcnica (vïanse, por ejemplo, Fingl et al., The Pharmocological Basis of Therapeutics, Goodman y Gilman, eds. Macmillan Publishing Co., Nueva York, pïgs. 1-46 ( (1975) ) .

Puede efectuarse la administraciïn de los compuestos de diferentes maneras, por ejemplo mediante administraciïn intravenosa, intratumoral, intraperitoneal, subcutïnea, intramuscular o intradïrmica. La vïa de administraciïn 45 depende por supuesto de la clase de terapia y la clase de compuestos contenidos en la composiciïn farmacïutica. Una vïa de administraciïn preferida es la administraciïn intravenosa. El rïgimen de dosificaciïn del parvovirus (agente parvoterapïutico) puede determinarse fïcilmente dentro de los conocimientos de la tïcnica, por el mïdico responsable basïndose en los datos del paciente, observaciones y otros factores clïnicos, incluyendo por ejemplo la talla, el ïrea superficial corporal, la edad, el sexo del paciente, el parvovirus particular etc. que va a administrarse, el momento y la vïa de administraciïn, el tipo y las caracterïsticas del tumor, la... [Seguir leyendo]

1. Parvovirus para su uso en un mïtodo para prevenir la recidiva de un tumor, en el que dicho parvovirus es H1

(H1PV) . 5

2. Parvovirus para su uso segïn la reivindicaciïn 1, en el que dicho tumor es un tumor cerebral o tumor de pïncreas.

3. Parvovirus para su uso segïn la reivindicaciïn 2, en el que dicho tumor cerebral es glioma, meduloblastoma o

meningioma. 10

4. Parvovirus para su uso segïn la reivindicaciïn 3, en el que dicho glioma es un glioblastoma humano maligno.

5. Parvovirus para su uso segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho parvovirus se

administra mediante administraciïn intravenosa (i.v.) , intratumoral, intracraneal o intracerebral. 15

6. Uso de H1PV segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la preparaciïn de una composiciïn farmacïutica para la prevenciïn de la recidiva de un tumor.