Vacuna viva modificada contra el BRSV, mejorada.

Composición de vacuna para su utilización en la inmunización de un animal contra infección por Virus SincitialRespiratorio Bobina (BRSV) que comprende:

un virus BRS vivo modificado, un cocoadyuvante que comprende un copolímero bloque y un aceite metabolizado yun portador farmacéuticamente aceptable, en el que la composición de vacuna contiene de 103,0 a 106,0 TCID50/ml deBRSV y es administrada como dosis única.

Vacuna viva modificada contra el BRSV, mejorada Sector de la invención La presente invención se refiere a métodos mejorados para inducir inmunidad protectora frente al Virus Sincítico Respiratorio Bovino (BRSV) , específicamente empleando una vacuna viva modificada, adecuada para administrar a animales receptores en una sola dosis.

Antecedentes de la invención Actualmente el Virus Sincítico Respiratorio Bovino (BRSV) está reconocido como un agente etiológico importante en el Complejo de la Enfermedad Respiratoria Bovina (BRDC) . La enfermedad se caracteriza por respiración rápida,

tos, pérdida de apetito, secreción ocular y nasal, y temperaturas elevadas. En un ataque agudo, la muerte se puede producir dentro de las 48 horas de la iniciación de los síntomas.

El BRSV infecta a ganado de todas las edades, incluidas las terneras lactantes. El BRSV está considerado como el patógeno vírico más común en la neumonía enzoótica en las terneras, y también se ha asociado al enfisema pulmonar entre terneras recién destetadas. Así pues, existe una necesidad de una profilaxis eficaz contra este virus en el ganado y en las granjas lecheras.

El establecer una inmunidad protectora frente al BRSV es problemático. Como en algunas otras enfermedades mediadas por virus, los niveles de anticuerpos en suero contra el BRSV no están necesariamente correlacionados 25 con una protección frente a la enfermedad. Este fenómeno puede reflejar un papel para IgA localmente producidas, dirigidas contra el BRSV (Kimman y otros, J. Clin. Microbiol., 25: 1097-1106, 1987) , y/o un requisito de la inmunidad mediada por células para establecer una defensa eficaz contra este virus. El establecer una inmunidad protectora en terneras lactantes presenta obstáculos adicionales, puesto que los anticuerpos maternos frente al BRSV pueden debilitar el inmunógeno inyectado y neutralizar eficazmente la vacuna. Finalmente, la inconveniencia y el gasto de vacunaciones múltiples hacen que sea deseable una vacuna en una sola dosis. Así pues, en el estado de la técnica existe una necesidad de formulaciones de una vacuna contra el BRSV, en una sola dosis, que produzcan una respuesta inmunitaria enérgica y multifacética.

El régimen de administración estándar para las vacunas contra el BRSV, del estado de la técnica anterior, es de dos dosis (Stott y otros, J. Hyg. Camb., 93: 251-261, 1984; Thomas y otros, Agri-Practice, 5: 1986; y Syvrud y otros, Vet. Med., 83: 429-430, 1988; Veterinar y Pharmaceuticals & Biologicals, 8ª Edición, 1993/94, págs. 484, 740-741, 956960, 982-983) . Tal como se muestra en Kucera y otros (Agri-Practice, Vet. Med., Vol. 78, octubre de 1983, págs. 1599-1604, 1983) , una sola vacunación experimental contra el BRSV inducía niveles relativamente bajos del título de anticuerpos de neutralización del suero (SN) frente al BRSV, mientras que dos dosis de la vacuna producían títulos de anticuerpos SN de 1:10 a 1:320. Además de esto, en los rebaños aparentemente expuestos al BRSV durante las pruebas de campo, aproximadamente el 48% de los animales no vacunados requirieron tratamiento para la enfermedad respiratoria, en comparación con el 27% y el 21% entre los vacunados con una dosis única y con una dosis doble, respectivamente. Sin embargo, no se demostró concluyentemente que el agente causante de la enfermedad respiratoria en las pruebas de campo fuera el BRSV. Asimismo, se advirtió que una vacuna en una sola 45 dosis no se mostró muy inmunogénica. Evaluaciones posteriores llevaron a la conclusión de que serían esenciales dos dosis de esta vacuna para obtener una buena protección (Bovine Vet. Forum 1, No. 2, págs. 2-16, 1986; Syvrud, y otros, Vet. Med., 429-430, 1988) .

Vet. Immunol. Immunopathol., vol, 22, n° 2, 1989 NL, páginas 145-60, Kimman y otros, describe el cebado para 50 respuestas de memoria de anticuerpo sistémicas y locales al virus sincítico respiratorio bovino y el efecto de la cantidad de virus, replicación del virus, ruta de administración y anticuerpos maternos. J. Clin. Microbiol. vol. 25, no 6, 1987, páginas 1.097-1.106, Kimman y otros, describe la respuesta de anticuerpo sistémica y local a la infección y reinfección por virus sincítico respiratorio bovino en terneras con y sin anticuerpos maternos. Vet. Q. vol. 13, no 1, 1991 NL, páginas 47-59, Baker, da a conocer los mecanismos inmunopatológicos del virus sincítico respiratorio 55 bovino y humano. Semin. Immunol. vol. 2, no 5, 1990 USA, páginas 369-374, Allison y otros, da a conocer formulaciones de coadyuvante y su modo de acción.

La solicitud de patente europea no 129.923 (publicada el 1 de febrero de 1985 y concedida como patente el 9 de julio de 1988) describe un método para preparar una nueva vacuna BRSV viva; dicho método implica disolver la 60 vacuna viva en una vacuna inactivada que contiene uno o más antígenos (particularmente virus de la influenza inactivados) formulada en forma de una emulsión aceite-en-agua. Se obtuvo una respuesta serológica en animales jóvenes que todavía tenían inmunidad materna. La solicitud también describe una preparación viva modificada que incluye el BRSV y un coadyuvante. Sin embargo, no se aportó ningún dato sobre la eficacia protectora de ninguna vacuna BRSV frente a un reto con BRSV.

Un objeto más de la invención es proporcionar un coadyuvante adecuado para utilizar en una vacuna BRSV, donde 5 el coadyuvante aumenta la inmunogenicidad del virus, de manera que cree una inmunidad protectora después de una sola dosis de la vacuna.

Resumen de la invención La invención comprende las utilizaciones tal como se indica en las reivindicaciones adjuntas a la misma.

La invención se refiere asimismo a una composición para aumentar la respuesta inmunitaria, que comprende un copolímero de bloque, tal como un copolímero de bloque de polioxipropileno/polioxietileno (POP/POE) , preferentemente PLURONIC® L121 (por ejemplo, Patente Estadounidense No. 4.772.466) , y un componente orgánico, tal como un aceite metabolizable como, por ejemplo, un hidrocarburo terpénico no saturado, preferentemente el escualano (2, 6, 10, 15, 19, 23-hexametiltetracosano) o el escualeno. La composición también puede incluir un detergente no- iónico o tensioactivo, preferentemente un monooleato de polioxietilensorbitano tal como un detergente Tween®, más preferentemente el Tween®-80, esto es el monooleato de polioxietilen (20) sorbitano.

En esta mezcla madre de coadyuvantes, el copolímero de bloque, el aceite orgánico y el tensioactivo pueden estar presentes en cantidades que oscilan entre alrededor de 10 y alrededor de 40 ml/l, de alrededor de 20 a alrededor de 80 ml/l y de alrededor de 1, 5 a alrededor de 6, 5 ml/l, respectivamente. En una realización preferida del coadyuvante madre, el componente orgánico es el escualano presente en una cantidad de aproximadamente 40 ml/l, el

tensioactivo es el monooleato de polioxietilensorbitano (Tween®-80) presente en una cantidad de aproximadamente 3, 2 ml/l y el copolímero de bloque POP/POE es el Pluronic® L121 presente en una cantidad de aproximadamente 20 ml/l. El Pluronic® L121 es un copolímero líquido a 15-40°C, en el que el componente de polioxipropileno (POP) tiene un peso molecular de 3250 a 4000 y el componente de polioxietileno (POE) comprende aproximadamente del 10-20%, preferentemente del 10%, de la molécula total.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición inmunogénica para inmunizar a un animal frente a la infección por el Virus Sincítico Respiratorio Bovino (BRSV) , que comprende un virus BRS vivo modificado combinado con el coadyuvante anterior y un estabilizante, portador o diluyente, farmacéuticamente aceptable. El coadyuvante está presente en esta composición de vacuna a una concentración final de alrededor del 1-25% (v/v) ,

preferentemente al 5% (v/v) . La composición también puede incluir otros virus, tales como el Virus de la Rinotraqueítis Bovina Infecciona (IBRV) , el Virus de la Diarrea Vírica Bovina (BVDV) y el Virus de la Parainfluenza 3 (PI-3V) , y se puede administrar por las vías intramuscular o subcutánea.

En todavía otro aspecto, se describe un método para proteger a un animal frente a la enfermedad causada por el Virus Sincítico Respiratorio Bovino, administrando una sola dosis de la vacuna anterior, que comprende BRSV vivo modificado y un coadyuvante.

Descripción detallada de la invención 45 Tal como se utiliza aquí, una quot;vacuna viva modificadaquot; es una vacuna que comprende un virus que ha sido alterado típicamente por pases en células de un cultivo de tejidos, con el fin de atenuar su capacidad de provocar la enfermedad, pero que mantiene su capacidad de proteger frente a la enfermedad o la infección,... [Seguir leyendo]

otras linfoquinas y de interferón. La presencia de una inmunidad mediada por células se puede determinar por ensayos in vitro e in vivo convencionales. La inmunidad local, tal como la IgA secretoria, se puede determinar por ensayos ELISA o IFA convencionales que muestran un título de anticuerpos neutralizantes del suero de 1-2 o mayor. De acuerdo con la invención, la inmunidad mediada por células o la inmunidad local, resultante, es específica del, o van asociadas al, BRSV.

1. Composición de vacuna para su utilización en la inmunización de un animal contra infección por Virus Sincitial Respiratorio Bobina (BRSV) que comprende:

un virus BRS vivo modificado, un cocoadyuvante que comprende un copolímero bloque y un aceite metabolizado y un portador farmacéuticamente aceptable, en el que la composición de vacuna contiene de 103, 0 a 106, 0 TCID50/ml de BRSV y es administrada como dosis única.

2. Composición, según la reivindicación 1, en la que el cocoadyuvante comprende un copolímero bloque de 10 polioxipropileno-polioxietileno y un hidrocarburo de terpeno no saturado.

3. Composición, según la reivindicación 2, en la que el hidrocarburo de terpeno no saturado es uno de escualeno y escualano y el copolímero tiene un componente de polioxipropileno con un peso molecular promedio aproximadamente de 3250 a 4000 y el polioxietileno comprende aproximadamente 10-20% de la molécula total.

4. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el copolímero se encuentra presente en una concentración final aproximada de 0, 01 a 1% (v/v) y el componente de hidrocarburo se encuentra presente en una concentración final aproximada de 0, 02 a 2% (v/v)

5. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el cocoadyuvante comprende, adicionalmente, un tensioactivo.

6. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que el cocoadyuvante también comprende un tensioactivo presente a una concentración final de aproximadamente 0, 0015 a 0, 20% (v/v) . 25

7. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en la que el tensioactivo es un monooleato de polioxietilensorbitano.

8. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende además el virus de la rinotraqueítis 30 bovina (BHV-IV) , el virus de la diarrea vírica bovina (BVDV) y el virus 3 de la parainfluenza (PI-3V) .

9. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que la composición es administrada de forma intramuscular, subcutánea, intraperitoneal, oral o intranasal.