Composiciones de vacuna que comprenden lipooligosacáridos de inmunotipo L2 y/o L3 de Neisseria meningitidis de IgtB.

Una preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria derivada de una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L2 o una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L3

, y en la que la cepa es lgtB-, o una preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria que comprende una combinación de vesículas de la membrana externa derivadas de una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L2 y una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L3, en la que cada cepa es lgtB-.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2003/008568.

Solicitante: GLAXOSMITHKLINE BIOLOGICALS S.A..

Nacionalidad solicitante: Bélgica.

Dirección: RUE DE L'INSTITUT 89 1330 RIXENSART BELGICA.

Inventor/es: DENOEL, PHILIPPE, POOLMAN, JAN, FERON,CHRISTIANE, WEYNANTS,VINCENT, BIEMANS,RALPH, GORAJ,CARINE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K39/00 (Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53))
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/04 (Inmunoestimulantes)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que... > C12N1/21 (modificados por la introducción de material genético extraño)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/102 (Pasteurella; Haemophilus)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/095 (Neisseria)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/22 (de Neisseriaceae (F), p. ej. Acinetobacter)

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Fragmento de la descripción:

Composiciones de vacuna que comprenden lipooligosacáridos de inmunotipo L2 y/o L3 de Neisseria meningitidis de IgtB

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de las composiciones de vacunas de Neisseria, su fabricación y la utilización de dichas composiciones en medicina. Más particularmente se refiere a procedimientos para fabricar cepas meningocócicas nuevas genomanipuladas que son más adecuadas para la producción de vacunas de Neisseria, en particular meningocócicas, de vesículas de la membrana externa (o "bleb"). También se describen los procedimientos ventajosos y productos de vacunas a base del uso de nuevas vacunas de subunidades de LOS o de vesículas de la membrana externa meningocócica (o "bleb") que se han mostrado más seguras y más eficaces para uso en sujetos humanos.

Antecedentes de la invención

Neisseria meningitidis (meningococo) es una bacteria Gram negativa aislada frecuentemente del tracto respiratorio superior humano. Es una causa de enfermedades bacterianas invasivas graves tales como bacteremia y meningitis. La incidencia de enfermedad meningocócica muestra diferencias geográficas, estacionales y anuales (Schwartz, B., Moore, P. S., Broome, C. V.; Clin. Microbiol. Rev. 2 (suplemento), S18-S24, 1989). La bacteria se clasifica comúnmente según el serogrupo de su polisacárido capsular.

La mayoría de enfermedades en los países templados se debe a cepas de serogrupo B y varía en incidencia entre 1-1/1./año de total de población alcanzando algunas veces valores más altos (Kaczmarski, E. B. (1977), Común. Dis. Rep. Rev. 7: R55-9, 1995; Scholten, R. J. P. M., Bijlmer, H. A., Poolman, J. T. y col. Clin. Infect. Dis. 16: 237-246, 1993; Cruz, C., Pavez, G., Aguilar, E., y col. Epidemiol. Infect. 15: 119-126, 199).

Las enfermedades epidémicas dominadas por meningococos del serogrupo A, la mayoría en África central, algunas veces alcanzan niveles de incidencia hasta de 1/1./año (Schwartz, B., Moore, P. S., Broome, C. V.; Clin. Microbiol. Rev. 2 (suplemento), S18-S24, 1989). Casi todos los casos como un conjunto de enfermedad meningocócica están ocasionados por meningococos de serogrupos A, B, C, W-135 e Y y se dispone de una vacuna tetravalente de polisacáridos capsulares A, C, W-135 e Y (Armand, J., Arminjon, F., Mynard, M. C., Lafaix, C., J. Biol. Stand. 1: 335-339, 1982).

La frecuencia de infecciones de Neisseria meningitidis han crecido en las pasadas pocas décadas en muchos países de Europa. Esto se ha atribuido a un incremento de transmisión debido a un incremento de actividades sociales (por ejemplo, piscinas, teatros, etc.). Ya no es infrecuente aislar cepas de Neisseria meningitidis que son menos sensibles o resistentes a alguno de los antibióticos convencionales. Este fenómeno ha creado una necesidad médica no cubierta y demanda nuevos agentes antimicrobianos, vacunas, procedimientos de selección de fármacos y ensayos de diagnósticos para este organismo.

Las vacunas disponibles de polisacáridos se están actualmente mejorando por medio de su conjugación química a proteínas portadoras (Lieberman, J. M., Chiu, S. S., Wong, V. K., y col. JAMA 275: 1499-153, 1996).

Sin embargo, no se dispone de una vacuna de serogrupo B. El polisacárido capsular de serogrupo B se ha encontrado que es no inmunogénico muy probablemente porque comparte similar estructura con componentes de hospedador (Wyle, F. A., Artenstein, M. S., Brandt, M. L. y col. J. Infect. Dis. 126: 514-522, 1972; Finne, J. M., Leinonen, M., Mákelá, P. M. Lancet ii.: 355-357, 1983). Por lo tanto se ha fijado el esfuerzo para tratar de desarrollar vacunas de serogrupo B de vesículas de la membrana externa (o "bleb") o componentes proteicos purificados de los mismas.

Los antígenos meningocócicos alternativos para el desarrollo de vacunas son lipooligosacáridos meningocócicos (LOS). Estos son glicolípidos unidos a la membrana externa que se diferencian de los lipopolisacáridos (LPS) de las Enterobacteriáceas por la carencia de las cadenas secundarias O y de este modo se parecen a la forma basta de LPS (Griffis y col., Rev Infect Dis 1988; 1: S287-295). La heterogeneidad dentro del resto de oligosacárido de los LOS genera diversidad estructural y antigénica entre diferentes cepas meningocócicas (Griffiss y col. Inf. Immun. 1987; 55: 1792-18). Esto se ha utilizado para subdividir las cepas en 12 inmunotipos (Scholtan y col. J Med Microbiol 1994, 41:236-243). Los inmunotipos L3, L7, L9 son inmunológicamente idénticos y son estructuralmente similares (o incluso la misma) y, por lo tanto, se han designado por lo tanto L3, 7, 9 (o para los propósitos de esta memoria descriptiva, genéricamente como "L3"). Los LOS meningocócicos L3, 7, 9 (L3), L2 y L5 se pueden modificar mediante sialilación o mediante la adición de ácido citidina 5-monofosfato-N-acetilneuramínico. Aunque los LOS L2, L4 y L6 se pueden distinguir inmunológicamente, son estructuralmente similares y donde se menciona L2 en esta memoria descriptiva, bien L4 o L6 pueden estar opcionalmente sustituidos dentro del alcance de la invención. Los anticuerpos de LOS se ha mostrado que protegen en ratas experimentales contra la infección y contribuyen a la actividad bactericida en niños infectados con N. meningitidis (Griffiss y col. J. Infect Dis 1984; 15: 71-79).

Quakyi y col. (Infect. Immun. 1997 65:1972-1979) dan a conocer cepas meningocócicas con LOS truncados.

Jennings y col. (Mol. Microblol. 1995 18:729-74) dan a conocer un locus para la biosíntesis de la estructura de llpopolisacárido con lacto-N-neotetraosa terminal en menlngocóclcos.

Sin embargo, un problema asociado con el uso de LOS en una vacuna menlngocóclca, es su toxicidad (debida a su resto de lípido A).

Los LOS están también presentes en la superficie de vesículas de la membrana externa meningocócicas. Durante muchos años los esfuerzos se han fijado en desarrollar vacunas a base de vesículas de la membrana externa meningocócica (o vesícula de la membrana externa) (de Moraes, J. C., Perkins, B., Camargo, M. C. y col Lancet 34: 174-178, 1992; Bjune, G., Hoiby, E. A. Gronnesby, J. K. y col 338: 193-196, 1991). Dichas vacunas tienen la ventaja de incluir diversas proteínas de la membrana externa integrales en una conformación plegada adecuadamente que puede provocar una respuesta inmunológica protectora cuando se administra a un hospedador. Además, las cepas de Neissería (incluyendo N. meningitidis serogrupo B-menB) excretan vesículas de la membrana externa de membranas externa en cantidades suficientes para permitir su producción a escala industrial. Sin embargo, más a menudo las vesículas de la membrana externa se preparan mediante procedimientos que comprenden una extracción con ,5 % de detergente (por ejemplo, desoxicolato) de las células bacterianas (por ejemplo, el documento EP 11243). Aunque esto se desea debido a la toxicidad de LOS (también llamada endotoxina), como se ha descrito anteriormente, también tiene el efecto de eliminar la mayoría del antígeno de LOS de la vacuna..

Un problema adicional con el uso de LOS como antígeno de vacuna es que los 12 inmunotipos de LPS existen con un intervalo diverso de estructuras de carbohidratos (M. P. Jennings y col., Microbiology 1999, 145, 313-321). Los anticuerpos que surgen contra un inmunotipo fracasan para reconocer un inmunotipo diferente. Aunque se ha fijado el esfuerzo para producir una región "central" genérica de las porciones de oligosacárido de los inmunotipos de LOS (por ejemplo, el documento WO 94/821), la actividad bactericida de los anticuerpos generados contra los LOS modificados se pierde. De este modo una vacuna puede necesitar tener muchos componentes de LOS de inmunotipos diferentes para ser eficaz.

Existe un problema adicional con el uso de... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria derivada de una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L2 o una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L3, y en la que la cepa es IgtB", o una preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria que comprende una combinación de vesículas de la membrana externa derivadas de una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L2 y una cepa de Neisseria con un inmunotipo LOS L3, en la que cada cepa es IgtB".

2. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 1, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria son meningocócicas.

3. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 2, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria son del serogrupo B.

4. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 1-3, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria no pueden sintetizar polisacárido capsular.

5. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 4, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tlene(n) uno de los siguientes genes de polisacárido capsular regulados hacia niveles menores de expresión en comparación con la(s) cepa(s) nativa(s) a partir de las que se derivan: ctrA, ctrB, ctrC, ctrD, synA, synB, synC o siaD

6. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 5, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tlene(n) uno de dichos genes de polisacárido capsular suprimido.

7. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 5 o 6, en la que están presentes ambas vesículas de la membrana externa L2 y L3, que se derivan de cepas que tienen el mismo gen de polisacárido capsular regulado hacia niveles menores de expresión en cada cepa.

8. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 1-7, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tiene(n) cualquier o ambos de los siguientes genes de lípido A regulado hacia niveles menores de expresión en comparación con la(s) cepa(s) nativa(s) a partir de las que se derivan: msbB o htrB.

9. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 8, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tiene(n) msbB regulado hacia niveles menores de expresión.

1. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 8 o 9, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tiene(n) cualquier o ambos de los genes de lípido A suprimidos.

11. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 8-1, en la que están presentes ambas vesículas de la membrana externa L2 y L3, que se derivan de cepas que tienen el(los) mismo(s) gen(es) de lípido A regulado(s) hacia niveles menores de expresión en cada cepa.

12. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 1-11, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tiene(n) 1 o más de los siguientes genes de proteína de membrana externa regulados hacia niveles menores de expresión en comparación con la(s) cepa(s) natlva(s) a partir de las que se derivan: porA, porB, opA, opC, pilC o frpB.

13. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 12, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tiene(n) uno o más de dichos genes de proteína de membrana externa suprimidos.

14. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 12 o 13, en la que están presentes ambas vesículas de la membrana externa L2 y L3, que se derivan de cepas que tienen el(los) mlsmo(s) gen(es) de proteína de membrana externa regulado(s) hacia niveles menores de expresión en cada cepa.

15. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 12-14, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tlene(n) cualquiera de las combinaciones siguientes de genes de proteína de membrana externa regulados hacia niveles menores de expresión en comparación con la(s) cepa(s) natlva(s) a partir de las que se derivan: PorA y OpA, PorA y OpC, OpA y OpC, PorA y OpA y OpC, PorA y FrpB, OpC y FrpB, OpA y FrpB, PorA y OpA y OpC y FrpB.

16. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 15, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tlene(n) cualquiera de dichas combinaciones de genes de proteína de membrana externa suprimidas.

17. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de las reivindicaciones 1-16, en la que la(s) cepa(s) de Neisseria tlene(n) 1 o más de los siguientes antígenos de proteína de membrana externa regulados hacia niveles mayores de expresión: NspA, TbpA bajo, TbpA alto, Hsf, Hap, OMP85, PilQ, NadA, LbpA, MltA.

18. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 17, en la que están presentes ambas vesículas de la membrana externa L2 y L3, que se derivan de cepas que tienen uno o más antígenos de proteína de membrana externa diferentes regulados hacia niveles mayores de expresión en cada cepa.

19. Una preparación de LOS aislada a partir de una(s) cepa(s) de Neisseria a partir de la(s) que se derivan las preparaciones de vesículas de la membrana externa de Neisseria de una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, y que comprende inmunotipo LOS L2 y/o L3.

2. La preparación de LOS de la reivindicación 19 en una formulación de liposomas.

21. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de una cualquiera de las reivindicaciones 1- 18 o la preparación de LOS de la reivindicación 19 o 2, en la que el LOS contenido en la misma se conjuga con una fuente de epítopos de células T colaboradoras.

22. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 21, en la que la fuente de epítopos de células T colaboradoras es una proteína o proteína de membrana externa.

23. La preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 22, que es obtenible mediante un procedimiento de reticulación intra-vesícula de la membrana externa.

24. Una composición o vacuna inmunogénica que comprende la preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria o la preparación de LOS de una cualquiera de las reivindicaciones 1-23, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

25. La vacuna de la reivindicación 24, que comprende adicionalmente un adyuvante.

26. La vacuna de la reivindicación 25, en la que el adyuvante es hidróxido de aluminio, o 3D-MPL y fosfato de aluminio.

27. La vacuna de la reivindicaciones 24-26 que comprende adicionalmente uno o más polisacáridos u oligosacáridos capsulares conjugados derivados de las cepas siguientes: meningococo serogrupo A, meningococo serogrupo C, meningococo serogrupo W-135, meningococo serogrupo Y, y H. influenzae tipo b.

28. Un procedimiento de fabricación de vacuna de preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria de la reivindicación 24, que comprende las etapas de cultivar la(s) cepa(s) de Neisseria a partir de la(s) que se derivan las preparaciones de vesículas de la membrana externa de Neisseria de una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, aislar las vesículas de la membrana externa de las mismas, y formular las vesículas de la membrana externa con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

29. El procedimiento de la reivindicación 28, en el que la etapa de aislamiento se lleva a cabo mediante extracción con -,5, ,2-,4, ,4-,3, ,6-,2 o ,8-,15 % de desoxicolato.

3. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que la etapa de aislamiento se lleva a cabo mediante extracción con aproximada o exactamente ,1 % de desoxicolato.

31. Una vacuna de preparación de vesículas de la membrana externa de Neisseria preparada mediante el procedimiento de las reivindicaciones 28-3.