UTILIZACIÓN DE ANTÍGENOS A33 Y JAM-IT.

Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA,

en el que el polipéptido comprende la secuencia del dominio extracelular (ECD) de un polipéptido STlgMA fusionado a una secuencia de región constante de inmunoglobulina, en el que el polipéptido STIgMA tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en las SEC ID NOs: 32, 33 y 34, con o sin la secuencia señal nativa, con o sin la metionina de iniciación, con o sin toda o parte del dominio transmembrana potencial y con o sin el dominio intracelular

Utilización de antígenos A33 y JAM-IT.

Antecedentes de la invención Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere en general a la identificación, aislamiento y producción recombinante de ADN novedoso y polipéptidos novedosos, la presencia de los cuales está asociada con enfermedades inflamatorias (antígenos asociados con la inflamación) y/o cáncer, y a composiciones y procedimientos para el diagnóstico y el tratamiento de condiciones caracterizadas por dichos antígenos.

Descripción de la técnica relacionada [0002] La respuesta inflamatoria es compleja y está mediada por una serie de moléculas de señalización producidas de forma local por mastocitos, terminaciones nerviosas, plaquetas, leucocitos y activación de complementos. Ciertas moléculas de señalización provocan que el recubrimiento de células endoteliales se vuelva más poroso y/o incluso expresen selectinas que actúan como moléculas de la superficie celular que reconocen y atraen leucocitos a través del reconocimiento de carbohidratos específicos. La unión más fuerte de los leucocitos está mediada por las integrinas, las cuales median en el movimiento de los leucocitos a través del endotelio. Las moléculas de señalización adicionales actúan como quimioatractores, provocando que los leucocitos unidos avancen lentamente hacia la fuente del atractor. Otras moléculas de señalización producidas en la evolución de una respuesta inflamatoria escapan a la sangre y estimulan la médula ósea para que produzca más leucocitos y se liberen al torrente sanguíneo.

La inflamación es iniciada habitualmente por un antígeno, el cual puede ser a la práctica cualquier molécula capaz de iniciar una respuesta inmune. En condiciones fisiológicas normales éstas son moléculas exógenas, pero las moléculas generadas por el propio organismo pueden servir como catalizadores tal como se sabe que pasa en varios estados de la enfermedad.

La proliferación de células T en un cultivo mixto de leucocitos o una reacción linfocitaria mixta (MLR) es una indicación establecida de la capacidad de un compuesto para estimular el sistema inmune. En una respuesta inflamatoria, los leucocitos de respuesta pueden ser neutrofílicos, eosinofílicos, monocíticos o linfocíticos. El examen histológico de los tejidos afectados proporciona evidencias de una respuesta estimulante o inhibidora inmune. Ver Current Protocols in Immunology, ed. John E. Coligan, 1994, John Wiley and Sons, Inc.

La enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) es un término utilizado para describir colectivamente trastornos de los intestinos que incluyen tanto la colitis ulcerativa (UC) como la enfermedad de Crohn, ambas clasificadas como trastornos diferentes, pero comparten características comunes y probablemente comparten patología. Lo común del criterio de diagnóstico dificulta determinar con precisión cuál de los dos trastornos sufre el paciente; sin embargo, el tipo y la localización de la lesión son habitualmente diferentes en cada uno. Las lesiones de la UC son de forma característica una úlcera superficial de la mucosa y aparecen en el colon, proximal al recto. Las lesiones de la CD son de forma característica fisuras lineales extensas y pueden aparecer en cualquier parte del intestino, implicando ocasionalmente el estómago, el esófago y el duodeno.

Los tratamientos convencionales para IBD implican habitualmente la administración de agentes antiinflamatorios o inmunosupresores, tales como sulfasalacina, corticosteroides, 6-mercaptopurina/azatropina o ciclosporina, todos ellos sólo aportan un alivio parcial al paciente afectado. Sin embargo, cuando fallan las terapias antiinflamatorias/inmunosupresoras, las colectomias son la última línea de defensa. La cirugía es requerida para aproximadamente el 30% de los pacientes de CD durante el primer año después del diagnóstico, con un aumento de la probabilidad para un procedimiento quirúrgico de aproximadamente un 5% anualmente desde ese momento. Desafortunadamente, la CD también tiene una tasa elevada de reaparición, ya que aproximadamente un 5% de los pacientes requieren cirugía posterior después del año inicial. Los pacientes de UC tienen además un riesgo sustancialmente creciente de desarrollar cáncer colorrectal. Presumiblemente, esto es debido a los ciclos recurrentes de lesión en el epitelio, seguido de un recrecimiento que aumenta continuamente el riesgo de transformación neoplásica.

Un miembro recientemente descubierto de la superfamilia de inmunoglobulinas conocida como Molécula de Adhesión de Unión (JAM) se ha identificado que está selectivamente concentrada en las uniones intercelulares de células endoteliales y epiteliales de orígenes diferentes. Martin-Padura, I. et al., J. Cell Biol. 142 (1) : 117-27 (1998) .

JAM es una proteína de membrana integral del tipo I con dos bucles disulfuro extracelulares entre cadenas del tipo V. JAM porta una sustancial homología con el antígeno A33 (figura 1 o figura 18) . Se observó que un anticuerpo monoclonal dirigido a JAM inhibía la transmigración de monocitos espontánea e inducida por quimioquinas a través de una monocapa de células endoteliales in vitro. Martin-Padura, supra. Recientemente se ha descubierto que aumenta la expresión de JAM en el colon de ratones CRF2-4 -/- con colitis. CRF2-4 -/- (ratones knockout de subunidades IL-10R) desarrollan una colitis espontánea mediada por linfocitos, monocitos y neutrófilos. Varios animales también desarrollaron adenocarcinoma de colon. Como resultado, es probable que los compuestos de la presente invención se expresen en niveles elevados en, o en cualquier caso, asociados con enfermedades humanas, tales como la enfermedad inflamatoria de intestino, otras enfermedades inflamatorias de intestino, así como carcinoma colorrectal.

JAM y los polipéptidos aquí descritos portan una homología significativa con el antígeno A33, un conocido marcador asociado con el cáncer colorrectal. El antígeno A33 se expresa en más del 90% de los cánceres de colon primarios o metastáticos, así como epitelio de colon normal. En los carcinomas que se originan de la mucosa colónica, el antígeno A33 se expresa de forma homogénea en más de un 95% de los casos. Sin embargo, el antígeno A33 no se ha detectado en un amplio rango de otros tejidos normales, es decir, su expresión parece ser específico de órgano. Por lo tanto, el antígeno A33 parece jugar un papel importante en la inducción del cáncer colorrectal.

Dado que el cáncer de colon es una enfermedad ampliamente extendida, el diagnóstico y tratamiento precoz es un objetivo médico importante. El diagnóstico y tratamiento del cáncer de colon se puede llevar a cabo utilizando anticuerpos monoclonales (mAbs) específicos que tienen por tanto etiquetas (tags) fluorescentes, magnéticos nucleares o radioactivos. Se pueden utilizar mAbs etiquetados con genes radioactivos, toxinas y/o fármaco para el tratamiento in situ con la descripción mínima del paciente. Los mAbs también se pueden utilizar para el diagnóstico durante el diagnóstico y el tratamiento de los cánceres de colon. Por ejemplo, cuando los niveles en suero del antígeno A33 son elevados en un paciente, una caída de los niveles después de la cirugía indicaría que la resección del tumor fue un éxito. Por otro lado, un aumento posterior en los niveles de antígeno A33 en el suero después de la cirugía indicaría que podría haberse formado la metástasis del tumor original o que podrían haber aparecido nuevos tumores primarios.

Dichos anticuerpos monoclonales se pueden utilizar en lugar de, o conjuntamente con cirugía y/u otras quimioterapias. Por ejemplo, los análisis preclínicos y los estudios de localización en pacientes infectados con carcinoma colorrectal con un mAb para A33 se describen en Welt et al., J. Clin. Oncol. 8: 1894-1906 (1990) y Welt et al., J. Clin. Oncol. 12: 1561-1571 (1994) , mientras que U.S.P. 4.579.827 y U.S.S.N. 424.991 (E.P. 199.141) están dirigidos a la administración terapéutica de anticuerpos monoclonales, el último de los cuales se refiere a la aplicación de mAb anti-A33.

El documento WO00/37638 describe métodos y composiciones para inhibir el crecimiento de células neoplásicas. Se describe un polipéptido... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA, en el que el polipéptido comprende la secuencia del dominio extracelular (ECD) de un polipéptido STlgMA fusionado a una secuencia de región constante de inmunoglobulina, en el que el polipéptido STIgMA tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en las SEC ID NOs: 32, 33 y 34, con o sin la secuencia señal nativa, con o sin la metionina de iniciación, con o sin toda o parte del dominio transmembrana potencial y con o sin el dominio intracelular.

2. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido STIgMA tiene por lo menos un 85% ó 90% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NOs: 32, 33 ó 34.

3. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según la reivindicación 2, en el que dicho polipéptido STIgMA tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NOs: 32, 33 ó 34.

4. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según la reivindicación 3, que comprende la secuencia del dominio extracelular (ECD) de un polipéptido STIgMA seleccionado del grupo que consiste en las SEC ID NOs: 32, 33 y 34, fusionada a una secuencia de región constante de inmunoglobulina.

5. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la secuencia ECD está esencialmente libre del dominio transmembrana y el dominio citoplasmático de dicho polipéptido STIgMA.

6. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según la reivindicación 5, en el que la secuencia ECD comprende los residuos de aminoácidos:

1 o aproximadamente 21 a X de SEC ID NO:32, donde X es cualquier aminoácido desde aproximadamente 271 a 281; 1 o aproximadamente 21 a X de SEC ID NO:33, donde X es cualquier aminoácido desde aproximadamente 178 a 186; o 1 o aproximadamente 21 a X de SEC ID NO:34, donde X es cualquier aminoácido desde aproximadamente 176 a 184.

7. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la inmunoglobulina es una IgG.

8. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según la reivindicación 7, en el que la inmunoglobulina es una IgG1 o IgG3.

9. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la enfermedad inflamatoria es una enfermedad inflamatoria crónica.

10. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la enfermedad inflamatoria es una enfermedad inflamatoria del tipo Th2.

11. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide; enfermedad inflamatoria del intestino; hepatitis crónica; pneumania; asma crónica y bronquitis.

12. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, para utilizar en el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica.

13. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, para utilizar en el tratamiento de la artritis reumatoide.

14. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de

STlgMA según la reivindicación 13, para utilizar en el alivio de la inflamación, hinchamiento y/o erosión ósea a largo plazo en las articulaciones.

15. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, para utilizar en el tratamiento de aterosclerosis.

16. Polipéptido para utilizar en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STlgMA según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la enfermedad inflamatoria no es microbiana.

17. Utilización de un polipéptido tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria asociada con la sobreexpresión de STIgMA.

18. Utilización según la reivindicación 17, en el que la enfermedad inflamatoria es tal como se define en cualquiera 15 de las reivindicaciones 9 a 16.

Figura 1A

FIGURA 8

FIGURA 4A

FIGURA 4B 92

Marco Valoración Emparejamiento %Precursor de antígeno A33 – Homo Sapiens +1 246 81 30

A33_human – precursor de antígeno A33 – Homo sapiens (310 aa)

Valoración = 246 (86, 6 bits) , Esperado =2, 8e-19, P=2, 8e-19Identidades = 81/268 (30%) , Positivos =131/268 (48%) a 121, 17, Marco = +1 Valoración = 245 (86, 2 bits) , Esperado =3, 6e-19, P = 3, 6e-19Identidades = 83/273 (30%) , Positivos = 131/273 (47%) a 112, 12, Marco = +1

Figura 22

Sinovia con RA

HEV de nódulo linfático HEV de amígdalas

Recuento Recuento

Recuento Recuento 450D.O.

[JAM2-Fc-Biotina]

Figura 56 STIgMA murino en cromosoma XSTIgMA humano en cromosoma X

Sin estimulación