UTILIZACIÓN DE UNA CONSTRUCCIÓN GENICA Y/O PEPTÍDICA PARA LA FABRICACIÓN DE UNA VACUNA PARA LA PREVENCIÓN Y/O TRATAMIENTO DE LA INFECCIÓN CAUSADA POR EL VIRUS DE LA PESTE PORCINA AFRICANA (VPPA).

Utilización de una construcción génica y/o peptídica para la fabricación de una vacuna para la prevención y/o tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA).

La presente invención se refiere a la utilización de una construcción génica y/o peptídica para la fabricación de una vacuna para la prevención y/o tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA). Así mismo, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica y a una vacuna que comprenden la construcción génica y/o peptídica.

Utilización de una construcción génica y/o peptídica para la fabricación de una vacuna para la prevención y/o tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA)

Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de los virus, en particular al virus de la peste porcina africana (VPPA) .

Antecedentes de la invención Una de las enfermedades que mayores pérdidas económicas causa en los países que la sufren es la peste porcina africana, por su repercusión en el ganado porcino y lo que conlleva para la cadena alimenticia. A pesar de que la enfermedad ha estado limitada en la última década a los países del Africa subsahariana, con la excepción de la isla de Cerdeña, desde el año 2007 ha reentrado en el continente Europeo y desde entonces está en continua expansión. Actualmente, el riesgo de que la enfermedad resulte endémica para el Cáucaso es muy elevado y la amenaza de que se extienda a la Unión Europea aumenta día a día (www.fao.org) . El hecho de que el virus que causa esta enfermedad (el VPPA) infecte tanto cerdos domésticos como salvajes (jabalíes) , así como a garrapatas del género Ornithodoros complica aún más su control.

Actualmente no existe ninguna vacuna ni tratamiento eficaz contra esta enfermedad. La única medida de control consiste en el diagnóstico eficaz de los brotes y el sacrificio de todos los animales afectados o en contacto con el virus, medida cada día más discutida desde el punto de vista ético y económico y del todo inviable en los países más pobres.

Mediante la presente invención se consigue una consistente protección frente a la infección letal con el VPPA (en el ejemplo aquí presentado, la protección se consiguió inicialmente mediante la vacunación con ADN) . Aunque la protección sólo afecta a una proporción de los animales vacunados experimentalmente, nuestros datos permiten ser

muy optimistas en cuanto al futuro diseño de vacunas más “universales” frente al VPPA.

Las vacunas ADN se basan en la inmunización con un plásmido que contiene la información genética de uno o varios genes o fragmentos de genes que codifican proteínas (o fragmentos de proteínas) inmunogénicas de uno o más patógenos determinados, frente al que (o a los que) se desea inducir una respuesta inmune protectora en el sujeto vacunado. Dicho plásmido actúa como un vector que vehiculiza la introducción de la información genética de interés al interior de las células del hospedador para su expresión, procesamiento y presentación al sistema inmune, en lo que sería una imitación de lo que ocurre durante la infección con el patógeno completo. La respuesta inmune generada, humoral y/o celular, prepara al sujeto vacunado para contrarrestar una infección con el patógeno, de manera que su utilización de forma profiláctica constituye una potencial herramienta a aplicar, sobre todo en aquellas enfermedades que requieren ambas ramas de la respuesta inmune, tales como las causadas por virus.

Los presentes inventores han identificado que la protección conferida (en nuestro ejemplo, tras la vacunación con ADN codificando tres antígenos virales) , viene mediada por la fracción extracelular de la hemaglutinina del VPPA (secuencia de aminoácidos comprendida entre las posiciones 21 y 204 de la hemaglutinina del VPPA; a partir de ahora referida como sHA) , y sorprendentemente además, que dicha protección viene mediada por la inducción de una respuesta T-CD8 citotóxica específicamente dirigida contra al menos 3 péptidos concretos de la sHA (secuencias R2F3, R3A3 y R3A6) . No obstante es posible que puedan existir otras secuencias a las que se pueda dirigir la respuesta T-CD8 citotóxica. La utilización de estos tres péptidos sintéticos como vacuna ratificó su potencial protectivo frente al desafío con el VPPA.

A pesar de que el potencial protectivo de la Hemaglutinina completa del VPPA, ya había sido descrito con anterioridad por nuestro grupo (Functional and immunological properties of the baculovirus-expressed hemagglutinin of African swine fever virus. Ruiz-Gonzalvo F, Rodríguez F, Escribano JM.Virology. 1996; 218:285-9.) , ésta fue obtenida tras inmunizar a los animales con células de insecto infectadas con un baculovirus recombinante expresando la hemaglutinina completa, y en presencia del adyuvante de Freund. Además de resultar inviable su utilización en el campo, no se identificó ninguna secuencia concreta de la hemaglutinina completa como responsable de dicha protección, ni los mecanismos exactos responsables de la misma, ni mucho menos se evaluó la inducción de una respuesta T- específica en los animales.

Del mismo modo, y a pesar de que la sHA (la misma que aquí se utiliza) , ya había sido utilizada con anterioridad en experimentos de inmunización en cerdos, únicamente había sido incluida como adyuvante inmunológico (EMPLEO DE LA HEMAGLUTININA DEL VIRUS DE LA PESTE PORCINA AFRICANA COMO ADYUVANTE; PCT/ES2008/000264) ; es decir, para mejorar la respuesta inmunológica frente a otros antígenos distintos fusionados a ella.

La presente invención se basa en la utilización de la sHA, y/o de los péptidos CTL en ella identificados en el diseño de vacunas contra la VPPA. Nuestras evidencias experimentales demuestran que para que la sHA resulte protectiva, es estrictamente necesario que ésta induzca una respuesta T-CD8 específica, algo que queda demostrado en la presente invención: a) con la fusión de ubiquitina a la sHA y b) Inmunizando con los péptidos (nonámeros) aquí descritos.

Evidencias experimentales disponibles en el laboratorio demuestran que el poder adyuvante requiere la presencia intacta de la sHA, mientras que para la inducción de una respuesta T-citotóxica, la sHA ha de ser degradada intracelularmente.

Un primer objetivo de la presente invención es obtener una construcción génica o péptidica que puedan ser utilizadas para la obtención de una vacuna frente al VPPA, de manera que se pueda prevenir y/o tratar la infección por dicho virus.

Un segundo objetivo de la presente invención es obtener una composición farmacéutica para la prevención y/o tratamiento de la infección causada por el virus VPPA.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1A) representa el porcentaje de supervivencia a la infección letal con VPPA tanto en el grupo de los animales inmunizados con pCMV-UbsHAPQ como en el grupo control y la figura 1B) Cinética de depleción de células T-CD8 detectada en ambos grupos de animales tras la infección con VPPA. Únicamente los animales supervivientes (inmunizados con pCMV-UbsHAPQ) muestran un pico de expansión de células T-CD8 observado a día 3 post-infección y la recuperación de éste subset celular.

La figura 2A) representa el número de células T específicas por cada millón de PBMCs, presente en los animales supervivientes (inmunizados con pCMV-UbsHAPQ) a la infección con el VPPA. La frecuencia de células T específicas frente a cada uno de los péptidos identificados dentro de la secuencia de la sHA se midió mediante un ELISPOT de IFNγ. La figura 2B representa el porcentaje de supervivencia a la infección letal con VPPA tanto en el grupo de los animales inmunizados con una mezcla de los tres péptidos sintéticos identificados en A, como en el grupo control.

Descripción de la invención La presente invención se refiere en un primer aspecto a la utilización de una construcción génica que expresa un polipéptido que comprende la sHA del VPPA para la fabricación de una vacuna o composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA) o a una construcción génica que expresa un polipéptido que comprende la sHA del VPPA para utilizar en la fabricación de una vacuna para la prevención y/o el tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA) .

En la presente invención, el término “comprende” o cualquiera de sus derivados, se refiere a un grupo abierto, es decir, no queda limitado por los elementos indicados a continuación del término “comprende” o cualquiera de sus derivados.

El término "VPPA", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere al virus de la peste porcina africana (VPPA) e incluye cualquier cepa de VPPA que circule, haya circulado o circule en el futuro independientemente de su procedencia geográfica, por ejemplo, la cepa española España 75 (E75) , una cepa altamente virulenta o la cepa Georgia 2007 (secuenciada) circulante en Georgia (Chapman DA et al. Genomic analysis of highly virulent Georgia 2007/1 isolate of African swine fever virus. Emerg Infect Dis. 2011 Apr, 17 (4)... [Seguir leyendo]

1. Utilización de una construcción génica que expresa un polipéptido que comprende la sHA del VPPA para la fabricación de una vacuna o una composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA) .

2. Utilización, según la reivindicación 1, en la que dicho dominio extracelular comprende por lo menos uno entre:

a) el péptido R2F3 de SEC ID No. 1;

b) el péptido R3A3 de SEC ID No. 2;

c) el péptido R3A6 de SEC ID No. 3.

3. Utilización según la reivindicación 1 ó 2, que además comprende uno o más adyuvantes.

4. Utilización según la reivindicación 3, en la que dicho uno o más adyuvantes son potenciadores de la presentación antigénica de los péptidos en el complejo mayor de histocompatibilidad de clase I (MHCI) .

5. Utilización según la reivindicación 4, en la que el adyuvante es ubiquitina.

6. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en la que la construcción génica está comprendida en un vector.

7. Utilización de una construcción peptídica que comprende la sHA del VPPA para la fabricación de una vacuna o una composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de la infección causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA) .

8. Utilización según la reivindicación 7, en la que dicho dominio extracelular comprende por menos un entre:

a) el péptido R2F3 de SEC ID No. 1;

b) el péptido R3A3 de SEC ID No. 2;

c) el péptido R3A6 de SEC ID No. 3.

9. Utilización según la reivindicación 7 u 8, que además comprende uno o más adyuvantes.

10. Utilización según la reivindicación 9, en la que dicho uno o más adyuvantes son potenciadores de la presentación antigénica de los péptidos en el complejo mayor de histocompatibilidad de clase I (MHCI) .

11. Utilización según la reivindicación 10, en la que el adyuvante es ubiquitina.

12. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la que la construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, la construcción peptídica según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11 o el vector según la reivindicación 6, están contenidos en una célula hospedadora.

13. Composición farmacéutica que comprende una construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, la construcción peptídica según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, el vector según la reivindicación 6 o la célula hospedadora según la reivindicación 12, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. Vacuna que comprende una construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, la construcción peptídica según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, el vector según la reivindicación 6 o la célula hospedadora según la reivindicación 12.

º

FIGURA 1A

FIGURA 1B FIGURA 2A FIGURA 2B LISTADO DE SECUENCIAS

<110> FUNDACIÓ CENTRE DE RECERCA EN SANITAT ANIMAL

<120> CONSTRUCCIÓN GENICA Y/O PEPTÍDICA PARA LA OBTENCION DE UNA VACUNA PARA LA PREVENCIÓN Y/O TRATAMIENTO DE LA INFECCIÓN CAUSADA POR EL VIRUS DE LA PESTE PORCINA AFRICANA (VPPA)

<130> P26002ES00

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Dominio extracelular de la hemaglutinina (HA) del virus de la peste porcina africana (VPPA)

<400> 1

Ser Val Asp Ser Pro Thr Ile Thr Tyr 1 5

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial sequence <220>

<223> Dominio extracelular de la hemaglutinina (HA) del virus de la peste porcina africana (VPPA)

<400> 2

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<210> 3

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<213> Artificial sequence <220>

<223> Dominio extracelular de la hemaglutinina (HA) del virus de la peste porcina africana (VPPA)

<400> 3

Thr Asn Gly Asp Ile Leu Asn Tyr Tyr