USOS DE LA PRUEBA DE REDUCCIÓN DEL NITRO-AZUL DE TETRAZOLIO.

Usos de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio.

La invención se refiere a los usos de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio para el seguimiento clínico de la leishmaniosis canina.

La invención también se refiere al uso de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio para la determinación del porcentaje de monocitos y neutrófilos activados y para la determinación y monitorización de la respuesta inmune en perros sanos.

USOS DE LA PRUEBA DE REDUCCIÓN DEL NITRO-AZUL DE TETRAZOLIO

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención

La invención se refiere a los usos de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio para el seguimiento clínico de la leishmaniosis canina.

Descripción de la técnica relacionada La leishmaniosis canina es una parasitosis que es endémica en los países de la cuenca mediterránea en los que la seroprevalencia puede alcanzar un valor del 48, 4% (Alvar et al. 2004, Paradies et al 2006) .

Los parásitos Leishmania, de manera similar a lo que se ha descrito para otros agentes patógenos intracelulares, pueden sobrevivir y reproducirse en el organismo de perros infectados gracias a su capacidad para desviar la respuesta inmunitaria de tipo celular (Th1) a la respuesta inmunitaria de tipo humoral (Th2) . En realidad, la evolución clínica de la enfermedad depende principalmente de la respuesta inmunitaria desarrollada por el animal una vez se ha infectado. Por tanto, un animal infectado resistirá la evolución de la enfermedad mientras consiga mantener un predominio de la respuesta inmunitaria celular (Th1) , con una producción marcada de citocinas de tipo Th1, tales como interferón gamma o interleucina IL-2, que son responsables de la activación de los macrófagos y, a través de ello, de su potencial leishmanicida. Por el contrario, cuando la respuesta humoral (Th2) se vuelve predominante, lo que puede suceder inmediatamente tras la infección o tras un periodo de tiempo de resistencia a la evolución de la enfermedad más o menos prolongado, el animal sucumbe a la enfermedad y comienza a presentar signos clínicos que pueden incluso conducir a la muerte (Chamizo et al. 2005, Brachelente et al. 2005) .

En los perros, la resistencia a la enfermedad parece estar asociada a un cierto equilibrio entre las respuestas Th1 y Th2 aunque la respuesta celular (Th1) parece predominar. En especies

tales como el ratón, la evolución de la enfermedad o la resistencia del animal a la enfermedad depende de una completa polarización de la respuesta inmunitaria hacia la humoral (Th2)

o la celular (Th1) , respectivamente. (Chamizo et al. 2005, Brachelente et al. 2005)

Por tanto, la evolución de la enfermedad parece deberse a una alteración del equilibrio entre la respuesta inmunitaria de tipo celular (Th1) y la respuesta inmunitaria de tipo humoral (Th2) .

El documento ES 2246142 describe el efecto de la domperidona en el tratamiento de leishmaniosis, administrada a una dosis de 2 mg/kg/día en perros infectados con L. Infantum, por medio del restablecimiento del equilibrio entre la respuesta inmunitaria de tipo celular (Th1) y la respuesta inmunitaria de tipo humoral (Th2) a través de un aumento de los niveles sanguíneos de prolactina. Muestra que, a esta dosis, la domperidona puede reducir los signos clínicos de la leishmaniosis y/o reducir el nivel de anticuerpos en los animales infectados.

Hasta lo que se sabe, no ha habido ningún intento en el estado de la técnica de tratar o prevenir la leishmaniosis en mamíferos sanos o infectados usando domperidona a un régimen de dosis inferior a 2 mg/kg/día. Tampoco se sabe de ningún método de prevención o tratamiento usando domperidona a un régimen de dosis inferior a 2 mg/kg/día durante la fase latente de la enfermedad o durante brotes o acontecimientos secundarios de la enfermedad.

En Merck 1997, se describe una dosis recomendada de domperidona de 1 mg/kg/día, sin embargo, este régimen de dosis está restringido a una indicación diferente, concretamente como agente antiemético en perros y no para el tratamiento de leishmaniosis.

El artículo de revisión sobre la Leishmaniosis canina y sus abordajes terapéuticos, recientemente publicado por un grupo de expertos en esta enfermedad a nivel mundial (Solano-Gallego et

al. 2009. Vet Parasitol, 165:1-18) menciona, al referirse al

empleo de la serología (titulación de anticuerpos frente a Leishmania) en la monitorización de los tratamientos convencionales (entre ellos con Alopurinol) de la enfermedad, que la disminución del título de anticuerpos no suele observarse hasta transcurridos 6 meses (180 días) del inicio del tratamiento.

“Estudios recientes han demostrado una disminución lenta y progresiva en los niveles de anticuerpos IgG e IgA que está asociada con mejoría clínica. Por lo tanto, recomendamos repetir una prueba serológica cuantitativa en el mismo laboratorio 6 meses después del tratamiento inicial debido a la vida media relativamente larga de la IgG” (página 12) .

“Algunos perros presentarían una disminución significativa de los niveles de anticuerpos asociados con mejoría clínica dentro de los 6 meses a 1 año de tratamiento, mientras que otros podrían no tener una disminución en los títulos de anticuerpos a pesar de la mejoría clínica” (página 12) .

Sería de gran interés desarrollar un uso mejorado de la domperidona para el tratamiento de leishmaniosis o un método de tratamiento de leishmaniosis que permitiera disminuir la toxicidad innecesaria del principio activo, manteniendo la misma eficacia del medicamento observada a los regímenes de dosis más alta descritos en el estado de la técnica y/o que permitiera una disminución más rápida del título de anticuerpos en los mamíferos tratados.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente memoria describe el hallazgo de que la domperidona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma pueden usarse en un régimen de dosificación o régimen de dosis, que implica cantidades diarias totales bastante por debajo de las sugeridas hasta el momento en la técnica para prevenir y/o tratar una enfermedad asociada a una disminución de la respuesta inmunitaria. El uso de niveles de dosificación más bajos puede permitir la minimización de la aparición de efectos adversos.

Además, se ha encontrado también que, de modo sorprendente, los regímenes de dosificación divulgados en la presente memoria permiten lograr una disminución más rápida de los títulos de anticuerpos en los sujetos tratados que la conseguida mediante los tratamientos descritos en el estado de la técnica.

Por tanto, un aspecto que no es objeto de la presente invención está dirigido a un método de tratamiento o prevención de leishmaniosis en mamíferos sanos o infectados usando domperidona con un régimen de dosificación de 0, 2-1 mg/kg/día que tiene una eficacia igual o mayor que la conseguida con los regímenes de dosis conocidos en los métodos de tratamiento o prevención existentes del estado de la técnica.

Otro aspecto que no es objeto de la presente invención está dirigido también a preparar formulaciones de domperidona para el tratamiento o la prevención de leishmaniosis en mamíferos sanos o infectados adaptadas a un régimen de dosis de 0, 2-1 mg/kg/día que proporciona una eficacia igual o mayor que la conseguida con los regímenes de dosis conocidos en los métodos de tratamiento o prevención existentes del estado de la técnica.

Otro aspecto que no es objeto de la presente invención se refiere también al uso de domperidona en combinación con otros fármacos que se sabe que son útiles para el tratamiento o la prevención de leishmaniosis en mamíferos sanos o infectados (tales como agentes leishmanicidas como antimoniato de Nmetilglucamina o miltefosina, o tales como agentes leishmaniostáticos como alopurinol) en el que el nuevo régimen de dosificación de domperidona proporciona una misma eficacia igual o mayor que la conseguida con los regímenes de dosis de domperidona conocidos en los métodos de tratamiento o prevención existentes del estado de la técnica.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Un aspecto que no es objeto de la presente invención es el uso de domperidona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención en un mamífero de una enfermedad asociada a una alteración de la respuesta inmunitaria, preparándose el

medicamento para la administración de una dosis diaria de

domperidona de desde 0, 2 mg/kg/día hasta 1 mg/kg/día. Se

prefiere además que el medicamento se prepare para la

administración de una dosis diaria de domperidona de desde 0, 3 mg/kg/día hasta 0, 7 mg/kg/día, más preferiblemente desde 0, 45 mg/kg/día hasta 0, 55 mg/kg/día y lo más preferiblemente de 0, 5 mg/kg/día.

En una realización que no es objeto de la presente invención, el medicamento es una forma de dosificación oral destinada para su administración una vez al día. Esta realización facilita la adhesión del paciente al régimen terapéutico y por... [Seguir leyendo]

1. Uso de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio para el seguimiento clínico de la Leishmaniosis canina.

2. Uso de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio

para la determinación del porcentaje de monocitos y neutrófilos activados en muestras de sangre de perros sanos.

3. Uso de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio para la determinación y monitorización de la respuesta 10 inmune celular en perros sanos.

4. Uso de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio para la determinación del porcentaje de macrófagos caninos parasitados con Leishmaniosis infantum.

5. Uso de la prueba de reducción del nitro-azul de tetrazolio

para la determinación del número de amastigotes por macrófago canino parasitado con Leishmaniosis infantum.