USO DE UNA REGIÓN NO CODIFICANTE DEL GENOMA DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA PARA LA ELABORACIÓN DE UN MEDICAMENTO ANTIVIRAL.

Uso de una región no codificante del genoma del virus de la fiebre aftosa para la elaboración de un medicamento antiviral.

La presente invención se refiere al uso de RNAs correspondientes a dominios altamente estructurados de las regiones no codificantes del genoma del virus de la fiebre aftosa (VFA) y al uso de secuencias que los comprenden para la elaboración de una composición farmacéutica para la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades causadas por virus sensibles a interferón. Los virus sensibles a interferón son virus RNA de cadena simple, como el virus de la fiebre aftosa, el virus de la estomatitis vesicular y el virus del Nilo Occidental. La invención se refiere también a la composición farmacéutica que comprende las regiones no codificantes de la invención y que además comprende al menos un excipiente y/o vehículo farmacéuticamente aceptables, así como también al uso de dicha composición farmacéutica.

Uso de una región no codificante del genoma del virus de la fiebre aftosa para la elaboración de un medicamento antiviral

La presente invención se refiere al uso de una región no codificante del genoma del virus de la fiebre aftosa para la elaboración de una composición farmacéutica para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades causadas por virus sensibles a interferón.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

La respuesta inmune innata es la primera línea de defensa frente a la invasión de patógenos basada en diversos mecanismos y rutas de señalización. En el caso de una infección viral, uno de los mecanismos de la respuesta inmune innata es la producción de interferón (IFN) de tipo I (IFN-a e IFN-¡3, o también denominado IFN-a/¡3) que tiene efecto antiviral, antiproliferativo y presenta actividad inmunomoduladora. La producción de IFN de tipo I se produce tras la detección de patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPS, "pathogen assocíated molecular pattems") presentes en los productos virales que se generan en una infección vírica. Entre los PAMPS se incluyen tanto ácido ribonucléico (RNA) de cadena simple como RNA de doble cadena. Sin embargo, se han descrito virus sensibles a interferón que consiguen evadir este sistema de defensa. Entre los virus sensibles a interferón se encuentran el virus de la fiebre aftosa, el virus de la estomatitis vesicular y el virus del Nilo Occidental (Randall RE et al. 2008. J Gen Virol 89: 1-47) .

El virus de la fiebre aftosa (VFA, "foot and mouth disease virus", FMDV, ) es un miembro de la familia Picomaviridae que es el causante de la fiebre aftosa (glosopeda) que afecta a humanos (Bauer K 1997 Arch Virol (S) 13:95-97; Hyslop NStG 1976 Boletín de la Oficina Sanitaria Panamericana:375-387) y mamíferos ungulados artiodáctilos, entre ellos rumiantes y cerdos. El VFA es un virus de RNA de cadena simple de aproximadamente 8, 5 kilobases (Kb) de longitud que en sus extremos term inales contiene regiones no codificantes (NCR, "non-coding regions') que contienen dominios altamente estructurados formando un RNA de doble cadena. Las NCRs del VFA contienen estructuras específicas que participan en el control de la replicación y la traducción del genoma viral. Entre las regiones no codificantes se sitúan los denominados fragmento S, IRES ("internal ríbosome entr y site') y 3'NCR (Witwer CS et al. 2001. Nucleic Acid Res 29:5079-5089; Escarmis CM et al. 1992. Virus Res 26: 113-125; Belsham GJ et al. 2009. Virus Res 139: 183-192) .

Se ha demostrado que VFA es sensible a IFN-a, IFN-¡3 e IFN-y pero es capaz de desarrollar mecanismos para evadir la respuesta inmune. La proteasa Lpro es la primera proteína viral que se traduce y bloquea la respuesta innata inmune del hospedador, entre las que se incluye la respuesta mediada por INF. Lpro es capaz de inhibir la inducción del RNA mensajero (RNAm) de IFN-¡3 y la expresión de los genes que estimulan IFN-a/¡3. Este hecho representa un problema para el control de la enfermedad de la fiebre aftosa.

La fiebre aftosa es una enfermedad que constituye un grave problema en el sector de la ganadería. Es una enfermedad altamente contagiosa que se propaga a través de animales infectados, equipos ganaderos, ropa o incluso calzado portador del VFA. Se controla en la actualidad mediante vacunación y medidas preventivas pero una vez contagiados los animales implica su sacrificio y por lo tanto deriva en grandes pérdidas económicas en el sector.

En relación a la vacunación frente al VFA, la inmunidad adaptativa aparece varios días después de la vacunación de los animales, siendo de aproximadamente una semana en el caso de la vacunación tradicional. Esto supone un problema al poder quedar expuestos dichos animales al virus durante el período ventana y ser susceptibles de infección durante ese tiempo. Se han realizado esfuerzos para cubrir esa ventana de susceptibilidad mediante el uso de adenovirus recombinantes defectivos en replicación que expresan IFN-a pero dicha estrategia, además de implicar el uso de un vector viral, no llega a cubrir la ventana de susceptibilidad al VFA en su totalidad ya que se protege de esta manera a cerdos inoculados desde 24 horas postinfección y la protección dura entre 3 y 5 días. Se hace necesaria por lo tanto, una herramienta que cubra la ventana de susceptibilidad frente al virus de la fiebre aftosa previa al desarrollo de una inmunidad adaptativa efectiva en la que los animales infectados son susceptibles a la infección.

El virus de la estomatitis vesicular (VEV, "vesicular stomatitis virus", VSV) es un virus perteneciente a la familia Rhabdovirídae que produce una enfermedad vesicular aguda en bovinos, caballos, ciervos y cerdos. Se ha encontrado evidencia serológica de que infecta otros muchos animales y ocasionalmente infecta también humanos. Hay dos especies principales, denominadas New Jersey e Indiana. Se transmite por picadura de insectos vectores, principalmente las moscas de la arena (Lutzomya sp.) , moscas negras (familia Simuliídae) e insectos del género Culícoides. Su genoma está formado por 1112 Kb de RNA de cadena sencilla y polaridad negativa. El VEV también es capaz de evitar la respuesta inmune del hospedador. En el caso de VEV la infección induce el bloqueo general de la expresión génica en la célula hospedadora, que afecta a la producción de IFN y otras moléculas antivirales. Actualmente el control de la enfermedad se realiza utilizando medidas de restricción de movimiento de animales infectados, cuarentena, control de los insectos vectores y vacunación con virus inactivado. Una alternativa capaz de activar una respuesta inmune innata eficaz frente al virus sería de gran utilidad para el control de esta enfermedad.

El virus del Nilo Occidental (VNO, "West Ni/e Virus", WNV) , un virus transmitido principalmente por mosquitos y cuyo hospedador natural son las aves, está clasificado dentro de la familia Flaviviridae, junto a otros importantes patógenos animales como el virus de la peste porcina clásica, y humanos como el virus de la hepatitis C, el virus dengue, el virus de la fiebre amarilla (Blitvich BJ 2008. Anim Health Res Rev 9:71-86) . El VNO es un virus con envoltura lipídica, cuyos viriones poseen simetría icosaédrica y un diámetro aproximado de 50 nm. Como material genético, el VNO cuenta con una única molécula de ARN de cadena sencilla y polaridad positiva de unos 11.000 nucleótidos de longitud. El VNO también es capaz de evitar la respuesta inmune del hospedador. El VNO es un claro ejemplo de zoonosis re-emergente, que actualmente constituye un grave problema para la sanidad humana y animal dado que origina meningoencefalitis mortales en humanos, équidos, bóvidos, suidos y aves, en las que en general produce infecciones subclínicas, pero en las que ocasionalmente llega a causar una elevada mortalidad (Granwehr BP et al. 2004. Lancet Infect Dis 4:547-556, Ringia AM et al. 2004 Emerging Infectious Disease 10 (6) :1120-1123; Komar N. et al. 2003 Emerging infectious Diseases 9 (3) :311-322; USGS "National Wildlife Health Center" listado de especies afectadas por el VNO 2005) . En los últimos años, el número y la gravedad de los casos en humanos y caballos han aumentado considerablemente. En la actualidad como herramientas para el control de la misma únicamente se dispone de una vacuna comercial para équidos basada en el uso de virus inactivado y en el caso de humanos, terapias basadas en la administración de interferón (IFN) o de anticuerpos de forma compasiva (Ng et al. 2003. Dev Biol 114:221-227; Davis et al. 2006. Ann Neurol 60:286-300) que no son suficientes para el control de la enfermedad, por lo que se hace necesario una alternativa eficaz para la profilaxis y/o el tratamiento de la enfermedad del Nilo Occidental.

EXPLICACiÓN DE LA INVENCiÓN

La presente invención se refiere al uso de una región no codificante del genoma del virus de la fiebre aftosa para la elaboración de una composición farmacéutica para la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades causadas por virus sensibles a interferón.

Con el fin de evaluar el potencial antiviral de las regiones no codificantes del genoma del virus de la fiebre aftosa (VFA) , en la presente invención se procedió a generar mediante transcripción in vitro RNAs sintéticos no codificantes análogos de dichas regiones, los ncRNAs de la invención.

Los virus sensibles a interferón para los que se ha demostrado que son sensibles a la respuesta inmune innata inducida por los ncRNAs de la presente invención son virus de las familias Picomavirídae, Rhabdoviridae y Flaviviridae. Dentro de la familia Picomaviridae se eligió al virus de la fiebre aftosa, en la familia Rhabdoviridae se eligió el virus de la estomatitis vesicular, mientras que de la... [Seguir leyendo]

1. Uso de una región no codificante del genoma del virus de la fiebre aftosa para la elaboración de una composición farmacéutica

2. Uso de una región no codificante del genoma del virus de la fiebre aftosa para la elaboración de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades causadas por virus sensibles a interferón donde dichos virus son virus RNA de cadena simple.

3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 donde la región no codificante se refiere a una región con una identidad de al menos un 80% con una secuencia nucleotídica que se selecciona de la lista que comprende: SEO ID NO: 1, SEO ID NO: 2, SEO ID NO: 3 o cualquiera de sus combinaciones.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde dicha región no codificante consiste en la secuencia nucleotídica que se selecciona de la lista que comprende: SEO ID NO: 1, SEO ID NO: 2, SEO ID NO: 3

o cualquiera de sus combinaciones.

5. Uso según la reivindicación 4 donde la secuencia es SEO ID NO: 1.

6. Uso según la reivindicación 4 donde la secuencia es SEO ID NO: 2.

7. Uso según la reivindicación 4 donde la secuencia es SEO ID NO: 3.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 donde el virus RNA de cadena simple es un virus de la familia Pícomavírídae.

9. Uso según la reivindicación 8 donde el virus es el virus de la fiebre aftosa.

10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7donde el virus RNA de cadena simple es un virus de la familia Rhabdovírídae.

11. Uso según la reivindicación 10 donde el virus es el virus de la estomatitis vesicular.

12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7donde el virus RNA de cadena simple es un virus de la familia Flavívírídae.

13. Uso según la reivindicación 12 donde el virus es el virus del Nilo Occidental.

14. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13 donde dichas enfermedades son enfermedades en animales mamíferos no humanos.

15. Uso según la reivindicación 14 donde los animales pertenecen a la familia Suídae.

16. Uso según la reivindicación 14donde los animales pertenecen a la familia Bovídae.

17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 y 10 a 14 donde dichas enfermedades son enfermedades en animales que pertenecen a la familia Equídae.

18. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 13 donde dichas enfermedades son enfermedades en aves.

19. Uso según la reivindicación 18 donde las aves se seleccionan de las familias de la lista que comprende: Phasíanídae, Corvídae, Paserídae, Fríngíllídae, Turdídae, Accípítrídae y Strígídae.

20. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13 donde dichas enfermedades son enfermedades en humanos.

21. Composición farmacéutica que comprende la región no codificante

según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 que además comprende al menos un excipiente y/o un vehículo farmacéuticamente aceptables.

22. Composición farmacéutica según la reivindicación 21 que además comprende al menos otro principio activo. 10

23. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 21 ó 22, donde dicha composición farmacéutica se presenta en una forma adaptada a la administración por vía oral, parenteral o intradérmica.