Uso de formas solubles de CD83 y ácidos nucleicos que las codifican para el tratamiento o prevención de enfermedades.

CD83 soluble que comprende los restos aminoacídicos 20 a 144 de la SEQ ID n.

º 2 o una forma dimérica dela misma, o que comprende los restos aminoacídicos 1 a 130 de la SEQ ID n.º 8, en donde un resto aminoacídicoestá sustituido conservativamente, para la utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afecciónseleccionada entre: alergias, asma, rechazo de un trasplante de órgano o tejido, miastenia grave, esclerosis múltiple,vasculitis, enteropatía inflamatoria crónica, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, artritisreumatoide, diabetes sacarina insulinodependiente y sida.

Uso de formas solubles de CD83 y ácidos nucleicos que las codifican para el tratamiento o prevención de enfermedades La presente invención da a conocer formas solubles de CD83 para la utilización en el tratamiento de enfermedades ocasionadas por la disfunción o la función indeseada de una respuesta inmunitaria celular en la que intervienen las células dendríticas, los linfocitos T y/o los linfocitos B.

Antecedentes de la invención El sistema inmunitario de los mamíferos debe poseer la capacidad de reaccionar con un gran número de antígenos foráneos. Los linfocitos constituyen un elemento central del sistema inmunitario porque pueden reconocer los antígenos y pueden llevar a cabo una respuesta inmunitaria adaptativa y específica. Los linfocitos pueden dividirse en dos clases generales de células, los linfocitos B, que son capaces de expresar los anticuerpos, y los linfocitos T, que pueden subdividirse en los linfocitos T cooperadores CD4+ y los linfocitos T citotóxicos CD8+. Ambos subgrupos de linfocitos T son capaces de reconocer los antígenos cuando están asociados a proteínas de la superficie conocidas como el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) . El reconocimiento del CMH se produce a través del receptor de linfocitos T (TCR, por su nombre en inglés) , un complejo proteico que está anclado a la membrana citoplasmática de los linfocitos T. El receptor de linfocitos T CD8+ interviene exclusivamente en las interacciones entre los antígenos del CMH de clase I y los linfocitos T citotóxicos; el receptor de linfocitos T CD4+ interviene exclusivamente en las interacciones entre los antígenos del CMH de clase II y los linfocitos T cooperadores.

El desencadenamiento de una respuesta inmunitaria no progresa exclusivamente a partir de tan solo los linfocitos T, sino más bien a través de la interacción de los linfocitos T con las llamadas células presentadoras de antígeno (CPA, también conocidas como células accesorias) y sus marcadores de superficie (por ejemplo, CMH II) .

Estas células accesorias pueden subdividirse en CPA «simples», cuya función es presentar antígenos, y CPA «profesionales» que, además de presentar antígenos, también tienen una función accesoria a la hora de estimular los linfocitos. Las CPA por sí mismas no tienen especificidad de antígeno, pero sirven como «adyuvante natural» al presentar los antígenos a los linfocitos T. Además de los fagocitos mononucleados, las células dendríticas son miembros del tipo CPA. De hecho, las células dendríticas son las CPA más potentes conocidas hoy en día y son la única CPA que también es capaz de estimular linfocitos T indiferenciados y, por lo tanto, se denominan «adyuvantes naturales». Como resultado de sus características y funcionamiento diferentes, hasta la fecha se han clasificado dos tipos de células dendríticas:

células dendríticas foliculares (también conocidas como células dendríticas relacionadas con el tejido linfático) que están presentes en los ganglios linfáticos, tejidos linfáticos asociados a las mucosas y al bazo, y células dendríticas interdigitantes (también conocidas como células dendríticas derivadas de mieloide) que se encuentran en el espacio intersticial de la mayoría de órganos, en las zonas ricas en linfocitos T de los ganglios linfáticos y el bazo, y se distribuyen por toda la piel, donde se denominan células de Langerhans.

Las células dendríticas inmaduras, a saber, células dendríticas que no son completamente capaces de estimular los linfocitos T, se encargan de captar los antígenos y procesarlos en complejos CMH-péptido. Los estímulos como el TNF-a (factor de necrosis tumoral) y el CD40L inducen la maduración de las células dendríticas y conducen a una síntesis masiva de novo de moléculas del CMH de clase I y del CMH de clase II, y a la migración de las células dendríticas, por ejemplo, desde el espacio intersticial de los órganos internos a través de la sangre hacia los ganglios linfáticos del bazo y del hígado. Además, el aumento de expresión de las moléculas coestimuladoras (por ejemplo, CD80, CD86) y las moléculas de adhesión (por ejemplo, LFA3) se produce durante la fase de migración en los tejidos linfáticos secundarios. Las células dendríticas maduras estimulan los linfocitos T tras llegar a las regiones ricas en linfocitos T del tejido linfático secundario mediante la presentación de antígenos peptídicos dentro del contexto del CMH de clase I o del CMH de clase II a estos linfocitos T. Según las condiciones, las células dendríticas pueden estimular la activación de una serie de linfocitos T que, a su vez, pueden causar una respuesta diferencial del sistema inmunitario. Por ejemplo, tal y como se menciona más arriba, las células dendríticas que expresan el CMH de clase I pueden ocasionar la proliferación de los linfocitos T citotóxicos y las células dendríticas que expresan el CMH de clase II pueden interaccionar con los linfocitos T cooperadores. En presencia de las células dendríticas maduras y la IL-12 que producen, estos linfocitos T se diferencian en células Th1 que producen el interferón y.

Juntos, el interferón y y la IL-12 sirven para fomentar los linfocitos T citolíticos. En presencia de la IL-4, las células dendríticas inducen la diferenciación de los linfocitos T en células Th2 que secretan IL-5 e IL-4, que a su vez activan los eosinófilos y ayudan a que los linfocitos B produzcan anticuerpos (Banchereau, J. y Steinman, R. M. (1998) Nature 392: 245-252) .

Las células dendríticas también pueden inducir lo que se denomina reacción leucocitaria mixta (MLR, por su nombre en inglés) in vitro, un modelo para la activación de los linfocitos T alogénicos y para el rechazo del injerto.

Una característica típica de estos ensayos por MLR es la formación de grandes agrupamientos de linfocitos T y células dendríticas. La adición de hCD83ext el día 1 inhibía fuertemente la típica formación de agrupamientos de células de células dendríticas y de linfocitos T en proliferación (Lechmann, M. et al. (2001) J. Exp. Med. 194: 18131821) .

Las células dendríticas maduras expresan característicamente, entre otras (por ejemplo, CMH I y II, CD80/86, CD40) , la molécula marcadora CD83 en su superficie celular (Zhou, L. J. y Tedder, T. F. (1995) J. Immunology, vol.

154: 3821-3835) . Se trata de uno de los mejores marcadores de las células dendríticas maduras que se conocen hoy en día.

El CD83, una molécula de la superfamilia de proteínas de Ig, es una glucoproteína monocatenaria de 43 kDa que consiste en 205 aminoácidos (SEQ ID n.º 2) en su forma inmadura. Los primeros 19 aminoácidos representan el péptido señal de CD83 y se pierden tras la inserción de la proteína en la membrana, lo que deja una proteína transmembranaria de 186 aminoácidos. La CD83 madura tiene un dominio extracelular formado por los aminoácidos 20 a 144 (SEQ ID n.º 2) , un dominio transmembranario que comprende los aminoácidos 145 a 166 (SEQ ID n.º 2) , y el dominio citoplasmático formado por los aminoácidos 167 a 205 (SEQ ID n.º 2) . El dominio extracelular tiene como peculiaridad estructural un único dominio de tipo Ig (de tipo V) y se expresa muy fuertemente en la superficie celular de las células dendríticas maduras. El dominio extracelular de la proteína CD83 difiere del dominio de tipo Ig típico en el sentido de que está codificado por al menos dos exones: un exón sólo codifica una mitad del dominio de tipo Ig, mientras que el otro exón codifica el dominio transmembranario (véase Zhou, L. J., Schwarting, R., Smith, H. M., y Tedder, T. F. (1999) J. Immunology, vol. 149: 735-742) . El ADNc que codifica la CD83 humana contiene un marco abierto de lectura de 618 pb (SEQ ID n.º 1, véanse la ID Z11697 de Genbank y Zhou, L. J. et al., supra (1995) ) .

Aunque la función exacta de CD83 todavía no se ha determinado, se ha demostrado que la inhibición de la expresión de CD83 que aparece en la superficie de las células dendríticas maduras mediante la interferencia con la exportación nuclear del ARNm de CD83 conduce a una reducción clara de la capacidad de estas células para estimular los linfocitos T (Kruse, M. et al., (2000) J. Exp. Med. 191: 1581-1589) . Por consiguiente, la CD83 parece ser necesaria para el funcionamiento de las células dendríticas.

Además, se ha encontrado que cuando se administraba una forma soluble de CD83 a las células, se reduce la cantidad de CD83 expresada por las células (células dendríticas maduras) o las células no se ponen a sintetizar la CD83 (células dendríticas inmaduras) . Ya que las células dendríticas inmaduras no tienen CD83 en/sobre la membrana, esta observación conduce a la conclusión de que la CD83 soluble tiene que... [Seguir leyendo]

1. CD83 soluble que comprende los restos aminoacídicos 20 a 144 de la SEQ ID n.º 2 o una forma dimérica de la misma, o que comprende los restos aminoacídicos 1 a 130 de la SEQ ID n.º 8, en donde un resto aminoacídico está sustituido conservativamente, para la utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección seleccionada entre: alergias, asma, rechazo de un trasplante de órgano o tejido, miastenia grave, esclerosis múltiple, vasculitis, enteropatía inflamatoria crónica, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, artritis reumatoide, diabetes sacarina insulinodependiente y sida.

2. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la afección es rechazo de un trasplante de tejido u órgano.

3. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad es esclerosis múltiple.

4. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad es enteropatía inflamatoria crónica.

5. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la enteropatía inflamatoria crónica es enfermedad de Crohn.

6. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la enteropatía inflamatoria crónica es colitis ulcerosa.

7. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad es diabetes sacarina insulinodependiente.

8. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la proteína CD83 soluble comprende los restos aminoacídicos 20 a 144 de la SEQ ID n.º 2.

9. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 8, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la proteína CD83 soluble además

(a) tiene uno o varios restos de aminoácidos procedentes del dominio intracelular cercano a su extremo carboxilo, preferiblemente la proteína CD83 soluble comprende los restos aminoacídicos 20 a 145 de la SEQ ID n.º 2; y/o

(b) tiene secuencias funcionales unidas a su extremo amino, preferiblemente secuencias funcionales de hasta 10 restos aminoacídicos y lo más preferiblemente lleva en el extremo amino los aminoácidos adicionales Gly-Ser-Pro-Gly.

10. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 8, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la proteína CD83 soluble comprende los restos aminoacídicos 1 a 130 de la SEQ ID n.º 8.

11. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la proteína CD83 soluble se obtuvo mediante expresión recombinante en una célula hospedadora procariota.

12. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 11, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la célula hospedadora procariota es Escherichia coli.

13. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la proteína CD83 soluble se obtiene mediante expresión recombinante en una célula hospedadora eucariota.

14. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la proteína CD83 soluble es un homodímero.

15. CD83 soluble de acuerdo con la reivindicación 1, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la proteína CD83 soluble comprende un derivado de los restos aminoacídicos 20 a 144 de la SEQ ID n.º 2 o los restos aminoacídicos 20 a 145 de la SEQ ID n.º 2.

16. CD83 soluble de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, para utilización en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde dicha célula hospedadora comprende un ácido nucleico que comprende un codón de inicio unido operativamente a una secuencia que codifica dicha proteína CD83 soluble.

17. Utilización de CD83 soluble que comprende los restos aminoacídicos 20 a 144 de la SEQ ID n.º 2, o una forma dimérica de la misma, o que comprende los restos aminoacídicos 1 a 130 de la SEQ ID n.º 8, en donde un resto aminoacídico está sustituido conservativamente, para la producción de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección seleccionada entre: alergias, asma, rechazo de un trasplante de tejido u órgano, miastenia grave, esclerosis múltiple, vasculitis, enteropatía inflamatoria crónica, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, artritis reumatoide, diabetes sacarina insulinodependiente y sida.