Uso de un anticuerpo que se une específicamente a la integrina α

vβ6 y bloquea la unión de un ligando a la integrina αvβ6, para la fabricación de un medicamento para tratar la fibrosis de vejiga en un paciente

FUNDAMENTO DEL INVENTO

Las integrinas son receptores heterodímeros de adhesión celular compuestos por dos subunidades, º y º. La integrina ºvº6 es un receptor de fibronectina y tenascina expresado predominantemente por células epiteliales. Raras veces se detectan proteína y mRNA de º6 en tejidos de primates adultos sanos, aunque la º6 se expresa durante el desarrollo fetal y la cicatrización de heridas y en ciertos tumores epiteliales. Cuando la subunidad º6 se expresa en una línea celular de carcinoma de colon, en la que normalmente está ausente, la expresión de la subunidad confiere una capacidad potenciada para proliferar. Para la actividad de la integrina ºvº6 en cuanto a potenciar la proliferación se requiere una región COOH-terminal de 11 aminoácidos, única para la subunidad º6 [Agrez et al., J. Cell Biol. 127: 547-556 (1994)]. Se provoca la expresión de º6 en células epiteliales alveolares de tipo II durante el daño causado por una inyección de bacterias vivas, y se observa la expresión de º6 en sitios focales de inflamación subclínica así como en una diversidad de muestras clínicas procedentes de pacientes con inflamación crónica o aguda de los pulmones o riñones [Breuss et al., J. Cell Sci. 108: 2241-2251 (1995)].

Huang et al. [J. Cell Biol. 133: 921-928 (1996)] describieron que ratones homocigotos para una mutación nula en el gen que codifica la subunidad º6 presentaban calvicie juvenil asociada con infiltración de macrófagos en la piel, y linfocitos acumulados y activados alrededor de las vías aéreas de conducción de los pulmones.

La fibrosis pulmonar es un trastorno común del que se cree que es debido a los efectos destructivos de productos liberados por leucocitos [véase, por ejemplo, Marshall et al., Int. J. Biochem. Cell Biol. 29: 107-120 (1997)]. La fibrosis pulmonar y el daño pulmonar provocados por bleomicina se asocian con, y puden depender de, el reclutamiento y la activación de linfocitos [D. J. Schrier et al., Am. J. Pathol. 116: 270-278 (1984)]. Entre las terapias propuestas para la fibrosis pulmonar y el daño pulmonar parenquimatoso está el uso de planteamientos terapéuticos "anticitocínicos" [Coker et al., Thorax 52 (2): 294-296 (1997)].

Sin embargo, las terapias actuales para el daño pulmonar agudo y la fibrosis pulmonar son en gran medida inadecuadas [véase, por ejemplo, King et al., "Idiopathic Pulmonary Fibrosis and other Interstitial Lung Diseases of Unknown Etiology" en Textbook of Respiratory Medicine, compilado por Murray y Nadel, W. B. Saunders, Philadelphia, Pennsylvania, EE.UU., páginas 1827-1839 (1994)]. Por lo tanto, existe la necesidad de terapias para el daño pulmonar agudo y la fibrosis pulmonar. A ésta y otras necesidades se dirige el presente invento.

SUMARIO DEL INVENTO

El invento viene definido por las reivindicaciones.

Un aspecto es un método para tratar el daño pulmonar agudo en un paciente, que comprende administrar al paciente una dosis terapéutica de un antagonista de ºvº6. También se describen métodos para inhibir la metástasis pulmonar, que comprenden administrar al paciente una dosis terapéutica de un antagonista de ºvº6. Un aspecto más es un método para tratar la fibrosis en un paciente, que comprende administrar al paciente una dosis terapéutica de un antagonista de ºvº6.

Un aspecto más es un anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma ATCC HB12382.

Un aspecto más es el hibridoma ATCC HB12382.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1A es un gráfico en que se compara el contenido pulmonar de hidroxiprolina en ratones que expresan una mutación nula del gen de la subunidad integrínica º6 con aquél en ratones testigo en presencia de bleomicina (blm)

o disolución salina (sal).

La Figura 1B es una fotografía de la tinción tricrómica de cortes pulmonares de baja intensidad, que demuestra la acumulación densa de matriz extracelular colágena en los pulmones de ratones de tipo silvestre (º6+/+) tratados con bleomicina pero no en ratones º6-/-tratados con bleomicina, 30 días después del tratamiento.

La Figura 2 es un gráfico en que se compara el aumento de agua pulmonar en ratones de tipo silvestre (º6+/+) con aquél en ratones º6-/-en presencia de bleomicina (blm) o disolución salina (sal).

La Figura 3 es un gráfico en que se compara el reclutamiento de linfocitos en ratones de tipo silvestre (º6+/+) con aquél en ratones º6-/-después de la administración de bleomicina (blm) o disolución salina (sal).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DEL INVENTO

La presente descripción proporciona métodos y composiciones para el tratamiento del daño pulmonar agudo, tal como, pero sin limitarse a, el daño pulmonar que resulta de una sepsis bacteriana, un "shock" hemorrágico, la inhalación de tóxicos, y el daño pulmonar provocado por bleomicina y otros fármacos. Además, las composiciones son útiles para el tratamiento de la fibrosis en órganos epiteliales, tales como el pulmón, el hígado, el riñón, la vejiga y el esófago.

Dichas composiciones pueden ser proporcionadas profiláctica o terapéuticamente a pacientes que tienen, o presentan riesgo de tener, síntomas de fibrosis o daño pulmonar agudo. Por ejemplo, los pacientes que hubieran resultado expuestos a un producto tóxico inhalado serían probablemente tratados después de dicha exposición, mientras que un paciente que recibe bleomicina puede ser tratado profiláctica y/o terapéuticamente. Típicamente, las composiciones del invento se administran sobre una base diaria durante al menos un periodo de 1-5 días, aunque los pacientes con fibrosis pulmonar establecida, una enfermedad progresiva, pueden recibir dosis terapéuticas durante periodos de meses a años. Como aquí se utiliza, una "dosis terapéutica" es una dosis que previene, alivia, modera o, en cualquier caso, reduce la gravedad de los síntomas en un paciente.

Se proporcionan antagonistas de ºvº6. Dichos antagonistas incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos que se unen específicamente a º6; anticuerpos que se unen específicamente a un ligando de ºvº6; ligandos de ºvº6; ácidos nucleicos antisentido; y compuestos análogos peptídicos, no peptídicos y peptidomiméticos de dichos ligandos.

Los anticuerpos pueden ser sintéticos, monoclonales o policlonales y pueden prepararse mediante técnicas bien conocidas en este campo técnico. En una realización preferida, el antagonista es un anticuerpo que reconoce específicamente la región citoplásmica de la subunidad º6 [véase, por ejemplo, Weinacker et al., J. Cell Biol. 269: 1-9 (1994)]. Para aplicaciones terapéuticas, se prefieren a menudo los anticuerpos monoclonales "humanos" que tienen regiones constantes y variables humanas, con objeto de minimizar la respuesta inmune de un paciente hacia el anticuerpo. Dichos anticuerpos pueden ser generados al inmunizar animales transgénicos que contienen genes inmunoglobulínicos humanos. Véase Jakobovits et al., Ann. NY Acad. Sci. 764: 525-535 (1995). En relación con los anticuerpos sintéticos y semisintéticos, con dichas expresiones se pretende abarcar, pero no limitarse a, fragmentos de anticuerpo, anticuerpos de isotipo cambiado, anticuerpos humanizados (por ejemplo, de ratón-ser humano, ser humano-ratón, y similares), híbridos, anticuerpos que tienen especificidades plurales, moléculas totalmente sintéticas de tipo anticuerpo, y similares.

Como se discute más adelante, los anticuerpos pueden ser explorados en cuanto a la capacidad para bloquear la unión de un ligando a la ºvº6 y/o en cuanto a otras propiedades, tal como la capacidad para proteger in vivo de la fibrosis pulmonar provocada por bleomicina. Un anticuerpo monoclonal anti-º6 ejemplar es el 10D5 (ATCC, número de depósito HB12382; depositado el 6 de agosto de 1997).

En otras realizaciones, se usan antagonistas que son péptidos, polipéptidos, proteínas o peptidomiméticos diseñados como ligandos para ºvº6 sobre la base de la presencia del dominio arginina-glicocola-ácido aspártico (RGD) de adhesión celular. El diseño de dichas moléculas como ligandos para las integrinas es ejemplificado, por ejemplo, por Pierschbacher et al., J. Cell. Biochem. 56: 150-154 (1994); Ruoslahti, Ann. Rev. Cell. Dev. Biol. 12: 697-715 (1996); Chorev et al., Biopolymers 37: 367-375 (1995); Pasqualini et al., J. Cell Biol. 130: 1189-1196 (1995); y Smith et al., J. Biol. Chem. 269: 32.788-32.795... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo que se une específicamente a la integrina ºvº6 y bloquea la unión de un ligando a la integrina ºvº6, para la fabricación de un medicamento para tratar la fibrosis de vejiga en un paciente.

2. El uso de la Reivindicación 1, en que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

5 3. El uso de la Reivindicación 1 ó 2, en que el anticuerpo se administra terapéuticamente.

4. El uso de la Reivindicación 1 ó 2, en que el anticuerpo se administra profilácticamente.

5. Un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a la integrina ºvº6 y bloquea la unión de un ligando a la integrina ºvº6, para uso en el tratamiento de la fibrosis epitelial en un paciente.

6. El anticuerpo monoclonal de la Reivindicación 5, en que dicha fibrosis epitelial es seleccionada del grupo 10 que consiste en fibrosis de hígado, vejiga, riñón o esófago.

7. El anticuerpo monoclonal de la Reivindicación 5 ó 6, en que el anticuerpo se administra terapéuticamente.

8. El anticuerpo monoclonal de la Reivindicación 5 ó 6, en que el anticuerpo se administra profilácticamente.