Método para la transferencia cuantitativa de analitos.

Método para la transferencia cuantitativa de analitos, tales como microorganismos,

anticuerpos/antígenos, sustancias de acción antimicrobiana, nucleótidos, antibióticos, hormonas, secuencias de ADN, enzimas, material orgánico, material biológico o material de origen biológico, suplementos de enriquecimiento del terreno o suplementos selectivos de tierra de cultivo o similares, que comprende al menos las fases de:

preparación de una mezcla esencialmente homogénea de una cantidad inicial predeterminada de al menos un analito y un líquido, obteniendo así un valor de concentración o una cantidad conocida del analito en la mezcla;

introducción en la mezcla de al menos una porción de recolección (3) de un dispositivo de toma de muestras (1) que tiene una estructura de soporte (2), comprendiendo la porción de recolección (3) una primera porción (2a) de la estructura de soporte (2) y una pluralidad de fibras (6) unidas y dispuestas sobre la primera porción (2a) de la estructura de soporte (2) por medios de texturización, para definir una porción de recolección texturizada (3) o torunda texturizada, para así recoger una parte de la mezcla sobre la porción de recolección (3);

extracción de la porción de recolección (3) del dispositivo de toma de muestras (1) procedente de la mezcla, reteniendo sobre la porción de toma de muestras (3) una cantidad predeterminada conocida de la mezcla a transferir; y

deshidratación, desecación o crio-desecación de al menos una porción de recolección (3) provista de la cantidad predeterminada de mezcla a transferir, para obtener un dispositivo de toma de muestras pre-dosificado (1) que tiene una cantidad predeterminada de analito seco o crio-desecado sobre la porción de recolección (3).

Método para la transferencia cuantitativa de analitos La presente invención se refiere a un método para la transferencia cuantitativa de analitos. El método se puede aplicar, por ejemplo, en sectores clínicos, diagnósticos y, en general, analíticos, para permitir la obtención de muestras y la transferencia de cantidades predeterminadas conocidas de analitos a un lugar para su uso para análisis o ensayos de diversa naturaleza.

El método se puede aplicar específicamente para la recolección y la transferencia de diversas sustancias, tales como por ejemplo: microorganismos, anticuerpos/antígenos, sustancias de acción antimicrobiana, nucleótidos, antibióticos, hormonas, secuencias de ADN, enzimas, sustancias de enriquecimiento o suplementos selectivos de terreno cultivable, y en general material orgánico, material biológico o de origen biológico o similares.

La técnica anterior comprende numerosísimas aplicaciones en las que se deben usar cantidades conocidas de analitos, tales como sustancias orgánicas o biológicas, para diversas necesidades analíticas o diagnósticas. Por ejemplo, los programas de empresa para la verificación de las cualidades microbiológicas incluyen el uso de cultivos de microorganismos convencionales para la verificación de que se han cumplido los requisitos indicados por los patrones de referencia. Para este fin, se llevan a cabo controles microbiológicos para verificar y validar los métodos y procedimientos de laboratorio, que por ejemplo pueden comprender el control de la eficacia de los componentes selectivos y nutricionales del suelo usados para el cultivo de microbios, y también para la verificación de la eficacia de las operaciones de inactivación de microorganismos, o también para otros fines.

Un ejemplo conocido adicional viene dado por los kits diagnósticos que se proporcionan con controles positivos y negativos de una sustancia a identificar y que permiten el control y validación del propio kit, así como el procedimiento de ensayo y la preparación de la muestra a analizar. Por ejemplo, en los ensayos de búsqueda e identificación de una bacteria, con el objetivo de diagnosticar infecciones actuales y previas, como en el caso específico de Staphylococcus aureus en un ensayo por aglutinación, un control positivo que se realiza usando una muestra de la bacteria debe proporcionar una aglutinación evidente, mientras que un control negativo de la misma bacteria no debe dar aglutinación en los tiempos predeterminados incluidos en el protocolo analítico.

En un ensayo adicional, en los kits de investigación para inhibidores de matriz alimentarios, como en el caso específico de investigación para antimicrobianos en un ensayo de la leche, un control positivo que se realiza usando una solución que contiene un antibiótico debe proporcionar un resultado positivo en los tiempos establecidos y de acuerdo con los procedimientos de ensayo.

Normalmente, los controles positivos se suministran en forma líquida o crio-desecada en gránulos, o polvos para rehidratar antes de su uso, puesto que la estabilidad limitada de los controles positivos rehidratados limita significativamente su vida útil. Además, en general se ve limitada la liberación cuantitativa en el caso de controles suministrados sobre un soporte, de manera que para obtener una respuesta positiva en un ensayo, hay una tendencia general a usar un exceso de muestra de control de la sustancia sometida a investigación, tal como superar el umbral cuantitativo para cada ensayo.

Como es sabido en el campo de los ensayos de resistencia de microbios, después del aislamiento del 45 microorganismo es necesario determinar qué sustancia puede combatir el microorganismo, y en qué concentración. Normalmente, estos ensayos se llevan a cabo preparando una serie de diluciones seriadas partiendo de una solución matriz conocida. El procedimiento para la preparación de las diluciones es laborioso y por tanto tiene un efecto económico negativo sobre la productividad de los procesos realizados en el laboratorio analítico. Los dispositivos de recolección y transferencia de tipo conocido usados generalmente en laboratorios están constituidos, por ejemplo, por pipetas Pasteur, jeringuillas, almohadillas o cucharas.

En todos los ejemplos mencionados anteriormente, y en general en todas las metodologías de transferencia de analitos y sus análisis posteriores, hay muchas áreas problemáticas. Estas áreas problemáticas están relacionadas, por ejemplo, con la complejidad de los procedimientos de preparación de los analitos y las dificultades en su 55 transferencia y conservación. Cabe señalar que muchos analitos requieren, para su conservación con el tiempo, de condiciones medioambientales muy específicas y controladas. Además, la cuantificación correcta de analitos con frecuencia es compleja, especialmente en el caso de uso de cantidades de analitos muy pequeñas, puesto que la única forma de obtener la pequeña cantidad deseada consiste en la preparación de una solución de analito cuando se necesita que tiene una concentración conocida y la extracción directa de una parte de la solución inmediatamente después de haberla preparado.

Con frecuencia, para realizar los análisis, son necesarias operaciones largas, complejas y caras. Además, diversas metodologías analíticas conocidas requieren el uso de cantidades extremadamente precisas de analito, para la realización de ensayos comparativos u otros análisis, y a menudo esto es difícil de obtener, si no es con operaciones 65 delicadas y laboriosas. En otras palabras, con la técnica anterior no es posible aprovechar los diversos tipos de analitos cada vez que se necesiten, en las cantidades y modos específicos adecuados para la aplicación requerida.

Además, del documento de Estados Unidos 5.163.441, se conoce un dispositivo de transporte y recolección de una muestra biológica en poliuretano, y un método para la recolección y transporte de muestras microbiológicas y para la recuperación de antígeno detectable con dicho dispositivo. Además, del documento WO 2007/075412 se conoce un aparato y un método para la obtención de muestras superficiales de microbios con un alto rendimiento, en el que se 5 obtiene una muestra desde un entorno o una superficie biológica usando un material de microfibra en forma de dispositivo de microfibra, toallita, o torunda. Además, del documento de Estados Unidos 4.030.978 se conoce un ensamblaje y un método para el transporte de microorganismos aeróbicos, aeróbicos y facultativos procedentes de un paciente clínico a un laboratorio, junto con un medio protector para mantener la viabilidad de los microorganismos durante su transporte. Además, del documento de Estados Unidos 2005/181517 se conoce un dispositivo de ensayo para la identificación de un analito de interés en una muestra. Además, del documento de Estados Unidos 2002/197738 se conoce un instrumento de pretratamiento y un método de pretratamiento de la saliva, usado para la identificación y cuantificación de Streptococcus mutans en saliva mediante un método inmunocromatográfico utilizando una reacción de antígeno-anticuerpo. Además, del documento WO 2009/134509 se conoce un dispositivo de obtención de muestras que incluye un montaje capilar configurado para extraer una muestra y retener la muestra por acción capilar. Además, del documento de Estados Unidos 2003/073932 se conoce un método para el aislamiento de componentes solubles procedentes de muestras de fluidos corporales que contienen material celular.

El objetivo principal de la presente invención es obviar uno o más de los problemas encontrados en la técnica anterior. Un objetivo de la presente invención es proporcionar un método para la transferencia de cantidades de analitos que permita la obtención de una muestra así como la transferencia cuantitativamente correcta y precisa de analitos.

Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar un método para la transferencia cuantitativa de analitos que también sea muy eficiente para analitos que son difíciles de recoger, transferir, conservar o tratar.

Un objetivo adicional de la presente invención es poner a disposición un método para la transferencia cuantitativa de analitos que reduce el riesgo de contaminaciones por parte de los usuarios.

Un objetivo adicional de la presente invención es poner a disposición un método para la transferencia cuantitativa de analitos que se puede aplicar y es eficaz con un amplio espectro de analitos.

Un objetivo adicional de la presente invención es poner a disposición un método para la transferencia cuantitativa de analitos que proporciona analitos que están listos para su uso en ensayos analíticos o diagnósticos, también en cantidades... [Seguir leyendo]

1. Método para la transferencia cuantitativa de analitos, tales como microorganismos, anticuerpos/antígenos, sustancias de acción antimicrobiana, nucleótidos, antibióticos, hormonas, secuencias de ADN, enzimas, material orgánico, material biológico o material de origen biológico, suplementos de enriquecimiento del terreno o suplementos selectivos de tierra de cultivo o similares, que comprende al menos las fases de:

preparación de una mezcla esencialmente homogénea de una cantidad inicial predeterminada de al menos un analito y un líquido, obteniendo así un valor de concentración o una cantidad conocida del analito en la mezcla; introducción en la mezcla de al menos una porción de recolección (3) de un dispositivo de toma de muestras (1) que tiene una estructura de soporte (2) , comprendiendo la porción de recolección (3) una primera porción (2a) de la estructura de soporte (2) y una pluralidad de fibras (6) unidas y dispuestas sobre la primera porción (2a) de la estructura de soporte (2) por medios de texturización, para definir una porción de recolección texturizada (3) o torunda texturizada, para así recoger una parte de la mezcla sobre la porción de recolección (3) ;

extracción de la porción de recolección (3) del dispositivo de toma de muestras (1) procedente de la mezcla, reteniendo sobre la porción de toma de muestras (3) una cantidad predeterminada conocida de la mezcla a transferir; y deshidratación, desecación o crio-desecación de al menos una porción de recolección (3) provista de la cantidad predeterminada de mezcla a transferir, para obtener un dispositivo de toma de muestras pre-dosificado (1) que tiene una cantidad predeterminada de analito seco o crio-desecado sobre la porción de recolección (3) .

2. El método de la reivindicación 1, en el que la fase de preparación de la mezcla comprende las fases de:

preparación de la cantidad inicial predeterminada de analito;

mezcla de la cantidad inicial predeterminada de analito con el líquido para obtener una mezcla de la cantidad inicial predeterminada de analito en el líquido, y/o la fase de: hacer que la mezcla sea sustancialmente homogénea.

3. El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fase de obtención de un valor de concentración conocido del analito en la mezcla se realiza mezclando una cantidad conocida del analito con una cantidad conocida del líquido y/o por medio de una fase de medición de un valor de concentración del analito en la mezcla.

4. El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que además comprende una fase de medición de

una cantidad de mezcla que está retenida de forma eficaz en la porción de recolección (3) durante la fase de extracción de la porción de recolección (3) del dispositivo de toma de muestras (1) procedente de la mezcla y en particular, en donde la fase de medición se realiza por medio de una comparación entre el peso inicial de la mezcla antes de la inserción en la porción de recolección (3) y el peso final de la mezcla después de la extracción de la porción de recolección (3) .

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que además comprende una fase de medición de una cantidad de mezcla que queda retenida eficazmente en la porción de recolección (3) durante la fase de extracción de la porción de recolección (3) del dispositivo de toma de muestras (1) desde la mezcla y/o en particular en donde la fase de medición se realiza por medio de una comparación entre el peso del dispositivo de toma de muestras (1)

antes de la inserción en la mezcla y el peso del dispositivo de toma de muestras (1) después de la extracción desde la mezcla.

6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la fase de desecación se realiza desecando en un horno con ventilación forzada, o usando otro método de tipo conocido y adecuado para tratar el analito específico.

7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que además comprende las fases de inserción de la porción de recolección (3) en un contenedor de vacío y generación de unas condiciones esencialmente de vacío en el contenedor de vacío, durante la fase de desecación o crio-desecación independientemente de la fase

desecación o crio-desecación.

8. El método de la reivindicación anterior en el que la porción de recolección (3) se cierra hermética y directamente en estado de vacío, después del proceso de deshidratación.

9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que además comprende una fase de revitalización o rehidratación de la cantidad predeterminada de analito seco o crio-desecado sobre la porción de recolección (3) , por ejemplo, por medio de al menos una solución nutriente y/o hidratante, para obtener una cantidad predeterminada de analito rehidratado sobre la porción de recolección (3) .

10. El método de acuerdo con la reivindicación anterior que además comprende una fase de liberación de al menos el 85 % o al menos el 90 % o al menos el 95 % de la cantidad predeterminada a transferir de la mezcla o la cantidad 11

predeterminada de analito, por medio de siembra directa sobre una placa, o dilución en terreno líquido para permitir que se realice el análisis sobre el analito.

11. El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la porción de recolección texturizada (3) está configurada de tal manera que reciba una cantidad esencialmente conocida de la mezcla, o para recoger una cantidad comprendida entre 5 y 1000 µl de la mezcla, o entre 10 µl y 500 µl de la mezcla, o entre 50 y 200 µl de la mezcla, o entre 80 y 120 µl de la mezcla, y/o recoger una cantidad de al menos 0, 5 µl por mm2, al menos 0, 6 µl por mm², o al menos 0, 7 µl por mm², o al menos 0, 75 µl por mm² y/o en el que las fibras (6) están dispuestas sobre la primera porción (2a) de la estructura de soporte (2) de forma esencialmente ordenada y de tal manera que forman una capa esencialmente continua sobre la porción de recolección (3) , y/o están dispuestas sobre la porción de recolección (3) de tal manera que definen una pluralidad de intersticios capilares (9) adaptados para absorber la mezcla por capilaridad.

12. El método de la reivindicación anterior, en el que las fibras (6) tienen una densidad lineal o un recuento de fibras comprendido entre 1, 7 y 3, 3 Dtex, y/o una longitud comprendida entre 0, 6 y 3 mm y/o una densidad superficial de las fibras (6) sobre la porción de recolección (3) comprendida entre 50 y 500 fibras por mm², o entre 100 y 200 fibras por mm² y/o están fabricadas de un material esencialmente no hidrófilo o no adsorbente con respecto a la mezcla, y/o de un material seleccionado entre: poliamida, rayón, poliéster, fibra de carbono, alginato, un material natural que sea no adsorbente con respecto a la mezcla, o una mezcla de los materiales anteriores.

13. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la fase de inserción de una porción de recolección de la mezcla se realiza por inmersión directa de la porción de recolección en al menos un micro-contenedor o por medio de una bomba para micro-volúmenes.

14. Un dispositivo de toma de muestras (1) que comprende una estructura de soporte (2) y una porción de recolección texturizada (3) , estando provista la porción de recolección (3) de una cantidad de un analito a transferir, caracterizado por que dicha porción de recolección (3) está provista de una cantidad conocida seca y predeterminada de dicho analito a transferir, produciendo así un dispositivo de toma de muestras pre-dosificado.

15. Un kit para realizar ensayos diagnósticos o químicos, tales como controles positivos o negativos, o para transferir sustancias lábiles en una fase hidratada para suplementar terrenos de cultivo, que comprende al menos un dispositivo de toma de muestras (1) de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el kit comprende además medios para desecar o liofilizar una cantidad predeterminada de mezcla sobre una porción de recolección (3) del dispositivo de toma de muestras (1) y/o medios para revitalizar una cantidad predeterminada de analito seco o crio-desecado sobre la porción de recolección (3) del dispositivo de toma de muestras (1) .