Secuencias de circovirus asociado con la enfermedad del adelgazamiento del lechón (MAP).

Compuesto para su utilización como medicamento que comprende un polipéptido glucosilado aislado de secuencia que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 15.

Secuencias de circovirus asociado con la enfermedad del adelgazamiento del lechón (MAP) .

La presente invención tiene por objeto un compuesto para su utilización como medicamento que comprende un polipéptido glucosilado aislado de circovirus MAP de tipo B. La invención tiene asimismo por objeto un compuesto para su utilización como medicamento según la invención, siendo dicho medicamento una composición inmunogénica o una vacuna, para el tratamiento y/o la prevención de una infección por el circovirus MAP de tipo B.

La descripción se refiere a la secuencia genómica y a las secuencias nucleotídicas que codifican para unos polipéptidos de circovirus MAP, tales como los polipéptidos estructurales y no estructurales de dicho circovirus, así como a unos vectores que incluyen dichas secuencias y células o animales transformados por estos vectores. La descripción se refiere asimismo a unos procedimientos de detección de estos ácidos nucleicos o polipéptidos y a unos kits de diagnóstico de infección por el circovirus MAP. La descripción se refiere también a un método de selección de compuestos capaces de modular la infección vírica. La descripción comprende por último unas composiciones farmacéuticas, en particular vacunales, para la prevención y/o el tratamiento de infecciones víricas por circovirus MAP, así como la utilización del vector según la invención para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades mediante terapia génica.

Se ha descrito ampliamente la enfermedad del adelgazamiento del lechón (MAP) o también denominada decaimiento fatal del lechón (DFP) en América del Norte (Harding, J.C., 1997) , y unos autores han relatado la existencia de una relación entre esta patología y la presencia de circovirus porcino (Daft, B. et al., 1996; Clark, E.G., 1997; Harding, J.C., 1997; Harding, J.C. y Clark, E.G., 1997; Nayar, G.P. et al., 1997) . Ya se ha demostrado un circovirus porcino en unos cultivos celulares derivados del cerdo establecidos en línea e infectados crónicamente (Tischer, I., 1986, 1988, 1995; Dulac, G.C., 1989; Edwards, S., 1994; Allan, G.M., 1995 y McNeilly, F., 1996) . Este virus, durante una infección experimental de lechones, no resultaba ser patógeno para el cerdo (Tischer, I., 1986, Homer, G.W., 1991) y se ha determinado y caracterizado su secuencia nucleotídica (Tischer, I., 1982; Meehan, B. M. et al., 1997; Mankertz, A., 1997) . El circovirus porcino, denominado virus PCV, pertenece al género circovirus de la familia de los circoviridae (Murphy, F.A. et al., 1995) cuyo virión posee un ADN circular de tamaño comprendido entre 1, 7 y 2, 3 kb, ADN que comprende 3 marcos abiertos de lectura (ORF1 a ORF3) , que codifica para una proteína de replicación REP implicada en la fase de iniciación y de terminación de la replicación circular desarrolladora (RCR) (Heyraud-Nitschke, F., et al., 1995; Harding, M.R. et al., 1993; Hanson, S.F. et al., 1995; Fontes, E.P.B. et al., 1994) , que codifica para una proteína de cápside (Boulton, L.H. et al., 1997; Hackland, A.F. et al., 1994; Chu P.W.G. et al., 1993) y que codifica para una proteína no estructural denominada de diseminación (Lazarowitz, S.G. et al., 1989) .

Se puede citar asimismo el documento Meehan et al. (Journal of General Virology, vol. 79, nº 9, páginas 2171-2179, 1998) que describe el aislamiento de cuatro variantes de circovirus de tipo 2 (PCV2) a partir de cerdos que presentan el síndrome de la enfermedad del adelgazamiento del lechón. Este documento describe asimismo la secuencia genómica completa de estas cuatro variantes así como las secuencias peptídicas de cuatro ORF (ORF1, ORF2, ORF3 y ORF4) presentes en estos genomas.

Los autores de la presente invención han observado que las manifestaciones clínicas perceptibles en el cerdo y relacionadas con la infección por el circovirus MAP, están muy individualizadas. Estas manifestaciones aparecen en general en unos cerdos de 8 a 12 semanas de edad, destetados desde 4 a 8 semanas. Las primeras señales son la hipotonía sin que se llegue a hablar de postración. Rápidamente (48 horas) los flancos se ahuecan, se marca la línea de la espalda, los cerdos “blanquean”. Estas señales se acompañan en general de hipertermia, de anorexia y lo más frecuentemente de manifestaciones respiratorias (tos, disnea, polipnea) . Pueden aparecer asimismo unas diarreas transitorias. La fase de estado de la enfermedad tarda aproximadamente un mes al final del cual los porcentajes de mortalidad varían de 5 a 20%. A estas mortalidades conviene añadir una proporción variable (5-10%) de animales cadavéricos que ya no pueden presentar ningún futuro económico. Se debe observar que fuera de este estado crítico de fin de post-destetado, no aparece ninguna anomalía en las ganaderías. En particular, la función de reproducción se mantiene perfectamente.

En el plano epidemiológico, las primeras manifestaciones de esta patología han aparecido a principios de 1995 en el Este del departamento de las Côtes d'Armor en Francia, y las ganaderías afectadas se han acantonado sobre todo en esta zona del departamento. En diciembre de 1996, no se puede evaluar con precisión el número de ganaderías afectadas debido a la ausencia de un método de diagnóstico específico en laboratorio ni un dispositivo de epidemiovigilancia del ganado. Basándose en los hechos clínicos así como en los resultados de exámenes necrópsicos suministrados por los veterinarios, se puede estimar este número en varias decenas (80-100) . La contagiosidad de la enfermedad es baja a moderada. Se han señalado unos casos fuera de la zona inicial y son el resultado en su mayoría de la transferencia de animales procedentes de ganaderías que conocen el problema. Sin embargo, una particularidad de la afección es su alta persistencia. Así, unas ganaderías afectadas desde hace un año están todavía afectadas a pesar de la aplicación masiva de terapéuticos. Las ganaderías con expresión clínica se reclutan en las diferentes categorías de especialización (crías-cebadores, post-destetados-cebadores) y diferentes estructuras económicas están afectadas. Por otro lado, los trastornos aparecen incluso en unas ganaderías en las que se respetan las reglas de zootecnia.

Se han realizado numerosos exámenes necrópsicos o bien en las ganaderías o bien en el laboratorio. Los elementos de la tabla relativa a las lesiones son disparatados. Las lesiones macroscópicas más constantes son la neumonía que se presenta a veces en cuadrícula, así como una hipertrofia de los ganglios linfáticos. Las demás lesiones se refieren sobre todo a las vísceras torácicas incluyendo en particular la pericarditis y la pleuresía. Pero se observan asimismo unas artritis y unas úlceras gástricas. Las lesiones reveladas en el examen histológico se sitúan esencialmente a nivel pulmonar (neumonía intersticial) , ganglionar (depleción linfoide de los nudos linfáticos, células gigantes) y renal (glomerulonefritis, vascularitis) . Los agentes infecciosos han sido objeto de amplias investigaciones. Se ha podido excluir la intervención de los pestivirus y de la enfermedad de Aujeszky. Los trastornos aparecen en los ganados SDRP (Síndrome Disgenésico y Respiratorio Porcino, infección relacionada con un arteriovirus) seropositivos, pero no se ha podido establecer la función de este último en la génesis de los trastornos (la mayoría de las ganaderías de Bretaña son SDRP seropositivas) .

La publicación de Meehan et al., (1998) describe la secuencia nucleotídica de ADN de aislados de circovirus porcinos y la predicción de secuencia de aminoácidos de productos de los cuatro ORF principales presentes en el genoma de estos circovirus, incluyendo el ORF2. De entre las secuencias de aminoácidos:

la secuencia AF055391 comprende una secuencia 92% idéntica a la SEC ID nº 15,

• la secuencia AF055392 comprende una secuencia 92% idéntica a la secuencia SEC ID nº 15,

• la secuencia AF055393 comprende una secuencia 99% idéntica a la secuencia SEC ID nº 15, y

• la secuencia AF055394 comprende una secuencia 98% idéntica a la secuencia SEC ID nº 15.

Sin embargo, esta publicación no menciona la importancia particular de la proteína codificada por el ORF2. Esta publicación no describe un polipéptido glucosilado aislado de secuencia que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 15, y tampoco describe un compuesto para su utilización como medicamento que comprende un polipéptido glucosilado aislado de secuencia que tiene 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº

15.

Los autores de la presente invención, con el objetivo de identificar el agente etiológico responsable de la MAP, han realizado unas pruebas... [Seguir leyendo]

1. Compuesto para su utilización como medicamento que comprende un polipéptido glucosilado aislado de secuencia que tiene por lo menos 90% de identidad con la secuencia SEC ID nº 15. 5

2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque el medicamento es una composición inmunogénica para el tratamiento y/o la prevención de una infección por el circovirus MAP de tipo B.

3. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque el medicamento es una vacuna para el tratamiento 10 y/o la prevención de una infección por el circovirus MAP de tipo B.