Receptor (SSTR2) antagonistas de somatostatina selectivos.

Un péptido análogo de somastotina cíclica (SRIF) que une de forma selectiva el receptor SSTR2 de SRIF, cuyo péptido tiene una de las secuencias de amino ácido donde la terminación C- está amidada:**Fórmula**

donde Cpa significa cloro-Phe, Aph

(Cbm) significa 4-ureido-fenilalanina, Nal significa isómero de alanina, que se sustituye por naftilo en el átomo de ß-carbono, pNO2-Phe significa p-nitrofenilalanina, ITyr significa L-tirosina yodinada.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E11194516.

Solicitante: THE SALK INSTITUTE FOR BIOLOGICAL STUDIES.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 10010 North Torrey Pines Road La Jolla, CA 92037 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: REUBI, JEAN, CLAUDE, ERCHEGYI, JUDIT, DR., MAECKE, HELMUT, R., RIVIER,JEAN,E.,F.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K38/00 (Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/655 (Somatostatinas)

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Fragmento de la descripción:

DETALLADA DE LAS REPRESENTACIONES PREFERIDAS

[0019] La abreviación estándar de 3 letras identifica los residuos de alpha-aminoácidos, y donde el residuo de aminoácido tiene forma isomérica, es la forma L del aminoácido la que se representad a menos que se exprese lo contrario, por ejemplo Ser=L-serine. Con L o D se refiere a ambos D y L isómeros de un aminoácido particular. Cuando un referencia es desde este momento hecha sobre una posición en el péptido, se refiere a su posición correspondiente al péptido con 14 residuos de somatostatina (SRIF).

[0020] Los péptidos antagonistas SRIF se suministran con un afinidad selectiva para el receptor SRIF SSTR2; preferentemente también poseerán una alta afinidad para SSTR2, ej igual a un kD de alrededor de 10 nanomolares o menos. Estos péptidos abarcan análogos cíclicos e SRIF acortados, donde la parte circular se acorta a solo 6 residuos, y donde hay un residuo en la terminación N y preferiblemente un residuo también añadido en la terminación C En otras palabras, las posiciones residuales 1-, 4-, 5-, 6-, 11-, 12- y 13 son eliminadas del 14 residuos SRIF nativo, creando heptapéptidos, y preferiblemente un residuo (por ejemplo residuo 15) se añade en la terminación C, que crea un optopétido.

[0021] La siguiente secuencia de aminoácidos aporta ejemplos de péptido antagonista representativos que

muestran la especificidad deseada para SSTR2, basada en un sistema numérico uniforme con la secuencia de 14 residuos de SRIF nativo de origen mamífero, donde los residuos en las posiciones 1, 4-6 y 11-13 son preferentemente eliminados: (cyclo3-14)Xaa1-Xaa2-D-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-

Xaa 12-Xaa 13-Xaa 14-Xaa 15 dondeXaal es des-Xaa; Xaa2esTrp(A).Phe(B).NaioTyr.dondeAesH.ci.F.Br,Me,no2_oMeoN-tormyiyb es h, haiogen, ch3, no2 0 och3; D Xaa3 es D-Cys, D-Pen, D-HCys u otro D-isómero a-aminoácido que posee una cadena lateral SH; Xaa4, Xaa5 y Xaa6 son des-Xaa; Xaa7 es Aph(Qi), Ala(thienyl), Tyr(X) o Trp(A) donde Qi es Cbm, OH- Cbm, CH3-Cbm, OCH3-Cbm, OEt-Cbm, Cbm-Et(OEt)2 o Hor and X es H o halógeno; Xaa8 es D-Trp(A), Trp(A), Tyr, D-Tyr, Phe(B), D-Phe(B), L o D-BzlHis, L o D-(DNP)His, L o D-Aph(Cbm); Xaa9 es Lys, N°MeLys, hLys, NaMehLys, Orn o NaMeOrn; Xaa-io es Thr, Ser o Val; Xaan, Xaai2 y Xaa-i3 son des-Xaa; Xaa-|4 es Cys, Pen, hCys o otro L-

isómero a-aminoácido que posee una cadena lateral SH; y Xaa-is es 2Nal, D-2Nal, Aph(Q2), D-Aph(Q 2), (R-i)Cha, (Ri)D-Cha, (Ri)Leu, (Ri)D-Leu, Tyr, D-Tyr, Trp, D-Trp o des-Xaa; donde R1 es H o C°Me, y Q 2 es Cbm, OH-Cbm, CH3-Cbm, OCH3-Cbm o OEt-Cbm. Tyr en la posición 2 puede tratarse con yodina radiada, o un agente complejo, conjugado o quelado puede ser unido directa o através de un vinculador al grupo amino del residuo en la terminal N en cualquiera de estos análogos péptidos que es capaz de vincular un núcleo radioactivo a partir de ese momento. Por ejemplo, un quelato macrocíclico, como un DOTA, puede unirse la terminación N bien por unión directa a Xaa2 o Indirectamente usando un vinculante como GABA (gamma aminoácido butírico, ver ejemplo en la Patente de EEUU No. 6.022.523) o (SAIa.

[0022] Un subgénero preferible de análogos SRIF se compone de la secuencia aminoácidoamino: (ciclo 3-14)Xaa-i- Xaa2-D-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Lys-Thr-Xaaii-Xaai2-Xaai3-Cys donde Xaa2 se sustituye por Phe; D-Xaa3 es D-Cys; Xaa7 es Aph(Q-i), Tyr o ITyr; y Xaas es D-Trp o D-Aph(Cbm). Debe comprenderse que los restantes grupos Xaa se definen como se ha referido anteriormente cuando no se especifique.

[0023] En general y para efecto de esta solicitud, las referencias a Trp y D-Trp en cualquier descripción que no sea un ejemplo específico debe entenderse que se incluye el residuo no sustituido así como un residuo donde se ha realizado una única sustitución por hidrógeno en una de las posiciones 5 o 6, y siendo dichos sustitutos cloro, flúor, bromo, metil, nitro y metoxi, con cloro, flúor y bromo siendo los preferibles o con formil en sustitución del hidrógeno de un indol N. Por Nal se entiende el isómero de alanina que se sustituye por naphthyl en el(3 átomo de carbono, con la unión a naftaleno preferentemente en la posición 2 del anillo, o opcionalmente en la posición 1. Por Aph se entiende aminofenilalanina, donde el grupo amino se une preferentemente a la posición 4 en el anillo fenll, pero en general la unión en las posiciones 2 o 3 es equivalente. Por Aph(Cbm) se entiende fenilalanlna ureldo 4. Por Aph(OH-Cbm) se entiende fenilalanina ureido 4 (3 hidrosi). Por Aph (CH3-Cbm) se entiende 4-(3-methyl)-fenilalanina ureido. Por Por Aph (OChb-Cbm) se entiende 4-(3-methoxy)-fenilalanina ureido. Por Aph[(EtO)2Et-Cbm] se entiende 4-{3-[2-(2-ethoxy-ethoxy)-etil]}-fenilalanina ureido. Por ITyr se entiende L- tirosina ¡odlnazada, ej 3-¡odo-Tyr. Por Cpa se entiende cloro-Phe, y preferentemente 4CIPhe. Por Aph(Hor) se entiende [(2,6-dioxo-hexahydro-pyñmidine-4- carbonyl)-amino]-fenilalanina. Por SRIF se entiende somatostatina péptlda cíclica con 14 residuos. Por Cha se entiende ciclohexilalanina, y por Pen se entiende penilcilamina (P-mercapto vallne). Por hLys o hCys se entiende el aminoácido a con un grupo CH2 adicional en la cadena lateral.

[0024] La terminación C normalmente es amidada, aunque puede usarse un equivalente, por ejemplo Gly-OH,. La terminación N puede modificarse de varias formas sin afectar negativamente de forma significativa la afinidad de unión, todas estas modificaciones en los péptidos cíclicos se considera que se incluyen como parte de los péptidos en el conjunto del invento. Por ejemplo, una variedad de adición puede estar formada, preferentemente, en la terminal N del aminoácido en forma de agente (Z) complejo o conjugado que puede usarse posteriormente en las partículas deseadas al péptido o funcionar como marcador. Generalmente dichas partículas Z pueden ser seleccionadas desde un grupo consistente de DOTA- y quelatos basados en DTPA, quelatos basados en NOTA, compuestos carbonil, 2-hydrazino nicotinamida (HYNIC), N4-quelatos, desferrioxamina, NxSy-quelatos, todos opcionalmente complejos con un radio isótopo, Tirosina (Tyr) para halogenado, un tinte fluorescente y biotina. Cpa también puede servir como precursor de tritiación. Por ejemplo, puede añadirse un quelato, como DTPA, DOTA, HYNIC y P2S2-COOH; entre los quelatos preferidos pueden incluirse p-NH2-Bz-DOTA(2-p-aminobenzyl-1,4,7,10- tetraazacyclododecane-1,4,7, ácido 10-tetraace-tic), y DOTA-p-NH2-anilide [1,4,7,10-tetraazacyclododecane- 1,4,7,ácido acético 10-tetraacetic mono(p-aminoanilide)]. Alternativamente, puede unirse un agente quelante de forma covalente a la terminación N a través de un adecuado enlace (L) si se desea; entre los enlaces L adecuados incluimos tirosina, lisina, ácido diaminobutírico, ácido diaminopropionico, polietileno glicol, ácidos grasos y sus derivados, p-alanina, ácido 5-amino valérico, sarcosina, y ácido glucerónico. Cuando Tyr aparece en la terminación N, puede ser radiado con ¡dina o marcado de otro modo. Los grupos Acyl al no poseer más de alrededor de 20 aminoácidos pueden también estar presentes en la terminación N, ya que el residuo en la terminación N puede estar también acidado, si se desea, con una fracción grande sin pérdida de selectividad.

[0025] Se ha demostrado selectividad para la unión de péptidos análogos del invento a SSTR2 evaluando sus interacciones con cinco receptores humanos SRIF clonados diferentes como se describe posteriormente en detalle. Generalmente, las células recombinadas con receptores se lavan y homogenizan para preparar una proteína homogénea pura en un búfer adecuado, como se describe en el artículo. En un ensayo típico, se coloca una cantidad de la proteína homogenizada en un pequeño volumen adecuado del búfer del ensayo con un pH adecuado.... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un péptido análogo de somastotina cíclica (SRIF) que une de forma selectiva el receptor SSTR2 de SRIF, cuyo péptido tiene una de las secuencias de amino ácido donde la terminación C- está amidada:

I........'.=.....-.....í

Cpa-cyclo[D-Cys-4Aph(Cbm)-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-2Nal;

o

i......................!..."1

pN02-Phe-cyclo[D-Cys-ITyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-D-Tyr

donde Cpa significa cloro-Phe, Aph(Cbm) significa 4-ureido-fenilalanina, Nal significa isómero de alanina, que se sustituye por naftilo en el átomo de p-carbono, pN02-Phe significa p-nitrofenilalanina, ITyr significa L-tirosina yodinada.

2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 cuando se ligue a la Cpa o al pN02-Phe, una fracción (Z) seleccionada del grupo que consiste en quelatos basados en DOTA, quelatos basados en DTPA, quelatos basados en NOTA, compuestos de carbonilo, 2-hidrazino nicotinamida, quelantes N4-, desferrioxamina, y quelatos NxSy-.

3. El péptido de acuerdo con la reivindicación 2 cuando un quelato DOTA se acople covalentemente al Cpa o al pN02-Phe.

4. Un compuesto farmacológico que incluya una mezcla del péptido de acuerdo con la Reivindicación 1 y por lo menos un portador farmacológicamente aceptable.