Reactivo y kit para ensayar dímero D.
Un reactivo para ensayar dímero D, que comprende:
partículas de vehículo con las que se conjugan o adsorben el primer y segundo anticuerpos monoclonales quereaccionan con el dímero D,
pero tienen diferente reactividad para dímero D;
donde el primer anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el InstitutoNacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada con el número de referencia FERM BP-11393 el 17 defebrero de 2004 y el segundo anticuerpo monoclonal se selecciona de: un anticuerpo producido por unhibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-968 y un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluacióncon el número de referencia NITE BP-969.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E11175510.
Solicitante: SYSMEX CORPORATION.
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 5-1, Wakinohama-Kaigandori 1-chome, Chuo-ku Kobe-shi Hyogo 651-0073 JAPON.
Inventor/es: SUZUKI, TAKESHI, Hoshiko,Susumu, NAGAI,KEISUKE, YAMASHITA,KAZUAKI.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/86 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que interviene el tiempo de coagulación de la sangre.
PDF original: ES-2422203_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Reactivo y kit para ensayar dímero D
Campo de la invención La presente invención se refiere a un reactivo para ensayar dímero D para usar para medir dímero D que es un producto de degradación de fibrina y un kit del reactivo para ensayar dímero D.
Antecedentes Se sabe que en el campo de los ensayos de laboratorio clínico, en particular, ensayos fibrinolíticos de coagulación de la sangre, se mide el dímero D. El dímero D es un tipo de marcador molecular de coagulación de la sangre, y es importante medirlo cuando se diagnostiquen diversos tipos de trombosis que potencia el sistema de coagulación/fibrinolítico y DIC (síndrome de coagulación intravascular diseminada) , y cuando se obtenga un barómetro para determinar la patología de éstos y valorar los efectos de la curación.
Hay diversos métodos conocidos para medir dímero D y también se comercializan reactivos para ensayar el dímero D. Los reactivos para ensayar el dímero D en los que se sensibiliza un tipo de anticuerpo monoclonal para partículas de vehículo se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Japonesa (JP-B) Nº 7-46104, Solicitud de Patente Japonesa Abierta (JP-A) Nº 2000-1939663, JP-A Nº 2006-105633, JP-A Nº 2006-234676 y Patente Japonesa Nº 3857468.
En el diagnóstico por exclusión de trombosis venosa profunda, se sabe que la medición de la concentración de dímero D es útil (documentos US2004029286 y US2009305301) . Específicamente, Sukhu et al. (Lab. Hem. 2008, 30, 200-204) han comparado un ensayo fluorescente ligado a enzima establecido (Vidas!) con la cuantificación de dímero D usando un método inmuno-turbidométrico que incorpora una suspensión de micropartículas de látex recubiertas con dos anticuerpos monoclonales diferentes específicamente dirigidos contra fragmentos de dímero D humanos (STalia! D-DI) .
En el caso en el que se establece un valor de punto de corte para la concentración de dímero D y la concentración de dímero D de un sujeto está por dejado del valor del punto de corte, puede determinarse que el sujeto no tiene trombosis venosa profunda. Por lo tanto, existe la necesidad de alta sensibilidad de medición de dímero D en una región de baja densidad para determinar si el sujeto tiene trombosis venosa profunda.
En el pasado, la concentración de un anticuerpo para dímero D en un reactivo de ensayo se ha mejorado o se ha añadido un sensibilizador al reactivo para mejorar la sensibilidad de medición de dímero D. Sin embargo, estos procedimientos han provocado problemas en los que el fondo aumenta y se espesa una solución de reacción y se forma espuma.
Sumario de la invención El alcance de la presente invención se define solamente por las reivindicaciones adjuntas, y no está afectada en ningún grado por las declaraciones dentro de este sumario.
Un objeto de la presente invención es proporcionar un reactivo capaz de ensayar dímero D en una región de baja densidad con alta sensibilidad sin aumentar la concentración de un anticuerpo para dímero D en un reactivo de ensayo o añadir un sensibilizador al reactivo y un kit de reactivo.
Los presentes inventores se han dedicado al estudio y han descubierto que cuando se usa un reactivo que contiene vehículos sensibilizados para los primer y segundo anticuerpos monoclonales que reaccionan con dímero D, pero tienen diferente reactividad para dímero D, la detectabilidad del dímero D mejora en comparación con la de un reactivo convencional sensibilizado para un tipo de anticuerpo y por lo tanto puede medirse dímero D incluso en una región de baja densidad, y han completado la presente invención.
(1) Un primer aspecto de la presente invención es un reactivo para ensayar dímero D, que comprende: partículas de vehículo con las que se conjugan o adsorben el primer y segundo anticuerpos monoclonales que reaccionan con dímero D, pero tienen diferente reactividad para dímero D; donde el primer anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada con el número de referencia FERM BP-11393 el 17 de febrero de 2004 y el segundo anticuerpo monoclonal se selecciona de: un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-968 y un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-969.
(2) El reactivo para ensayar dímero D según (1) , donde las partículas de vehículo se sensibilizan individualmente para el primer y segundo anticuerpos monoclonales.
(3) Un segundo aspecto de la presente invención es un kit para ensayar dímero D, que comprende: un primer reactivo que contiene un tampón; y un segundo reactivo que contiene partículas de vehículo conjugadas o adsorbidas en el primer y segundo anticuerpos monoclonales que reaccionan con dímero D, pero tienen diferente reactividad para dímero D; donde el primer anticuerpo monoclonal reacciona con la fracción X de fibrinógeno, fracción Y de fibrinógeno y dímero D, pero no reacciona con las fracciones D de fibrinógeno y E de fibrinógeno y el segundo anticuerpo monoclonal reacciona con dímero D, pero no reacciona con fracciones X de fibrinógeno, Y de fibrinógeno y E de fibrinógeno; y donde el primer reactivo contiene además el primer anticuerpo monoclonal.
(4) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con (3) , donde el primer reactivo contiene un anticuerpo que reacciona con fracción X, fracción Y de fibrinógeno y dímero D, pero no reacciona con fracciones D y E de fibrinógeno.
(5) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con (3) o (4) , donde las partículas de vehículo se conjugan individualmente o se adbsorben con el primero y segundo anticuerpos monoclonales.
(6) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con uno cualquiera de (3) a (5) , donde el primer anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada con el número de referencia FERM BP-11393 el 17 de febrero de 2004.
(7) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con uno cualquiera de (3) a (6) , donde el segundo anticuerpo monoclonal no reacciona con fracción D de fibrinógeno.
(8) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con uno cualquiera de (3) a (6) , donde el segundo anticuerpo monoclonal reacciona con fracción D de fibrinógeno.
(9) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con uno cualquiera de (3) a (7) , donde el segundo anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-968.
(10) El kit para ensayar dímero D de acuerdo con uno cualquiera de (3) a (6) u (8) , donde el segundo anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por el hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-969.
De acuerdo con el reactivo y el kit de la presente invención, es posible medir dímero D en una muestra incluso en una región de baja densidad que ha sido difícil medir con un reactivo convencional para ensayar dímero D con alta sensibilidad.
Breve descripción de los dibujos La Figura 1 es un gráfico que muestra diferencias de reactividad entre anticuerpo DD-M1653, anticuerpo DD-M1039 y anticuerpo DD-M46 con los productos de degradación de fibrina/fibrinógeno; la Figura 2 es un gráfico que muestra la variación de absorbancia por minuto a una longitud de onda de 800 nm cuando se mide un patrón de referencia de dímero D usando cada uno de los segundos reactivos de los Ejemplos 1 a 3 y los ejemplos Comparativos 1 y 2; y la Figura 3 es un gráfico que muestra la variación de absorbancia por minuto a una longitud de onda de 800 nm cuando se mide un patrón de referencia de dímero D usando cada uno de los segundos reactivos de los Ejemplos 4 a 6 y los ejemplos Comparativos 3 y 4.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas Las realizaciones preferidas de la presente invención se describirán en lo sucesivo en el presente documento con referencia a los dibujos.
La presente solicitud proporciona un reactivo y un kit para ensayar dímero D.
La expresión “dímero D” es un producto de degradación de fibrina que se obtiene cuando una fibrina estabilizada, que es un polímero que se forma cuando el fibrinógeno en sangre coagula debido a los efectos de una enzima tal como trombina, se degrada por una enzima tal como plasmina.
El dímero D también se conoce como un nombre genérico para fracciones DD/E o multímeros... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un reactivo para ensayar dímero D, que comprende:
partículas de vehículo con las que se conjugan o adsorben el primer y segundo anticuerpos monoclonales que reaccionan con el dímero D, pero tienen diferente reactividad para dímero D; donde el primer anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada con el número de referencia FERM BP-11393 el 17 de febrero de 2004 y el segundo anticuerpo monoclonal se selecciona de: un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP968 y un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-969.
2. El reactivo para ensayar el dímero D de acuerdo con la reivindicación 1, donde las partículas de vehículo se 15 conjugan o adsorben individualmente con el primer y segundo anticuerpos monoclonales.
3. Un kit para ensayar el dímero D, que comprende:
un primer reactivo que contiene un tampón; y
un segundo reactivo que contiene partículas de vehículo conjugadas o adsorbidas con el primer y segundo anticuerpos monoclonales que reaccionan con el dímero D, pero tienen diferente reactividad para dímero D; donde el primer anticuerpo monoclonal reacciona con la fracción X de fibrinógeno, fracción Y de fibrinógeno y dímero D, pero no reacciona con las fracciones D de fibrinógeno y E de fibrinógeno, y el segundo anticuerpo monoclonal reacciona con el dímero D, pero no reacciona con las fracciones X de fibrinógeno, Y de fibrinógeno y E de fibrinógeno; y donde el primer reactivo contiene además el primer anticuerpo monoclonal.
4. El kit para ensayar dímero D de acuerdo con la reivindicación 3, donde el primer reactivo contiene un anticuerpo que reacciona con la fracción X, fracción Y de fibrinógeno y dímero D, pero no reacciona con las fracciones D y E de 30 fibrinógeno.
5. El kit de acuerdo con la reivindicación 3 o 4, donde las partículas de vehículo se conjugan o adsorben individualmente con el primer y segundo anticuerpos monoclonales.
6. El kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, donde el primer anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada con el número de referencia FERM BP-11393 el 17 de febrero de 2004.
7. El kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, donde el segundo anticuerpo monoclonal no 40 reacciona con la fracción D de fibrinógeno.
8. El kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, donde el segundo anticuerpo monoclonal reacciona con la fracción D de fibrinógeno.
9. El kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, donde el segundo anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-968.
10. El kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6 u 8, donde el segundo anticuerpo monoclonal
es un anticuerpo producido por un hibridoma depositado en el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación con el número de referencia NITE BP-969.
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