PRODUCCIÓN DE LA PROTEÍNA DE CAPSIDE L1 DEL PAPILOMAVIRUS HUMANO HPV-11 Y PARTÍCULAS DE TIPO VIRUS.

Un polinucleótido que codifica una proteína cápsida L1 de HPV-11 en el que la región 3'' no traducida del ARNm transcrito de la misma no contiene la secuencia AUUUA

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E05075889.

Solicitante: THE UNIVERSITY OF ROCHESTER.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 518 HYLAN BUILDING ROCHESTER, NY 14627-0140 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ROSE, ROBERT C., REICHMAN, RICHARD C., Bonnez,William.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 8 de Marzo de 1994.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/12 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Antígenos virales.
  • C07K14/025 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Papovaviridae, p. ej. virus de papiloma, virus del polioma, SV40, virus BK, virus JC.

Clasificación PCT:

  • A61K35/12 A61K […] › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Sustancias procedentes de mamíferos; Composiciones que comprenden tejidos o células indeterminadas; Composiciones que comprenden células madre no embrionarias; Células modificadas genéticamente (vacunas o preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00).
  • A61K35/64 A61K 35/00 […] › Insectos, p. ej. abejas, avispas o pulgas.
  • A61K39/12 A61K 39/00 […] › Antígenos virales.
  • A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61P31/12 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 31/00 Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos. › Antivirales.
  • A61P35/00 A61P […] › Agentes antineoplásicos.
  • C07K14/025 C07K 14/00 […] › Papovaviridae, p. ej. virus de papiloma, virus del polioma, SV40, virus BK, virus JC.
  • C12N15/09 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N15/37 C12N 15/00 […] › Papovaviridae, p. ej. virus del papiloma, virus del polioma, SV 40.
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12N7/04 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
  • C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.
  • G01N33/53 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
  • G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

Clasificación antigua:

  • A61K39/12 A61K 39/00 […] › Antígenos virales.
  • C12N15/09 C12N 15/00 […] › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N15/37 C12N 15/00 […] › Papovaviridae, p. ej. virus del papiloma, virus del polioma, SV 40.
  • C12N7/04 C12N 7/00 […] › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda.

PRODUCCIÓN DE LA PROTEÍNA DE CAPSIDE L1 DEL PAPILOMAVIRUS HUMANO HPV-11 Y PARTÍCULAS DE TIPO VIRUS.

Fragmento de la descripción:

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere de forma general al papilomavirus (PV). Más particularmente, la invención se refiere a un método de expresar la secuencia codificante de proteína de cápside del papilomavirus humano de tipo 11 (HPV-11) usando el sistema de expresión en baculovirus, la producción de partículas de tipo virus (VLP) de HPV y el uso de estas VLP para el desarrollo de la vacuna de HPV.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La familia Papovaviridae constituye un grupo de virus de ADN que inducen tanto infecciones líticas como tumores benignos o malignos. Estructuralmente, todos son viriones icosaédricos desnudos con 72 capsómeros y contienen ADN circular bicatenario. Los virus incluidos en la familia son: (1) papilomavirus humanos y animales, (2) poliomavirus de ratón, (3) virus vacuolantes de simio y (4) virus BK y JC humanos.

Los papilomavirus humanos (HPV) infectan epitelios cutáneo, genital, oral y respiratorio de un modo específico de tejido. La infección por HPV se ha asociado estrechamente con el desarrollo tanto de lesiones benignas como de neoplasias malignas (Reichman et al., Papillomaviruses, 1990, págs. 1191-1200; y Mandell et al., Principles and Practice of Infectious Diseases, 3ª Edición, Churchill Livingstone, New York, N.Y.). Por ejemplo, el HPV de tipo 1 (HPV1) está presente en verrugas plantares, los HPV de tipo 6 u 11 (HPV-6 o HPV-11) en condylomata acuminata (verrugas anogenitales), mientras que el HPV de tips 16 ó 18 (HPV-16 ó HPV-18) son comunes en lesiones premalignas y malignas del epitelio escamoso cervical (véase Crum et al., “Human papillomavirus infection and cervical neoplasia: New perspectives,” 1984, Int. J. Gynecol. Pathol., vol. 3, págs. 376-388; zur Hausen, Genital Papillomavirus Infections, 1985, págs. 83-90; Rigby et al., Viruses and Cancer, Cambridge University Press, Cambridge, UK; y Koutsky et al., “Epidemiology of genital human papillomavirus infection,” 1988, Epidemiol. Rev., vol. 10, págs. 122-163).

Sin embargo, las dificultades en la propagación del HPV in vitro ha conducido al desarrollo de estrategias alternativas para la producción de antígenos para estudios inmunológicos. Por ejemplo, Bonnez et al., “The PstI-XhoII restriction fragment of the HPV-6b L1 ORF lacks immunological specificity as determined by sera from HPV 6 condyloma acuminatum patients and controls,” 1990, UCLA Symp. Mol. Cell. Biol., New Series, vol. 124, págs. 77-80; Jenison et al., “Identification of immunoreactive antigens of human papillomavirus type 6b by using Escherichia coli-expressed fusion proteins,” 1988, J. Virol., vol. 62, págs. 2115-2123; Li et al., “Identification of the human papillomavirus type 6b L1 open reading frame protein in condylomas and corresponding antibodies in human sera,” 1987, J. Virol., vol. 61, págs. 26842690; Steele et al., “Humoral assays of human sera to disrupted and nondisrupted epitopes of human papillomavirus type 1,” 1990, Virology, vol. 174, págs. 388-398; and Strike et al., “Expression in Escherichia coli of seven DNA segments comprising the complete L1 and L2 open reading frames of human papillomavirus type 6b and the location of the 'common antigen,” 1989, J. Gen. Virol., vol. 70, págs. 543-555, han expresado secuencias codificantes de proteína de cápside recombinante en sistemas procariotas y usado las mismas en análisis de transferencia de Western de sueros obtenidos de individuos con infección de HPV del tracto genital. Los resultados de estos estudios han sugerido que los anticuerpos para epítopos desnaturalizados, es decir lineales de proteínas de cápside de HPV se pueden detectar en los sueros de algunos individuos infectados.

Las partículas de virus completo también se han usado para detectar anticuerpos en sueros humanos, incluyendo anticuerpos dirigidos contra epítopos conformacionales. Estos estudios han sido difíciles de realizar debido a que la mayoría de las lesiones inducidas por HPV que tiene origen natural producen pocas partículas. Sin embargo, las partículas de virus completas se pueden obtener en cantidades suficientes para realizar ensayos inmunológicos de verrugas plantares inducidas por HPV de tipo 1 (Kienzler et al., “Humoral and cell-mediated immunity to human papillomavirus type 1 (HPV-1) in human warts,” 1983, Br. J. Dermatol., vol. 108, págs. 65-672; “Pfister et al., Seroepidemiological studies of human papilloma virus (HPV-1) infections,” 1978, Int. J. Cancer, vol. 21, págs. 161-165; y Steele et al., “Humoral assays of human sera to disrupted and nondisrupted epitopes of human papillomavirus type 1,” 1990, Virology, vol. 174, págs. 388-398) y xenoinjertos de ratón actínico de HPV-11 inducido experimentalmente (Kreider et al., “Laboratory production in vivo of infectious human papillomavirus type 11,” 1987, J. Virol., vol. 61, págs. 590-593; y Kreider et al., “Morphological transformation in vivo of human uterine cervix with papillomavirus from condylomata acuminata,” 1985, Nature, vol. 317, págs. 639-641). Más particularmente, la Patente de Estados Nº

5.071.757 de Kreider et al., describe un método de propagación de viriones de HPV-11 infecciosos en el laboratorio usando un sistema de modelo de xenoinjerto de ratón atímico. Aunque este sistema es capaz de producir cantidades de virus infecciosos que se podrían usar para el desarrollo de un ensayo serológico para la infección por HPV genital, este sistema es muy costoso y engorroso. Además, hasta ahora solamente un tipo de HPV genital se ha propagado en ese sistema, por tanto, limitando su utilidad. Además, el virus infeccioso producido usando este sistema representa un riesgo biológico y, por lo tanto, sería difícil de usar una formulación de vacuna.

Zhou et al., en “Expression of vaccinia recombinant HPV 16 L1 and L2 ORF proteins in epithelial cells is sufficient for assembly of HPV virion-like particles”, 1992, Virology, vol. 185, págs. 251-257, han descrito la formación de partículas de tipo virus de HPV-16 en núcleos de células CV-1 después de la infección por un vector de expresión recombinante doble de L1/L2 de HPV-16 de virus vaccinia. Sin embargo, los autores no fueron capaces de producir las VLP con un vector que exprese solamente L1. Además, las VLP producidas carecían de una simetría bien definida y eran más viables en tamaño y menores, solamente de aproximadamente 35-40 nm de diámetro que los viriones de HPV (55 nm) o las VLP de la presente invención (las VLP de HPV-11 producidas por baculovirus, de aproximadamente 50 nm de diámetro.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.045.447, de Minson, describe un método de exploración de sobrenadantes de cultivo de hibridoma para anticuerpos monoclonales con especificidades deseadas. El método de Minson se ilustra mediante la producción de anticuerpos para la proteína L1 del papilomavirus de tipo 16 (HPV-16) usando esta proteína como el antígeno diana en ratones. Sin embrago, Minson no consigue describir la expresión de la proteína L1 o la producción de partículas de tipo virus (VLP) de HPV.

La Patente de Estados Unidos Nº 4.777.239, de Schoolnik et al., describe secuencias peptídicas cortas obtenidas de varias de las fases de lectura abierta de la región temprana de papilomavirus que provocan anticuerpos específicos de tipo para papilomavirus. Sin embargo, los inventores no consiguen describir ninguna secuencia dirigida a la fase de lectura abierta tardía principal L1.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.057.411 de Lancaster et al., describe una secuencia polinucleotídica de aproximadamente 30 nucleótidos de la fase de lectura abierta de la proteína de cápside L1 de papilomavirus que los inventores afirman que codifica un epítopo específico de tipo de papilomavirus. Sin embargo, los inventores no describen animales infectados que produzcan anticuerpos que reconozcan esta secuencia. En lugar de esto, sintetizaron una versión de papilomavirus bovino de tipo 1 (BPV-1) de la secuencia (un péptido de 10 aminoácidos o decapéptido), después inmunizaron conejos y ensayaron la capacidad del antisuero de reaccionar con tejido de fibropapiloma inducido con BPV-1 o BPV-2. El antisuero peptídico reaccionó solamente con tejido de BPV-1 y no BPV-2. Después, los inventores llegaron a la conclusión de que el péptido contenía un determinante antigénico que era específico de tipo y, por lo tanto, todas las secuencias codificantes de L1 de papilomavirus contenían un epítopo específico de tipo en este locus. Esto es una...

 


Reivindicaciones:

1. Un polinucleótido que codifica una proteína de cápside L1 del HPV-11, en el que la región no traducida 3' del ARNm transcrito del mismo no contiene la secuencia AUUUA en los 30 nucleótidos del codón de terminación de la secuencia codificante de L1.

2. Un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la región no traducida 3' del ARNm transcrito del mismo no contiene la secuencia AUUUA.

3. Un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho ARNm no contiene la secuencia AUUUA en los 30 nucleótidos del codón de terminación de la secuencia codificante de L1.

4. Un vector de expresión que comprende un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación

2.

5. Un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 4, que es un vector de expresión de baculovirus.

6. Una célula hospedadora que comprende un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 4 ó 5.

7. Una célula hospedadora que comprende el vector de la reivindicación 5, en el que la célula hospedadora es una célula de insecto.

8. Un método para producir una partícula de tipo virus o un capsómero del papilomavirus humano, comprendiendo el método cultivar una célula hospedadora de acuerdo con la reivindicación 6 o la reivindicación 7 y obtener dicha partícula de tipo virus o capsómero de la misma.

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la proteína de cápside L1 se expresa a partir de una secuencia que codifica a la proteína L1 que produce una proteína o un complejo proteico que posee características inmunológicas y morfológicas similares a las del papilomavirus nativo en el que dicha partícula o capsómero puede reconocer anticuerpos en sueros humanos procedentes de personas que se sabe que están infectadas por un virus homólogo.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 8 ó 9 en el que dicha partícula de tipo virus o capsómero está purificado.

11. Un método para producir una vacuna contra el papilomavirus humano, comprendiendo el método obtener una partícula de tipo virus o un capsómero del papilomavirus humano de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 y la combinación de esta con un adyuvante.

12. Un método para producir una combinación de partículas de tipo virus del papilomavirus humano, comprendiendo el método la producción de una partícula de tipo virus del papilomavirus humano que comprende una proteína de cápside L1 del HPV-11 de acuerdo con el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, y la combinación con una o más partículas de tipo virus que comprenden una proteína L1 procedente de uno o más papilomavirus humanos diferentes.

13. Un método para producir una vacuna polivalente contra los papilomavirus humanos, comprendiendo el método

obtener una combinación de partículas de tipo virus del papilomavirus humano de acuerdo con la reivindicación 12 y la combinación de estas con un adyuvante.


 

Patentes similares o relacionadas:

Composición farmacéutica que comprende un complejo de carga portador polimérico y al menos un antígeno proteínico o peptídico, del 1 de Julio de 2020, de CureVac AG: Composición farmacéutica que incluye: (A) un complejo de carga portador polimérico, que comprende: a) un portador polimérico que comprende componentes catiónicos reticulados […]

Vacunas y diagnóstico de torque teno virus porcino, del 18 de Junio de 2020, de VIRGINIA TECH INTELLECTUAL PROPERTIES, INC.: Composición inmunogénica que comprende una proteína según SEQ ID NO. 16.

Estructuras artificiales de poliepítopos para uso en inmunoterapia, del 17 de Junio de 2020, de Invectys: Un vector de expresión de ADN o una mezcla de vectores de expresión de ADN que codifica al menos dos epítopos de CD4 de la transcriptasa inversa de la telomerasa […]

Métodos para proporcionar virosomas con adyuvante y virosomas con adyuvante obtenibles de esta manera, del 3 de Junio de 2020, de BESTEWIL HOLDING B.V: Un método para preparar los virosomas con adyuvante, que comprende las etapas de: (i) proporcionar una composición acuosa de los virosomas sin adyuvante que comprende […]

Ácido nucleico que comprende o codifica para un tallo-bucle de histona y una secuencia poli(A) o una señal de poliadenilación para aumentar la expresión de un antígeno patogénico codificado, del 3 de Junio de 2020, de CureVac AG: Secuencia de ácido nucleico que comprende o codifica en la dirección 5' → 3' para: i) • una región codificante, que codifica para al menos […]

Composiciones inmunogénicas de PCV2 multivalentes y métodos para producir dichas composiciones, del 27 de Mayo de 2020, de Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc: Una vacuna combinada multivalente para uso en un método para (i) la prevención de una infección por PCV2, o de reinfección por PCV2 o (ii) la reducción o eliminación […]

Vacuna que comprende un pestivirus atenuado, del 27 de Mayo de 2020, de BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA GMBH: Un pestivirus atenuado, con al menos una mutación en la secuencia codificadora de la glicopoteína E ms y al menos otra mutación en la secuencia […]

Proteínas de consenso del virus de la Fiebre Aftosa (VFA), secuencias codificantes y vacunas preparadas a partir de las mismas, del 6 de Mayo de 2020, de THE TRUSTEES OF THE UNIVERSITY OF PENNSYLVANIA: Molécula de ácidos nucleicos que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID nº 1, SEC ID nº […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .