PROCESOS PARA LA PREPARACIÓN DE EPTIFIBATIDE Y LOS COMPUESTOS INTERMEDIOS PERTINENTES.

Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. SECTOR DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a compuestos que pueden ser utilizados como intermediarios sintéticos para eptifibatide, medicamento para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Eptifibatide es un antagonista heptapéptido cíclico altamente específico de la glicoproteína IIb/IIIa plaquetaria. Es un agente antitrombótico parenteral de acción rápida utilizado durante las intervenciones coronarias percutáneas para el tratamiento de la angina inestable y como complemento de los agentes trombolíticos para el tratamiento del infarto agudo de miocardio. Ver, por ejemplo, Phillips y otros, Journal of Biological Chemistry (1993), 268(2), 1066-73; y Scarborough, American Heart Journal (1999), 138(6, Pt. 1), 1093-1104. El eptifibatide también se administra a pacientes a los que se realiza un procedimiento de angioplastia con balón (globo), para el cual son candidatos anualmente más de 1 millón de personas en EE.UU. Se cree que el eptifibatide actúa inhibiendo la agregación plaquetaria, específicamente, bloqueando el receptor plaquetario GP IIb-IIIa. La agregación de las plaquetas puede obstruir el suministro de sangre al corazón, provocando una angina inestable y, posiblemente, un infarto de miocardio (ataque al corazón). Los efectos del eptifibatide son específicos para las plaquetas, evitando interferencias con otros procesos cardiovasculares normales, y los efectos pueden revertirse cuando se suspende la utilización de eptifibatide. El eptifibatide se comercializa en los EE.UU. bajo la marca comercial INTEGRILIN® y se utiliza en el tratamiento de pacientes con síndrome coronario agudo (angina inestable e infarto de miocardio sin onda Q), incluyendo pacientes en los que se realiza un tratamiento médico y aquellos en los que se realiza una intervención coronaria percutánea (PCI). El eptifibatide también está indicado para su utilización en el momento de las intervenciones coronarias percutáneas, incluyendo procedimientos en los que se utilizan endoprótesis vasculares (stents) intracoronarios. Varias de las estrategias sintéticas para eptifibatide dadas a conocer han utilizado técnicas conocidas de síntesis de péptidos en fase sólida, tal como se describe, por ejemplo, en las patentes U.S. 5.318.899; 5.686.570 y 5.747.447. También se ha dado a conocer un proceso en fase líquida a escala comercial en la Conferencia IBC 1999 sobre tecnologías de péptidos, Método de Peptisintha para la producción de péptidos GMP a escala industrial (Peptisynthas Method of Producing GMP Peptides on an Industrial Scale"). El proceso comercial es una síntesis convergente que supone la preparación por separado de dos fragmentos: Mpa-Har-Gly y Asp-Trp-Pro. El acoplamiento de estos dos fragmentos proporciona seis de los siete residuos necesarios para el eptifibatide. El último residuo unido es una cisteinamida protegida con S-tritilo tal como se describe, por ejemplo, en la patente U.S. 5.506.362. A continuación y tras eliminar los grupos protectores de S-tritilo (en los residuos cisteinamida y mercaptopropionilo), se consigue el cierre del anillo mediante la formación de enlaces bisulfuro. Se ha informado que el eptifibatide crudo obtenido mediante el proceso comercial posee una pureza de aproximadamente el 80%. Mediante dos etapas de cromatografía en columna se mejora la pureza a más del 99%. La síntesis en fase líquida se ha considerado generalmente como más viable que la síntesis en fase sólida para la fabricación a gran escala de eptifibatide. Sin embargo, los temas de solubilidad y de generación de mezclas de complejos de reacción suponen problemas en los procesos en fase líquida a gran escala. Las mezclas de complejos de reacción, por ejemplo, hacen que la purificación del producto sea más dificultosa. Existen modos de superar estos problemas, tales como la utilización de aminoácidos persililados y reactivos de transferencia de fase, tal como se describe, por ejemplo, en la patente U.S. 4.954.616, y la purificación cromatográfica extensiva, pero dichos medios añaden costes al proceso global. Por ello existe la necesidad de procesos alternativos para la fabricación de eptifibatide. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención da a conocer, entre otros, procesos para la fabricación de eptifibatide. Algunos procesos de la invención comprenden proporcionar un compuesto de fórmula II: 2   en la que Har en homoarginilo; Gly es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo; Cis-NH2 es cisteinamida; Mpa es ácido mercaptopropiónico; y P2 es un grupo protector de carboxilo; acoplar los residuos Har y Mpa formando el compuesto de fórmula III: y eliminar P2 del residuo Asp del compuesto de fórmula III para formar eptifibatide. La invención también da a conocer procesos en los que un residuo homoarginina protegido en amino terminal se acopla con un residuo de glicina, formando de este modo el fragmento 2-3 de eptifibatide de fórmula: P1-Har-Gly-OH También se dan a conocer procesos en los que un residuo ácido aspártico con una cadena lateral carboxílica protegida se acopla a un dipéptido triptofanil-prolilo a través del residuo triptofanilo del dipéptido, formando de este modo el fragmento de eptifibatide 4-6 protegido de fórmula: P3-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH. Tras la desprotección, el fragmento de eptifibatide 2-3 y el fragmento de eptifibatide 4-6 pueden acoplarse a su vez a través de la unión del residuo Gly del fragmento de eptifibatide 2-3 al residuo Asp del fragmento de eptifibatide 4-6, formando de este modo un fragmento de eptifibatide 2-6 de fórmula: P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH en la que Har es homoarginilo; Gly es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo; P1 es un grupo protector de amino y P2 es un grupo protector de carboxilo. En realizaciones preferentes, el fragmento de eptifibatide 2-6 se acopla a un residuo cisteinamida activado a través del residuo Pro del fragmento de eptifibatide 2-6, formado de este modo un fragmento de eptifibatide 2-7 de fórmula: P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-Acys-NH2 en la que ACys-NH2 es un residuo cisteinamida activada. Puede unirse un residuo ácido mercaptopropiónico al fragmento de eptifibatide 2-7 mediante una unión disulfuro entre el residuo ácido mercaptopropiónico y el residuo ACys-NH2 del fragmento de eptifibatide 2-7, formando de este modo un compuesto de fórmula I: en la que Mpa es ácido mercaptopropiónico; Cys-NH2 es cisteinamida. La eliminación de P1 del residuo Har del compuesto de fórmula I da lugar al compuesto de fórmula II: 3   el acoplamiento de los residuos Har N-terminal y Mpa C-terminal de este compuesto da lugar a un compuesto de fórmula III: y la eliminación subsiguiente de P2 del residuo Asp da lugar a eptifibatide. La presente invención también de a conocer productos obtenidos mediante los procesos descritos, tales como los compuestos de fórmula IV: en la que R1 es hidrógeno o P1; P1 es un grupo protector de amino y P2 es un grupo protector de carboxilo. Como otros compuestos representativos de la invención se incluyen Fmoc-Har-Gly-OH, Fmoc-Har-Gly-O-P4 y Fmoc-Har- Gly-Asp(O-P5)-Trp-Pro-OH en los que P4 y P5 son grupos protectores de carboxilo. La invención incluye también composiciones que comprenden eptifibatide y menos de 1% de determinadas impurezas del proceso. La invención también incluye procesos de purificación de eptifibatide. El objeto de la presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE REALIZACIONES ILUSTRATIVAS En un aspecto, la presente invención da a conocer procesos convergentes para la preparación de eptifibatide que suponen la preparación de un fragmento de eptifibatide 2-3, la preparación de un fragmento de eptifibatide 4-6 y el acoplamiento de los fragmentos de eptifibatide 2-3 y 4-6 formando un fragmento de eptifibatide 2-6. Algunos de estos procesos suponen el acoplamiento del fragmento de eptifibatide 2-6 a un residuo cisteinamida activada 4   formando un fragmento de eptifibatide 2-7, la formación de un enlace disulfuro entre ácido mercaptopropiónico y el fragmento de eptifibatide 2-7 formando el precursor A, la realización del acoplamiento peptídico intramolecular del precursor A y la eliminación de los grupos protectores del producto de acoplamiento dando lugar a eptifibatide. La invención hace referencia a compuestos novedosos que pueden utilizarse como intermedios para la preparación de eptifibatide Tal como se utiliza en la presente invención, el término grupo protector de carboxilo hace referencia a un grupo que puede unirse selectivamente y eliminarse de un grupo carboxilo, para evitar que éste participe en reacciones químicas no deseadas, sin efectos adversos inaceptables en las reacciones deseadas. Como ejemplos... [Seguir leyendo]

acoplar los residuos Har y Mpa para formar un compuesto de fórmula III: 2. Producto, según la reivindicación 1, en el que P2 es t-butilo. 3. Producto, según la reivindicación 1, que comprende además la eliminación de P1 del residuo Har de un compuesto de fórmula I: en la que P1 es un grupo protector de amino, formando de este modo el compuesto de fórmula II. 4. Producto, según la reivindicación 3, en el que P2 es estable en condiciones adecuadas para la eliminación de P1. 5. Producto, según la reivindicación 3, en el que P2 es t-butilo. 6. Producto, según la reivindicación 3, en el que P1 es 9- fluorenilmetoxicarbonilo o benciloxicarbonilo. 7. Producto, según la reivindicación 3, en el que dicho proceso comprende además unir un residuo Mpa a un fragmento 2-7 de eptifibatide de fórmula: P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-ACys-NH2 en el que ACys-NH2 es un residuo cisteinamida inactivado, mediante una unión disulfuro entre el residuo Mpa y el residuo ACys-NH2 del fragmento 2-7 de eptifibatide, formando de este modo el compuesto de fórmula I. 8. Producto, según la reivindicación 7, en el que dicho proceso comprende además el acoplamiento del fragmento 2-6 de eptifibatide de fórmula: 17   P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH a un residuo cisteinamida activado a través del residuo Pro del fragmento 2-6 de eptifibatide, formando de este modo el fragmento 2-7 de eptifibatide. 9. Producto, según la reivindicación 8, en el que el residuo cisteinamida inactivado es H-Cys(Npys)NH2. 10. Producto, según la reivindicación 8, en el que dicho proceso comprende además el acoplamiento de un fragmento 2-3 de eptifibatide de fórmula: P1-Har-Gly-OH y un fragmento 4-6 de eptifibatide de fórmula: H-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH mediante la unión del residuo Gly del fragmento 2-3 de eptifibatide al residuo Asp del fragmento 4-6 de eptifibatide, formando de este modo el fragmento 2-6 de eptifibatide. 11. Producto, según la reivindicación 10, que comprende además el acoplamiento de un residuo Asp protegido en el extremo amino terminal que posee una cadena carboxílica lateral protegida a un dipéptido Trp-Pro a través del residuo Trp del dipéptido y la eliminación del grupo protector del extremo amino terminal del residuo Asp para formar un fragmento 4-6 de eptifibatide. 12. Producto, según la reivindicación 11, que comprende además el acoplamiento de un residuo Har protegido en el extremo amino terminal y un residuo Gly protegido o no protegido para formar un fragmento 2-3 de eptifibatide. 18