PROCEDIMIENTOS Y COMPOSICIONES PARA MODULAR Y DETECTAR LA ACTIVIDAD DE WISP.

Un anticuerpo dirigido contra WISP-1 aislado para uso en un procedimiento para inhibir o reducir la metástasis o motilidad de células cancerosas en un mamífero,

en el que el anticuerpo inhibe o reduce la motilidad o metástasis de células cancerosas

Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere generalmente a procedimientos y composiciones para uso en la modulación de la(s) actividad(es) de polipéptidos WISP, particularmente polipéptidos WISP-1. La invención también se refiere a procedimientos y composiciones para diagnóstico in vitro, in situ e/o in vivo y/o tratamiento de células de mamífero o afecciones patológicas asociadas a polipéptidos WISP.

Antecedentes de la invención [0002] El factor de crecimiento de tejido conjuntivo (CTGF) es un factor de crecimiento inducido en fibroblastos por muchos factores que incluyen TGF-ß, y es esencial para la capacidad de TGF-ß para inducir crecimiento independiente de anclaje (AIG), una propiedad de células transformadas. El CTGF también es mitogénico y quimiotáctico para las células, y de ahí que se crea que los factores de crecimiento pertenecientes a esta familia desempeñan una función en el desarrollo, crecimiento y reparación normales del tejido humano. Se han aislado, clonado, secuenciado y caracterizado como pertenecientes a la familia de genes CCN cinco proteínas relacionadas con CTGF que incluyen Cyr61, Nov, WISP-1, WISP2 y WISP-3. Oemar y Luescher, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 17: 1483-1489 (1997); Brigstock, Endocrine Rev., 20:189-206 (1999). Se ha encontrado que el gen que codifica Cyr61 promueve la angiogénesis, el crecimiento tumoral y la vascularización. Babic y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 6355-6360 (1998). El gen nov se expresa en el riñón, esencialmente en la fase embrionaria, y se han detectado alteraciones de la expresión de nov con respecto al riñón normal tanto en nefroblastomas aviares como en tumores de Wilms humanos. Martinerie y col., Oncogene, 9: 2729-2732 (1994). Wtl regula por defecto la expresión de nov humana, regulación por defecto que puede representar un elemento clave en la nefrogénesis normal y tumoral. Martinerie y col., Oncogene, 12: 1479-1492 (1996). [0003] Los diferentes miembros de la familia CCN interactúan con diversas macromoléculas solubles o asociadas a la matriz en glicoconjugados sulfatados particulares (Bork, FEBS Letters, 327:125-130). Esta interacción se usó para purificar Cyr61 y CTGF por cromatografía de afinidad en heparina-agarosa (Frazier y col., J. Invest. Dermatol., 107:404-411 (1996); Kireeva y col., Mol. Cell. Biol., 16:1326-1334 (1996)). Cyr61 es secretado y se asocia tanto a la matriz extracelular como a la superficie celular debido a su afinidad por el sulfato de heparano (Yang y col., Cell.

Growth Diff., 2: 351-357 (1991)). Recientemente se mostró que WISP-1 interactuaba con decorina y biglicano, dos proteoglicanos de sulfato de dermatano secretados. (Desnoyers, y col., J. Biol. Chem., 276:97599-97607 (2001)). [0004] La proteína murina ELM1 se ha identificado recientemente en células de baja metástasis. Hashimoto y col., J. Exp. Med., 187:289-296 (1998). El gen elml, un ortólogo de ratón de WISP-1 desvelado más adelante, es otro miembro de la familia de genes CNN. Suprime el crecimiento y la metástasis de tumores in vivo de células de melanoma murino K-1735. Otro artículo reciente sobre rCop-1, el ortólogo de rata de WISP-2 descrito más adelante, describe la pérdida de expresión de este gen después de la transformación de células. Zhang y col., Mol. Cell. Biol., 18:6131-6141 (1998). [0005] Los Wnt están codificados por una extensa familia de genes cuyos miembros se han encontrado en helmintos, insectos, peces cartilaginosos y vertebrados. Holland y col., Dev. Suppl., 125-133 (1994). Se cree que los Wnt actúan en una variedad de procesos de desarrollo y fisiológicos ya que muchas especies diversas tienen múltiples genes Wnt conservados. McMahon, Trends Genet., 8: 236242 (1992); Nusse y Varmus, Cell, 69: 1073-1087 (1992). Los genes Wnt codifican glicoproteínas secretadas que se cree funcionan como señales paracrinas o autocrinas activas en varios tipos de células primitivas. McMahon, anteriormente (1992); Nusse y Varmus, anteriormente (1992). La familia del factor de crecimiento Wnt incluye más de diez genes identificados en el ratón (Wnt-1, -2, -3A, -3B, -4, -5A, -5B, -6, -7A, - 7B, -8A, -8B, -10B, -11, -12 y -13) (véanse, por ejemplo, Gavin y col., Genes Dev., 4: 2319-2332 (1990); Lee y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 2268-2272 (1995); Christiansen y col., Mech. Dev., 51: 341-350 (1995)) y al menos nueve genes identificados en el ser humano (Wnt-1, -2, -3, -5A, -7A, -7B, -8B, -10B y -11) por clonación de ADNc. Véase, por ejemplo, Vant Veer y col., Mol. Cell. Biol., 4: 25322534 (1984). [0006] El proto-oncogén Wnt-1 (int-1) se identificó originalmente a partir de tumores mamarios inducidos por el virus del tumor mamario de ratón (MMTV) debido a una inserción de la secuencia de ADN viral. Nusse y Varmus, Cell, 31: 99-109 (1982). En ratones adultos, el nivel de expresión de ARNm de Wnt-1 se detecta sólo en los testículos durante etapas tardías del desarrollo de esperma. La proteína Wnt-1 tiene aproximadamente 42 KDa y contiene una región hidrófoba en el extremo amino que puede funcionar como una secuencia señal para la secreción (Nusse y Varmus, anteriormente, 1992). La expresión de Wnt-2 se detecta en tejidos fetales y adultos de ratón y su distribución no se solapa con el patrón de expresión de Wnt-1. Wnt-3 está asociado a tumorigénesis mamaria de ratón. La expresión de Wnt-3 en embriones de ratón se detecta en los tubos neurales y en las yemas de las extremidades. Las transcripciones de Wnt-5a se detectan en las extremidades delanteras y traseras en desarrollo a los 9,5 a 14,5 días y los mayores niveles se concentran en ectodermo apical en la punta distal de las extremidades. Nusse y Varmus, anteriormente (1992). Recientemente se ha descrito un factor de crecimiento de Wnt, llamado Wnt-x, (documento WO95/17416) junto con la detección de la expresión de Wnt-x en tejidos óseos y en células derivadas de hueso. Por tanto, se describió la función de Wnt-x en el mantenimiento de osteoblastos maduros y el uso del factor de crecimiento Wnt-x como agente terapéutico o en el desarrollo de otros agentes terapéuticos para tratar enfermedades relacionadas con los huesos. [0007] Los Wnt pueden desempeñar una función en la señalización local de células. Peifer y Polakis, Science, 287:1606-1609 (2000). Los estudios bioquímicos han demostrado que gran parte de la proteína Wnt secretada puede encontrarse asociada a la superficie celular o matriz extracelular en vez de libremente difusible en el medio. Papkoff y Schryver, Mol. Cell. Biol., 10: 2723-2730 (1990); Bradley y Brown, EMBO J., 9: 1569-1575 (1990). [0008] Los estudios de mutaciones en genes Wnt han indicado una función para los Wnt en el control del crecimiento y el diseño de tejido. En Drosophila, wingless (wg) codifica un gen relacionado con Wnt (Rijsewik y col., Cell, 50: 649-657 (1987)) y mutaciones de wg alteran el patrón de ectodermo embrionario, neurogénesis y excrecencia de disco imaginal. Morata y Lawerence, Dev. Biol., 56: 227-240 (1977); Baker, Dev. Biol., 125: 96-108 (1988); Klingensmith y Nusse, Dev. Biol., 166: 396414 (1994). En Caenorhabditis elegans, lin-44 codifica un homólogo de Wnt necesario para las divisiones de células asimétricas. Herman y Horvitz, Development, 120: 10351047 (1994). Las mutaciones de genes inactivados en ratones han demostrado que los Wnt son esenciales para el desarrollo cerebral (McMahon y Bradley, Cell, 62: 10731085 (1990); Thomas y Cappechi, Nature, 346: 847-850 (1990)), y la excrecencia de primordios embrionarios para riñón (Stark y col., Nature, 372: 679-683 (1994)), yema de la cola (Takada y col., Genes Dev., 8: 174-189 (1999)) y yema de las extremidades. Parr y McMahon, Nature, 374: 350-353 (1995). La expresión en exceso de Wnt-1 en la glándula mamaria puede dar como resultado hiperplasia mamaria (McMahon, anteriormente (1992); Nusse y Varmus, anteriormente (1992)), desarrollo alveolar precoz (Bradbury y col., Dev. Biol., 170: 553-563 (1995)) y adenocarcinomas mamarios (Li y col., Oncogene, 19:1002-1009 (2000)).

Wnt-5a y Wnt-5b se expresan en el mesordermo posterior y lateral y el mesodermo extraembrionario del embrión murino de 7-8 días. Gavin y col., anteriormente (1990). Estos dominios embrionarios contribuyen a la región AGM y tejidos de saco vitelino de los que se derivan precursores hematopoyéticos multipotentes y HSC. Dzierzak y Medvinsky, Trends Genet., 11: 359-366 (1995); Zon y col., en Gluckman y Coulombel, ed., Colloque, INSERM, 235: 17-22 (1995), presentado en the Joint International Workshop on Foetal and Neonatal Hematopoiesis and Mechanism of Bone Marrow Failure, París, Francia, 3-6 de abril de 1995; Kanatsu y Nishikawa, Development, 122: 823-830 (1996). Se han detectado Wnt-5a, Wnt-10b y otros Wnt en yemas de las extremidades que indica...

1. Un anticuerpo dirigido contra WISP-1 aislado para uso en un procedimiento para inhibir o reducir la metástasis o motilidad de células cancerosas en un mamífero, en el que el anticuerpo inhibe o reduce la motilidad o metástasis de células cancerosas.

2. Uso de un anticuerpo dirigido contra WISP-1 para la preparación de un medicamento para inhibir o reducir la metástasis o motilidad de células cancerosas en un mamífero, en el que el anticuerpo inhibe o reduce la motilidad o metástasis de células cancerosas.

3. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en el que dicho anticuerpo dirigido contra WISP-1 se une al polipéptido WISP-1 humano natural que comprende los aminoácidos 23-367 de las Figuras 9A-9C (SEQ ID NO:1) o uno o más dominios del polipéptido WISP-1 que comprende los aminoácidos codificados por las secuencias de SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 u 11.

4. El anticuerpo para uso o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo dirigido contra WISP-1 es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.

5. El anticuerpo para uso o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho cáncer comprende células de cáncer de colon o colorrectal, células de cáncer de mama, células de cáncer de pulmón o células de cáncer de cerebro.

6. El anticuerpo para uso o el uso de la reivindicación 5, en el que dicho anticuerpo inhibe o reduce la metástasis de células de cáncer de pulmón en un sitio en el mamífero secundario o diferente del sitio del tumor de pulmón primario en el mamífero.

7. El anticuerpo para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 3 a 6, en el que el procedimiento comprende además administrar quimioterapia, radiación, profármaco, agente citotóxico, agente inhibidor del crecimiento o citocina.

8. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en el que el anticuerpo es para administración con quimioterapia; radiación, profármaco, agente citotóxico, agente inhibidor del crecimiento o citocina.

9. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en el que el medicamento comprende además un agente quimioterapéutico, profármaco, agente citotóxico, agente inhibidor del crecimiento; o citocina.

10. Un procedimiento in vitro para inhibir o reducir la inducción por WISP-1 de la motilidad de células cancerosas de mamífero que comprende exponer dichas células de mamífero a una cantidad eficaz de un anticuerpo como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que dichas células de mamífero comprenden células de cáncer de colon o colorrectal, células de cáncer de mama, células de cáncer de pulmón o células de cáncer de cerebro.

12. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal que comprende el anticuerpo 3D11, 11C2, 9C10, 5D4 o 9C11 secretado por el hibridoma depositado con el número de registro de ATCC PTA-4624, PTA-4628, PTA-4626, PTA-4625 o PTA-4627, respectivamente.

13. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal que se une al mismo epítopo que el epítopo al que se une un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 12.

14. El anticuerpo para uso o el uso de la reivindicación 13, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, humano o humanizado.

15. El anticuerpo para el uso de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico que comprende una región variable o hipervariable de un anticuerpo como se define en la

reivindicación 12.

16. El anticuerpo para uso o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en el que el anticuerpo está ligado a uno o más agentes seleccionados del

5 grupo que está constituido por polímero no proteináceo, agente citotóxico, enzima, radioisótopo, compuesto fluorescente y compuesto quimioluminiscente.