PROCEDIMIENTO PARA LA PRODUCCIÓN DE PREPARACIONES DE HIDROFOBINA SECAS DE FLUJO LIBRE.

Procedimiento para la producción de preparaciones de hidrofobina secas,

de flujo libre, estables, mediante pulverización y secado de disoluciones acuosas de hidrofobina que contienen dado el caso aditivos en un dispositivo de pulverización, caracterizado porque la pulverización tiene lugar a una temperatura de aire de entrada de entre 120 y 200ºC y/o porque la pulverización tiene lugar a una temperatura de aire de salida de entre 50 y 120ºC

Procedimiento para la producción de preparaciones de hidrofobina secas de flujo libre Descripción de la invención La invención se refiere a un procedimiento mejorado para la producción de preparaciones de hidrofobina secas, de flujo libre, estables, mediante pulverización de una disolución acuosa de hidrofobina en un dispositivo de pulverización.

El aislamiento de hidrofobinas tiene lugar habitualmente como disolución acuosa. En esta forma, las hidrofobinas pierden su actividad o experimentan descomposición microbiana y sólo pueden almacenarse y transportarse con un gran despliegue. Por tanto es deseable producir preparaciones secas de hidrofobinas, que contengan la hidrofobina en forma concentrada con una pérdida lo menor posible de su acción específica. Además estas preparaciones deben estar compuestas por partículas de superficie bien configurada con un tamaño de grano de desde 50 hasta 600 µm, de modo que en la industria de transformación se garantice una mezcla homogénea de estos productos con otras sustancias o una buena aplicabilidad.

Existen diferentes procedimientos de pulverización para eliminar el agua de medios acuosos que contienen enzimas.

En la patente estadounidense 4.617.272 se pulverizan medios que contienen enzimas sobre partículas inertes calentadas en un lecho fluidizado.

Como partículas inertes adecuadas se mencionan poliolefinas, policarbonatos, poli (metacrilatos de metilo) o poliestireno.

Una desventaja de este procedimiento es que los polvos secos de enzimas producidos por medio de estas partículas inertes no pueden utilizarse en la industria de la alimentación y de los piensos.

Según otro procedimiento, que se describe en la patente DD 263 790, se producen productos de proteasas de coagulación de la leche pulverizando disoluciones acuosas de proteasa sobre vehículos que se encuentra en una granuladora de lecho fluidizado. Como vehículos se describen leche desnatada en polvo y/o sustancias que contienen dextrina.

Aunque los productos obtenidos tienen una buena estabilidad enzimática y fluencia y los vehículos usados son fisiológicamente compatibles, este procedimiento tiene la desventaja de que debe utilizarse hasta 10 veces la cantidad de vehículos con respecto a la materia sólida de enzima.

El documento EP 522269 describe un procedimiento para la producción de preparaciones enzimáticas secas, de flujo libre, estables, mediante pulverización de disoluciones acuosas enzimáticas que contienen dado el caso aditivos en un dispositivo de pulverización, caracterizado porque se pulveriza la disolución enzimática usando conjuntamente desde el 5 hasta el 60% en peso, con respecto al contenido en sólidos de enzima de la disolución, de un agente auxiliar de pulverización, compuesto por ácido silícico hidrófobo y/o una sal metálica de un ácido graso superior a de 0 a 50ºC y se secan las partículas así obtenidas, cargadas con agente auxiliar de pulverización.

La invención se basaba por tanto en el objetivo de proponer un procedimiento que permita transformar disoluciones acuosas de hidrofobina en preparaciones de hidrofobina secas estables, que puedan utilizarse en la industria de transformación.

Se encontró un procedimiento para la producción de preparaciones de hidrofobina secas, de flujo libre, estables, mediante pulverización y secado de disoluciones acuosas de hidrofobina que contienen dado el caso aditivos en un dispositivo de pulverización, caracterizado porque la pulverización tiene lugar a una temperatura de aire de entrada de entre 120 y 200ºC y/o porque la pulverización tiene lugar a una temperatura de aire de salida de entre 50 y 120ºC.

Se encontró ahora que el procedimiento definido al principio conduce a preparaciones de hidrofobina especialmente muy adecuadas, cuando se pulveriza la disolución acuosa de hidrofobina que contiene dado el caso aditivos usando conjuntamente desde el 5 hasta el 200% en peso, con respecto al contenido en sólidos de hidrofobina de la disolución, de un agente auxiliar de pulverización, compuesto por uno o varios alcoholes de azúcar y se secan las partículas así obtenidas, cargadas con agente auxiliar de pulverización.

Las hidrofobinas son proteínas pequeñas de aproximadamente 100 aa, que son característicos de los hongos filamentosos y no aparecen en otros organismos. Recientemente se descubrieron proteínas similares a la hidrofobina en Streptomyces coelicolor, que se denominan “chaplinas” y también tienen propiedades altamente tensioactivas. En las superficies límite agua/aire pueden ensamblarse las chaplinas para dar fibrillas similares a amiloide (Classen et al. 2003 Genes Dev 1714-1726; Elliot et al. 2003, Genes Dev. 17, 727-1740) .

Las hidrofobinas están distribuidas, en una forma insoluble en agua, por la superficie de diferentes estructuras fúngicas, tales como por ejemplo micelio aéreo, esporas, cuerpos fructíferos. Los genes para hidrofobinas pudieron aislarse a partir de ascomicetos, deuteromicetos y basidiomicetos. Algunos hongos contienen más de un gen de hidrofobina, por ejemplo Schizophyllum commune, Coprinus cinereus, Aspergillus nidulans. Al parecer están implicadas diferentes hidrofobinas en diferentes estados del desarrollo fúngico. Las hidrofobinas son a este respecto presumiblemente responsables de diferentes funciones (van Wetter et al., 2000, Mol. Microbiol., 36, 201-210; Kershaw et al. 1998, Fungal Genet. Biol, 1998, 23, 18-33) .

Descripción de la invención Hidrofobinas especialmente muy adecuadas para el procedimiento según la invención son polipéptidos de fórmula estructural general (I)

Xn-C1-X1-50-C2-X0-5-C3-Xp-C4-X1-100-C5-X1-50-C6-XO-5-C7-X1-50-C8-Xm (I)

en la que X puede representar cualquiera de los 20 aminoácidos que se producen de manera natural (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile, Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly) y los índices que se encuentran junto a la X representan el número de aminoácidos, representando los índices n y m números entre 0 y 500, preferiblemente entre 15 y 300, p representa un número entre 1 y 250, preferiblemente 1-100, y C representa cisteína, alanina, serina, glicina, metionina o treonina, representando al menos cuatro de los restos designados con C cisteína, con la condición de que al menos una de las secuencias peptídicas abreviadas como Xn o Xm o Xp represente una secuencia peptídica de al menos 20 aminoácidos de longitud, que no está unida de manera natural con una hidrofobina, que tras el recubrimiento de una superficie de vidrio provocan una modificación del ángulo de contacto de al menos 20º.

Los aminoácidos designados con C1 a C8 son preferiblemente cisteínas; pero también pueden sustituirse por otros aminoácidos con una ocupación de espacio similar, preferiblemente por alanina, serina, treonina, metionina o glicina. Sin embargo, al menos cuatro, preferiblemente al menos 5, de manera especialmente preferible al menos 6 y en particular al menos 7 de las posiciones C1 a C8 deben estar compuestas por cisteínas. Las cisteínas en las proteínas según la invención pueden o bien encontrarse en forma reducida o bien formar entre sí puentes disulfuro. Se prefiere especialmente la formación intramolecular de puentes C-C, en particular aquéllos con al menos uno, preferiblemente 2, de manera especialmente preferible 3 y de manera muy especialmente preferible 4 puentes disulfuro intramoleculares. En el caso del intercambio descrito anteriormente de cisteínas por aminoácidos con una ocupación espacial similar se intercambian por pares ventajosamente aquellas posiciones C que pueden formar entre sí los puentes disulfuro intramoleculares.

En caso de que en las posiciones designadas con X se usen también cisteínas, serinas, alaninas, glicinas, metioninas o treoninas, puede modificarse la numeración de las posiciones C individuales en la fórmula general de manera correspondiente.

Polipéptidos especialmente ventajosos son aquéllos de fórmula general (II)

Xn-C1-X3-25-C2-X0-2-C3-X5-50-C4-X2-35-C5-X2-15-C6-X0-2-C7-X3-35-C8-Xm (II)

en la que X puede representar cualquiera de los 20 aminoácidos que se producen de manera natural (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly) y los índices que se encuentran junto a la X representan el número de aminoácidos, representando los índices n y m números entre 2 y 300 y C representa cisteína, alanina, serina, glicina, metionina o treonina,... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la producción de preparaciones de hidrofobina secas, de flujo libre, estables, mediante pulverización y secado de disoluciones acuosas de hidrofobina que contienen dado el caso aditivos en un dispositivo de pulverización, caracterizado porque la pulverización tiene lugar a una temperatura de aire de entrada de entre 120 y 200ºC y/o porque la pulverización tiene lugar a una temperatura de aire de salida de entre 50 y 120ºC.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque se pulveriza la disolución de hidrofobina usando conjuntamente desde el 5 hasta el 200% en peso, con respecto al contenido en sólidos de hidrofobina de la disolución, de un agente auxiliar de pulverización orgánico o inorgánico, y se secan las partículas así obtenidas, cargadas con agente auxiliar de pulverización.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, para la producción de preparaciones de hidrofobina en forma de productos granulados, caracterizado porque además del dispositivo de pulverización se usa también un lecho fluidizado.

4. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque como agente auxiliar de pulverización se 15 usan uno o varios alcoholes de azúcar, celulosas o almidones.

5. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque como agente auxiliar de pulverización se usa manitol.