PROCEDIMIENTO PARA PRODUCIR LA SUBUNIDAD B DE LA TOXINA DEL COLERA.

PROCEDIMIENTO PARA PRODUCIR LA SUBUNIDAD B DE LA TOXINA DEL COLERA.

COMPRENDE: A) PROPORCIONAR UNA MOLECULA DE ADN RECOMBINANTE QUE CONTIENE UNA SECUENCIA DE ADN QUE TIENE UNA PORCION QUE CODIFICA LA TOTALIDAD O PARTE DE LA SUBUNIDAD B DE LA TOXINA DEL COLERA, MEDIANTE DIGESTION DE ADN DE UNA CEPA V. CHOLERAE PRODUCTORA DE LA SUBUNIDAD B DE LA TOXINA DEL COLERA CON LA ENDONUCLEASA CLAI; B) AISLAR UN FRAGMENTO QUE MUESTRA HIBRIDACION ESPECIFICA A UNA SONDA ELTB; C) MEZCLAR EL FRAGMENTO DE B) CON UN VECTOR QUE TIENE UN SITIO DE RESTRICCION POR ENDONUCLEASA CLAI Y QUE HA SIDO DIGERIDO PREVIAMENTE POR LA CLAI; D) INSERTAR EL FRAGMENTO EN EL SITIO DE RESTRICCION DEL VECTOR; E) TRANSFORMAR UN ORGANISMO HOSPEDANTE APROPIADO CON LA MOLECULA DE ADN RECOMBINANTE; F) CULTIVAR EL ORGANISMO HOSPEDANTE TRANSFORMADO; Y G) RECOGER LA SUBUNIDAD B DE LA TOXINA DEL COLERA. LA MOLECULA DE ADN RECOMBINANTE ES PRIT 10810. EL VECTOR APROPIADO ES EL PLASMIDO PBR 322, Y EL ORGANISMO HOSPEDANTE APROPIADO ES UNA CEPA E COLI K12 O E COLI ATCC 39051.SE UTILIZA PARA DETECTAR FRAGMENTOS DE GENES CTX B EN CEPAS DESCONOCIDAS DE V CHOLERAE.