PROCEDIMIENTO PARA LA PRODUCCION Y PURIFICACION DE SOMATOSTATINA EN CELULAS DE ESCHERICHIA COLI A PARTIR DE LA EXPRESION EN LAS MISMAS DEL GEN CODIFICANTE CLONADO EN EL VECTOR PGRV1.
Procedimiento para la producción y purificación de somatostatina en células de Escherichia coli a partir de la expresión en las mismas del gen codificante clonado en el vector pGRV1.
#Mediante técnicas básicas de ingeniería genética se ha clonado el extremo N-terminal de la beta-galactosidasa de Kluyveromyces lactis en el plásmido comercial pET17xb, generando dos sitios de restricción únicos susceptibles de ser utilizados para la clonación de secuencias codificantes de péptidos, dando lugar al plásmido pGRV1.#La secuencia codificante de la hormona somatostatina se ha obtenido mediante una amplificación en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando oligonucleótidos solapantes, clonando posteriormente el gen en el plásmido pGRV1, para dar lugar al plásmido pSOMA. La cepa de Escherichia coli BL21 (DE3) se transformó con el plásmido pSOMA dando lugar a la cepa CECT5840. Utilizando equipos de fermentación convencional se han obtenido cantidades suficientes de proteína de fusión, que tras su digestión con bromuro de cianógeno se han purificado cromatográficamente. El péptido obtenido muestra propiedades cromatográficas coincidentes con las de un patrón comercial.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: GASTEA, S.L.
Nacionalidad solicitante: España.
Provincia: ALICANTE.
Inventor/es: POLAINA MOLINA,JULIO, VICENTE GARCIA,PABLO, MOUKADIRI,ISMAIL, MAICAS PRIETO,SERGI, NIETO SORIA,ALMUDENA, MONTERO BALAGUER,MERCEDES, BOSCH MORELL,FRANCISCO, VALENTIN GOMEZ,EULOGIO.
Fecha de Solicitud: 9 de Julio de 2004.
Fecha de Publicación: .
Fecha de Concesión: 4 de Julio de 2007.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/655 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Somatostatinas.
- C12N15/00 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K).
- C12N15/70 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Vectores o sistemas de expresión especialmente adaptados a E. coli.
- C12N5/00 C12N […] › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).
Clasificación PCT:
- C07K14/655 C07K 14/00 […] › Somatostatinas.
- C12N15/00 C12N […] › Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K).
- C12N15/70 C12N 15/00 […] › Vectores o sistemas de expresión especialmente adaptados a E. coli.
- C12N5/00 C12N […] › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).
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