PROCEDIMIENTO PARA LA AMPLIFICACION SIMULTANEA DE VARIAS SECUENCIAS EN UNA REACCION PCR Y SU MARCAJE.
Procedimiento para la amplificación de ácidos nucleicos, caracterizado porque se realizan las siguientes etapas:
#a) se hace reaccionar químicamente una muestra de ácido nucleico con un reactivo, con lo que la 5-metilcitosina permanece intacta y la citosina se transforma en uracilo o en otra base similar al uracilo en el comportamiento de apareamiento de bases; #b) hibridan los segmentos a amplificar con al menos dos oligonucleótidos cebadores que presentan dos dominios, de los cuales el dominio específico de secuencia que se encuentra en el extremo 3'' hibrida con el segmento a amplificar, mientras que el dominio genérico que se encuentra en el extremo 5'' no hibrida; #c) se lleva a cabo una primera reacción de amplificación mediante una polimerasa, #d) hibrida con el producto amplificado un oligonucleótido cebador marcado, que hibrida con el dominio genérico del primer cebador y #e) se analiza el producto amplificado respecto a su secuencia, caracterizado además porque el dominio genérico del cebador contiene las nucleobases A, C, G y T, mientras que los dominios específicos de secuencia contienen sólo las bases A, T y C o sólo las bases A, T y G.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: EPIGENOMICS AG.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: KASTANIENALLEE 24,10435 BERLIN.
Inventor/es: OLEK, ALEXANDER, BERLIN, KURT, DISTLER, JURGEN, DR..
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 14 de Enero de 2009.
Clasificación PCT:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
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