Procedimiento para aislar linaclotida.
Un procedimiento para la precipitación de un péptido que comprende la etapa de:
a) proporcionar una solución acuosa de isopropanol o etanol de un péptido ciclado que incluya la secuencia deaminoácidos de (SEQ ID NO. 1)
Cys-Cys-Glu-Tyr-5 Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/054577.
Solicitante: Corden Pharma Colorado, Inc.
Inventor/es: FLEMING, MICHAEL, PAUL, PETERSEN,RAYMOND DENNIS.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/245 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Escherichia (G).
- C07K7/08 C07K […] › C07K 7/00 Péptidos con 5 a 20 aminoácidos en una secuencia totalmente determinada; Sus derivados. › con 12 a 20 aminoácidos.
PDF original: ES-2439998_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Procedimiento para aislar linaclotida La presente invención se refiere a procedimientos de aislamiento de un péptido para tratar varios trastornos, incluyendo trastornos gastrointestinales, obesidad, insuficiencia cardíaca congestiva e hiperplasia prostática benigna.
El síndrome del colon irritable (SCI) es un trastorno crónico común del intestino que afecta a de 20 a 60 millón de individuos sólo en los EE. UU. El SCI es el trastorno más común diagnosticado por los gastroenterólogos (el 28 % de los pacientes examinados) y representa el 12 % de las visitas a los médicos de atención primaria (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668) . En los EE. UU., se estima que el impacto económico del SCI es de 25 mil millones $ anualmente, a través de los costes directos del uso de la atención sanitaria y de los costes indirectos del absentismo laboral (Talley 1995, Gastroenterology 109:1736-1741) . Los pacientes con SCI presentan tres veces más absentismo laboral y se informa de una reducción en su calidad de vida. Los que lo padecen pueden ser incapaces de o estar poco dispuestos a asistir a acontecimientos sociales, mantener un empleo, o viajar incluso distancias cortas (Drossman 1993, Dig Dis Sci 38:1569-1580) . Existe una enorme necesidad médica no cubierta en esta población ya que existen pocas opciones de prescripción para tratar el SCI.
La linaclotida es un péptido 14mero primero en su clase y un agonista del receptor de guanilato ciclasa de tipo C (GCC) que estimula la producción de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) . Estudios in vitro sugieren que la linaclotida incrementó el cGMP en células intestinales humanas en concentraciones variables, y estudios in vivo en ratones y ratas mostraron que la linaclotida oral tuvo efectos prometedores en el incremento de la motilidad del intestino delgado, secreción de fluido y disminución del dolor visceral.
La linaclotida es un péptido cíclico de 14 aminoácidos con tres enlaces disulfuro, la secuencia que consiste en la (SEQ ID NO. 1) ciclada Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr
con puentes disulfuro entre los residuos de cisteína en las posiciones 1 y 6, 2 y 10, y 5 y 13 como se muestra a continuación:
Comparte una actividad farmacológica común en el tubo digestivo con las hormonas endógenas GN y UGN (GASTROENTEROLOGY, 2005, 128, 4, Supl. 2, A464) . El fármaco actúa como un superagonista de GCC, elevando de este modo el cGMP intracelular.
Típicamente, el ciclopéptido se sintetiza de forma lineal usando un sintetizador peptídico en fase sólida automatizado antes de formar los enlaces disulfuro (documentos US7.371.727; WO-2004069165; Current Opinion in Molecular Therapeutics 2007, vol. 9, n.º 4) . Sin embargo, la construcción lineal típica combinada con liofilización como procedimiento de aislamiento da como resultado un rendimiento del 10-20 % (documento US7.371.727) . La liofilización no proporciona un material a granel con propiedades óptimas para la fabricación. La densidad aparente del material liofilizado es normalmente baja, el material tiene características de manejo malas (partículas finas sometidas a carga estática) y una estabilidad reducida potencial debido a un área de superficie alta. Además, la potencia de los compuestos farmacéuticos engendra problemas de higiene industrial asociados con el manejo abierto de los materiales liofilizados. Por tanto, son necesario procedimientos mejorados de aislamiento de linaclotida, (SEQ ID NO 1) ciclada.
En un primer objetivo, la presente invención proporciona un procedimiento para precipitar un péptido que comprende la etapa de:
a) proporcionar una solución acuosa de isopropanol o etanol de péptido ciclado que incluya la secuencia de aminoácidos de (SEQ ID NO. 1)
Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr En un modo de realización preferente, la solución de alcohol es una solución de isopropanol y el procedimiento comprende además la etapa de:
b) separar con alimentación la solución resultante de la etapa a) con isopropanol para reducir el porcentaje de agua en
la solución. En otro modo de realización preferente, la solución de alcohol es una solución de etanol y el procedimiento comprende además la etapa de:
b) separar con alimentación la solución resultante de la etapa a) con etanol para reducir el porcentaje de agua en la
solución. En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 70 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de
aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 65 %. En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 60 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de
aproximadamente un 50 % a aproximadamente un 60 %. En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 55 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de
aproximadamente un 55 % a aproximadamente un 75 %. En otro modo de realización preferente, la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 60 % a aproximadamente un 75 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de
aproximadamente un 65 % a aproximadamente un 75 %. En otro modo de realización preferente, la separación con alimentación con isopropanol o etanol en la etapa b) reduce el porcentaje de agua en la solución hasta que el porcentaje de isopropanol o etanol es mayor de un 96 %, preferentemente un 97 %, más preferentemente un 98 %.
En otro modo de realización preferente, el procedimiento de la presente invención comprende además la etapa de: c) separar con alimentación la solución resultante de la etapa b) con heptano. En otro modo de realización preferente, la separación con alimentación con heptano en la etapa c) reduce el
porcentaje de isopropanol o etanol en la solución hasta que el porcentaje de heptano es mayor de un 98 %, preferentemente un 98, 5 %, más preferentemente un 99 %, aún más preferentemente un 99, 5 %, lo más preferentemente un 99, 9 %.
En un modo de realización alternativo, el procedimiento de la presente invención comprende además la etapa de: b) diluir con agua la solución resultante de la etapa a) . En otro modo de realización preferente, la solución se diluye hasta aproximadamente 3/1 v/v de agua/isopropanol o
hasta aproximadamente 3/1 v/v de agua/etanol para precipitar la SEQ ID No. 1.
En un segundo objetivo, la presente invención proporciona un procedimiento para aislar un péptido que comprende las etapas de: a) proporcionar una solución acuosa de isopropanol o etanol de péptido ciclado que incluya la secuencia de
aminoácidos de (SEQ ID NO. 1) Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr b) secar por pulverización la solución resultante de la etapa a) . 3
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 70 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 65 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 60 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 50 % a aproximadamente un 60 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 55 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 55 % a aproximadamente un 75 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 60 % a aproximadamente un 75 %.
En otro modo de realización preferente, la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 65 % a aproximadamente un 75 %.
Definiciones La expresión "un" o "una" entidad como... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un procedimiento para la precipitación de un péptido que comprende la etapa de: a) proporcionar una solución acuosa de isopropanol o etanol de un péptido ciclado que incluya la secuencia de aminoácidos de (SEQ ID NO. 1) 5 Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la solución de alcohol es una solución de isopropanol y el procedimiento comprende además la etapa de:
b) separar con alimentación la solución acuosa resultante de la etapa a) con isopropanol para reducir el porcentaje de agua en la solución.
3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la solución de alcohol es una solución de etanol y el procedimiento comprende además la etapa de:
b) separar con alimentación la solución resultante de la etapa a) con etanol para reducir el porcentaje de agua en la solución.
4. El procedimiento de la reivindicación 2 o 3, en el que la separación con alimentación con isopropanol o etanol en la etapa b) reduce el porcentaje de agua en la solución hasta que el porcentaje de isopropanol o etanol es mayor de un 95 %, preferentemente un 96 %, más preferentemente un 97 %, lo más preferentemente un 98 %.
5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende además la etapa de:
c) separar con alimentación la solución resultante de la etapa b) con heptano para reducir el porcentaje de isopropanol o etanol en la solución.
6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que la separación con alimentación con heptano en la etapa c) reduce el porcentaje de isopropanol o etanol hasta que el porcentaje de heptano es mayor de un 98 %, preferentemente un 98, 5 %, más preferentemente un 99 %, aún más preferentemente un 99, 5 %, lo más preferentemente un 99, 9 %.
7. El procedimiento de la reivindicación 1, que comprende además la etapa de: 25 b) diluir con agua la solución resultante de la etapa a) .
8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la solución se diluye hasta aproximadamente 3/1 v/v de agua/isopropanol o hasta aproximadamente 3/1 v/v de agua/etanol para precipitar la SEQ ID No. 1.
9. Un procedimiento para el aislamiento de un péptido que comprende las etapas de: a) proporcionar una solución acuosa de isopropanol o etanol de un péptido ciclado que incluya la secuencia de
aminoácidos de (SEQ ID NO. 1) Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr b) secar por pulverización la solución resultante de la etapa a) .
10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2.
4. 6 y 9, en el que la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 70 %.
11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 65 %.
12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 45 % a aproximadamente un 60 %.
13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que la solución de isopropanol acuosa es una solución de 40 isopropanol acuosa de aproximadamente un 50 % a aproximadamente un 60 %.
14. El procedimiento de la reivindicación 13, en el que la solución de isopropanol acuosa es una solución de isopropanol acuosa de aproximadamente un 55 %.
15. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3.
4. 6 y 9, en el que la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 55 % a aproximadamente un 75 %.
16. El procedimiento de la reivindicación 15, en el que la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 60 % a aproximadamente un 75 %.
17. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que la solución de etanol acuosa es una solución de etanol acuosa de aproximadamente un 65 % a aproximadamente un 75 %.
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