Procedimiento para la obtención de ácido betulínico de elevada pureza mediante extracción a partir de corteza y/o capa externa de plátano,

molidas, caracterizado porque se llevan a cabo los siguientes pasos consecutivos para aislar el ácido betulínico: a) extracción a partir de corteza de plátano en una mezcla de solventes consistente en toluol y uno o varios C1-4-alcoholes con una relación entre toluol y los alcoholes mencionados entre 80:20 y 95:5; b) remoción de la mezcla de solventes del extracto; c) disolución del residuo en un solvente adecuado; d) separación de ácido betulínico del material filtrado

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a un procedimiento en gran escala para obtener ácido betulínico de gran

pureza a partir de corteza de plátano molida. El ácido betulínico es ácido 3β-hidroxi-lup-20(29)-en-28 de la

fórmula:

**(Ver fórmula)**

Se sabe que el ácido betulínico presenta una acción contra el desarrollo de células de melanoma

(por ejemplo, Pisha et al., Nature Medicine, 1, 1995, 1046 y sigs.) así como contra otras células

cancerosas (por ejemplo Sunder et al., Patente de los EE.UU. de América Nº 6,048,847). Además, sus derivados deberían poder utilizarse contra el VIH (por ejemplo Evers et al., J. Med. Chem. 39, 1996, 1056 y sigs.; Soler et al., J. Med.Chem. 39, 1996 y sigs., o Butler, Nat. Prod. Rep., 2005, 22, 162 y sigs. Por lo tanto existe una gran necesidad de ácido betulínico.

Además de su preparación sintética (por ejemplo L. Ruzicka et al., Helv. Chim. Acta, 21, 1938, 1076 y sigs.) es posible obtener ácido betulínico de diversas plantas, en especial árboles, así por ejemplo de la corteza de Picramnia pentandra (por ejemplo Herz et al., Phytochemistry 11, 1972, 3061 y sigs.), de la corteza de Arbustis menziesii (Robinson et al., Phytochemistry 9, 1970, 907 y sigs.), y de la corteza de Ziziphus mauritania (por ejemplo, Pisha et al., Nature Medicine 1, 1995, 1046 y sigs).

A partir de estos materiales de partida es posible aislar el ácido betulínico sólo con dificultad. En cambio, parece tener más perspectivas su obtención de la corteza y/o capa externa del plátano. En el documento DE 197 13 768 se propone un procedimiento para obtener ácido betulínico, en el que se somete a extracción un polvo obtenido de la capa exterior de plátano, mediante un solvente de polaridad media como por ejemplo diclorometano, cloroformo o éter dietílico.

Sin embargo, este procedimiento no es adecuado para una obtención industrial de grandes cantidades de ácido betulínico, ya que deben emplearse volúmenes muy grandes de solvente de polaridad media a efectos de extraer el ácido betulínico (es necesario utilizar 7 litros de diclorometano para procesar 150 g de capa externa de plátano en polvo). Además, una extracción efectuada en una columna de vidrio bajo elevada presión hidrostática no es adecuada para obtener grandes cantidades, y es problemática desde el punto de vista de la seguridad.

Bruckner et al., J. Chem.Soc. 1948, 948-951 describen un procedimiento para la obtención de ácido betulínico de capa externa de plátano, en el que las capas externas molidas se someten a extracción con metanol, se reúne el extracto obtenido y se recristaliza el concentrado en presencia de carbón varias veces a partir de metanol. Sin embargo, el ácido betulínico obtenido de esta manera presenta todavía una pluralidad de impurezas.

En el documento WO 03/066659 se revela un procedimiento para la obtención de ácido betulínico a partir de un extracto metanólico de corteza de plátano molida. El rendimiento en forma bruta es del 2,3 % referido a la corteza de plátano utilizada, pero no presenta la pureza deseada, a pesar de que se realiza un paso de purificación adicional que abarca la agitación del extracto con n-hexano.

Por ello el objetivo de la presente invención es el de poner a disposición un procedimiento mejorado para obtener ácido betulínico a partir de corteza de plátano, que también sea adecuado para su 40 empleo en gran escala técnica.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y REALIZACIONES PREFERIDAS

Se ha descubierto ahora de manera sorprendente que es posible elevar manifiestamente la

producción mediante el procedimiento conforme a la invención. Por otra parte, por el hecho de evitarse el

empleo de material de cromatografía es posible mantener reducida la cantidad de desechos.

45 En correspondencia a ello, la presente invención se basa en un procedimiento mejorado para la obtención de ácido betulínico de alta pureza sometiendo a extracción corteza de plátano y/o capa externa

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de plátano, molidas, caracterizado porque la extracción se lleva a cabo con una mezcla de solventes consistente en toluol y uno o varios alcoholes C1-6.

Se prefiere especialmente una mezcla de solventes consistente en toluol y metanol, etanol, npropanol, 2-propanol, n-butanol, t-butanol, n-pentanol, (+-)-2-pentanol o 3-pentanol.

Una mezcla de solventes preferida consiste en toluol y dos alcoholes seleccionados del grupo consistente en metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol, n-butanol, t-butanol, n-pentanol, (+-)-2-pentanol o 3-pentanol. Se prefiere especialmente que la mezcla de solventes consista en toluol, metanol y un segundo alcohol (etanol, n-propanol, 2-propanol, n-butanol, t-butanol, n-pentanol, (+-)-2-pentanol o 3pentanol), de manera especialmente preferida toluol, metanol y (+-)-2-pentanol. Gracias al procedimiento de la invención es posible recuperar muy bien la mezcla de solventes empleada, por lo que la pérdida de solvente durante el proceso del reciclado es reducida, y a tal efecto ha demostrado ser adecuado toluol en una relación con respecto a los alcoholes anteriormente mencionados entre 80:20 y 95:5.

Se prefiere especialmente el procedimiento arriba descrito en el que antes de la extracción se humedece la corteza de plátano con agua. Por otra parte esto puede mejorar la trabajabilidad de la corteza de plátano y por otra parte reducir la carga de polvo en el medio ambiente.

El procedimiento recién descrito puede llevarse a cabo de manera continua o como procedimiento discontinuo (de a lotes); se prefiere el procedimiento mencionado arriba en el que la extracción tiene lugar de manera continua.

Es preferible que el procedimiento se lleve a cabo la manera continua teniendo la mezcla de solventes un caudal o gasto de 0,2 m3/h a 6 m3/h dentro de un intervalo de tiempo de 2 h a 48 h, preferiblemente de 5 h a 35 h, en especial de 15 h a 25 h. Para ello pueden emplearse instalaciones de extracción de tipo batería de magnitudes y tipos constructivos diversos. Las cantidades diarias promedias de corteza de plátano en polvo para la extracción puede variar entre 500 kilos y 8 toneladas.

Se prefiere especialmente el procedimiento mencionado arriba en el que la extracción tiene lugar a una temperatura del 20 a 110 ºC, preferiblemente de 40 a 90 ºC, de manera especialmente preferida de 50 a 70 ºC.

Para obtener el ácido betulínico a partir del extracto bruto se acoplan otros pasos más al procedimiento. Conforme al procedimiento de la invención se llevan a cabo los siguientes pasos consecutivos para aislar el ácido betulínico:

a) extracción a partir de corteza de plátano en una mezcla de solventes como se define en lo que precede;

b) remoción de la mezcla de solventes del extracto;

c) disolución del residuo en un solvente adecuado;

d) separación del ácido betulínico del material filtrado.

Como solvente adecuado en el paso c) se recurre a mezclas de C1-4-cloroalcanos o a ésteres de ácido acético y C1-4-alcoholes. Los cloroalcanos preferidos son diclorometano y cloroformo, los ésteres de ácido acético preferidos son metil éster de ácido acético, metil éster de ácido acético, éster 2-propílico de ácido acético, y los alcoholes preferidos son metanol, etanol y 2-propanol. Se prefiere especialmente una mezcla de diclorometano y metanol en relaciones de 5:1 a 1:2, preferiblemente 3:1 a 1:1, de manera especialmente preferida 2:1 a 1,5:1. En este caso se aplica una cantidad adecuada de solvente o de mezcla de solventes, referida al residuo sólido, Se prefiere una relación de 5 a 30 litros, de manera especialmente preferida de 16 a 20 litros por kilogramo de material sólido. En este caso, la separación del ácido betulínico tiene preferentemente lugar por enfriamiento lento del material filtrado a de -15 a 10 ºC, preferiblemente de -10 a 10 ºC, de manera especialmente preferible de 0 a 10 ºC, dentro de un intervalo de tiempo de 5 a 50 h, preferiblemente de 5 a 20 h, de manera especialmente preferida de 10 a 15 h. Seguidamente es posible separar el ácido betulínico purificado en forma de material sólido mediante procedimientos conocidos de la técnica (filtrado de vacío, centrifugadora, decantador, filtro de presión, secador de filtro, etc.) de la lejía madre, y... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la obtención de ácido betulínico de elevada pureza mediante extracción a partir de corteza y/o capa externa de plátano, molidas, caracterizado porque se llevan a cabo los siguientes pasos consecutivos para aislar el ácido betulínico:

5 a) extracción a partir de corteza de plátano en una mezcla de solventes consistente en toluol y uno o varios C1-4-alcoholes con una relación entre toluol y los alcoholes mencionados entre 80:20 y 95:5; b) remoción de la mezcla de solventes del extracto; c) disolución del residuo en un solvente adecuado; d) separación de ácido betulínico del material filtrado. 10 2. Procedimiento conforme a la reivindicación 1, caracterizado porque antes de la extracción se humedece la corteza de plátano con agua. 3. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque se efectúa la extracción de manera continua. 4. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se efectúa 15 la extracción a una temperatura de 20 a 110 ºC. 5. Procedimiento conforme a una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque entre los pasos b) y c) se llevan a cabo los pasos siguientes: b1) suspender y disolver el residuo en propanol, butanol o una mezcla de los mismos; b2) mezclar con una masa de filtro o de absorción; 20 b3) filtrar la suspensión; b4) separar el ácido betulínico bruto del extracto filtrado. 6. Procedimiento conforme a la reivindicación 5, caracterizado porque la masa de filtro o absorción consiste en carbón activado o en tierra de infusorios.