Procedimiento para la inactivación de contaminantes no deseados en extractos de sanguijuelas.

Procedimiento para la inactivación de virus y/o bacterias en un extracto de sanguijuela,

caracterizado porque elextracto de sanguijuelas se hace circular entre un tanque con agitador y un dispositivo de irradiación, en el que elmedio está sometido a una irradiación con luz ultravioleta.

Procedimiento para la inactivación de contaminantes no deseados en extractos de sanguijuelas La invención se refiere al campo de la inactivación de virus y/o bacterias mediante irradiación electromagnética. Es objetivo de la presente invención un procedimiento para la inactivación de virus y/o bacterias en extractos de 5 sanguijuelas.

Las sanguijuelas se usan desde antiguo para la terapia médica. Su gran capacidad de adsorción de sangre se usó ya en la antigua Grecia y especialmente en la Edad Media para la extracción médica de sangre del cuerpo (sangría) .

Al comienzo del siglo XIX llegaron los extractos de sanguijuelas al mercado que presentaban efectos inhibidores de la coagulación. En el año 1955 se extrajo por vez primera de sanguijuelas un polipéptido con el nombre de hirudina.

La hirudina se une a los puntos de unión del fibrinógeno de la trombina e inhibe mediante un estolón el centro activo, con lo que se bloquea este efecto.

Una revisión histórica de los extractos de sanguijuelas e hirudina se da en la siguiente publicación: Nowak, G. & Schrör, K. (2007) : Hirudin - the long and stony way from an anticoagulant peptide in the saliva of medicinal leech to a recombinant drug and beyond. A historical piece en: Thromb. Haemodst. tomo 98, páginas 116-119.

Para la obtención de sustancias terapéuticamente activas a partir de sanguijuelas, se trituran y homogenizan mecánicamente sanguijuelas congeladas (por ejemplo, de Hirudo medicinalis, Hirudo verbana y especies relacionadas con ellas) o componentes de las mismas. En un procedimiento de extracción y purificación en varias etapas se puede obtener un principio activo, que se puede usar por ejemplo en una crema para el tratamiento de la insuficiencia venosa y dolencias hemorroidales agudas.

Debido a que los extractos de sanguijuelas son un producto procedente de materias primas naturales es de gran importancia la seguridad frente a contaminantes no deseados tales como bacterias o virus. En la implementación de un concepto de seguridad frente a virus se prescribe expresamente el uso de técnicas complementarias, por ejemplo técnicas complementarias en el mecanismo de acción (véase, por ejemplo, Guideline Q5A der International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharma-ceuticals for Human Use (ICH) ) .

De este modo se asegura que se abarca un amplio espectro de virus.

Procedimientos establecidos para la inactivación de bacterias y virus con envoltura de gran tamaño son tratamiento ácido, tratamiento con disolventes orgánicos, tratamiento con detergentes y pasteurización, que se usan individuamente o preferiblemente en combinación.

Sin embargo para virus sin cápside de pequeño tamaño como, por ejemplo, parvovirus, estos procedimientos no son 30 efectivos.

Un procedimiento para la eliminación de virus sin envoltura de pequeño tamaño lo representa la nanofiltración. A este respecto se realiza la separación mediante exclusión por tamaños: una membrana retiene virus, cuyo tamaño se encuentra con seguridad dentro del corte determinado.

En la nanofiltración existe no obstante el problema de que pequeños virus sin cápside pueden tener un tamaño similar al de la sustancia terapéutica deseada. Por ello no es posible filtrar de forma segura agentes patógenos pero tampoco la proteína. La consecuencia es una pérdida de producto elevada, inaceptable, que conduce a un procedimiento no económico.

En la nanofiltración de extractos de sanguijuelas se evidenció en ensayos propios que la velocidad de flujo que se puede conseguir por superficie de membrana es extremadamente baja. Al mismo tiempo se llegó después de un tiempo de procesamiento muy corto a un bloqueo de las superficies del filtro. Estos bloqueos no eran reversibles. Mediante las medidas habituales como, por ejemplo, lavado en contracorriente, no se pudieron dejar de nuevo los filtros en un estado operativo. Con este rendimiento extremadamente bajo de la nanofiltración al mismo tiempo que con costes altos para una unidad de filtro un procedimiento de nanofiltración para la eliminación de extractos de sanguijuelas se aleja de una aplicación económica en una producción farmacéutica.

Un procedimiento adicional para la inactivación de virus es la irradiación con luz ultravioleta (radiación UV) . El reto especial en este procedimiento se encuentra en la irradiación homogénea del medio que se va a procesar. El propósito es matar con seguridad y de manera amplia los microorganismos y/o virus al mismo tiempo que se mantiene en gran medida las sustancias valiosas sensibles. De forma particular productos de fuentes de materias primas naturales presentan una composición compleja, múltiple. En general los distintos componentes de producto muestran una diferente estabilidad frente a la irradiación con UV. Esto dificulta el compromiso entre inactivación de virus y mantenimiento de la calidad de producto.

Un criterio importante para la idoneidad del producto es el acortamiento de la exposición del producto en la zona de irradiación. Debido a la duración de tratamiento promedio necesaria se determinan mediante las partículas que atraviesen con la mayor rapidez la zona de irradiación, para la reducción de la duración de tratamiento el requerimiento es una distribución de tiempo de residencia lo más uniforme posible dentro de la corriente de producto. Los problemas en el uso de reactores para la irradiación con luz ultravioleta en medios fluidos resultan de una intensidad de irradiación exponencialmente decreciente con separación creciente de la fuente de radiación en el

medio que se va a tratar. Por este motivo, los microorganismos y virus que se encuentran a una mayor distancia de la fuente de radiación son eliminados más lentamente o no se eliminan en absoluto.

Este efecto, que se refuerza considerablemente con capacidad de absorción de luz creciente del medio, conduce según el estado de la técnica actual al uso de superficies de irradiación mucho mayores, como se encuentran, por ejemplo, en reactores de capa fina. Los reactores de capa fina que se encuentran en uso pueden transformarse sin embargo solo difícilmente a la escala industrial, ya que mantener constante el espesor de película en la ampliación de escala solo puede realizarse mediante una ampliación del diámetro proporcional al caudal, lo que conduce a escala industrial a reactores de gran tamaño que ya no son manejables.

Otra influencia negativa la constituye la progresión desfavorable del tiempo de residencia que se da casi siempre con pequeñas profundidades de penetración de la radiación UV en el medio de retención necesarmiente muy finas y 20 con ello películas de líquidos de flujo laminar, en las que decae un intercambio traversal respecto a la dirección de corriente principal. Las capas próximas a la pared permanecen, debido al perfil de velocidad linealmente decreciente hasta cero respecto a la pared, esencialmente más tiempo que las capas alejadas de la pared. Para poder llevar a cabo la dosis de irradiación mínima necesaria para la muerte también en la capa de líquido alejada de la pared que fluye rápidamente, debe elevarse el tiempo de residencia promedio de la película. Sin embargo esto conduce a una carga de radiación elevada y por tanto a un mayor daño de los productos.

En la bibliografía (documentos EP 1 339 643A1, EP 1 337 280A1) se describe el comportamiento del tiempo de residencia especialmente favorable en canales de corriente en forma de espiral. Un producto fluye por un canal de corriente en forma helicoidal. Con la conducción de corriente helicoidal se llega en el canal hasta el flujo secundario, las denominadas turbulencias Dean, que garantizan una mezcla intensiva y al mismo tiempo cuidadosa. Mediante el

gran efecto de mezcla de la turbulencia se lleva a cabo una distribución estrecha del tiempo de residencia y de la distribución de dosis. De este modo es posible, alcanzar de forma intencionada una dosis de radiación efectiva, que es suficiente para inactivar virus sin cargar fuertemente el producto. Este denominado concepto de dosis es independiente del tamaño del módulo, de modo que se da el aumento de escala de laboratorio a escala de producción.

La irradiación con UV en un denominado módulo en espiral se establece principalmente de modo que se lleve a cabo un único paso corriente por el módulo en espiral. Según la turbidez del líquido que se va a procesar se puede variar la velocidad de flujo en el módulo en espiral dentro de determinados límites. Los límites resultan de la formación necesaria de la corriente secundaria y de la pérdida de presión en el módulo. Si no fuera suficiente la velocidad... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la inactivación de virus y/o bacterias en un extracto de sanguijuela, caracterizado porque el extracto de sanguijuelas se hace circular entre un tanque con agitador y un dispositivo de irradiación, en el que el medio está sometido a una irradiación con luz ultravioleta.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la irradiación con luz ultravioleta se realiza en el intervalo de 100 nm a 280 nm, preferiblemente en el intervalo de 200 nm a 280 nm.

3. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque el extracto de sanguijuelas presenta con una longitud de onda de 254 nm una densidad óptica en el intervalo de hasta 72, preferiblemente en el intervalo de 30 a 65, con especial preferencia en el intervalo de 40 a 60.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la relación de caudal volumétrico bombeado respecto al volumen total se encuentra en el intervalo de 0, 5 a 80 l/h, preferiblemente en el intervalo de 1 a 60 l/h, con especial preferencia en el intervalo de 3 a 45 l/h.

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la temperatura del extracto de sanguijuelas se mantiene en el intervalo de 2 °C a 25 °C, preferiblemente en el intervalo de 4 °C a 20 °C, con 15 especial preferencia en el intervalo de 8 °C a 15 °C.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque antes y/o después de la irradiación del extracto de sanguijuelas se hace pasar un medio transparente a través de la instalación y se mide la intensidad de la irradiación introducida en el medio o que pasa por el medio.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la relación de volumen entre el

tanque con agitador (15) y el dispositivo de irradiación (20/21) se encuentra en el intervalo de 1 a 1000, preferiblemente en el intervalo de 5 a 500, con especial preferencia en el intervalo de 10 a 200.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el dispositivo de irradiación está formado por uno o varios módulos en espiral (20/21) conectados preferiblemente en paralelo, siendo un módulo de espiral un dispositivo que proporciona al menos una fuente de irradiación ultravioleta y al menos un canal que discurre de modo helicoidal en torno a un eje.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque el canal que discurre helicoidalmente (95) está dispuesto de modo que pasa en torno a una fuente de irradiación ultravioleta (80) .

10. Procedimiento según la reivindicación 8 ó 9, caracterizado porque el canal (90) presenta un perfil en sección

transversal que está aplanado al menos por una cara, y preferiblemente por esta cara aplanada se aplica irradiación 30 ultravioleta (80) en el canal.

11. Procedimiento según una de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque el perfil en sección transversal del canal (90) tiene forma de D, forma de rombo o forma rectangular.

12. Procedimiento según una de las reivindicaciones 8 a 11, caracterizado porque el módulo en espiral (90)

comprende un cilindro hueco (100) , sobre el que se monta un tubo en espiral fijado por fricción o en arrastre de 35 forma (90/95) y en el que se introduce una fuente de irradiación ultravioleta.

13. Procedimiento según una de las reivindicaciones 8 a 12, caracterizado porque el módulo en espiral está configurado de modo que al menos los componentes irradiados (90/95/100) se realizan como piezas desechables.

Fig. 1

Proceso de extracción de sanguijuelas

Fig. 2

Preparación de extracto de sanguijuelas (liofilizado)

Fig. 7