PROCEDIMIENTO IN VITRO PARA LA DIAGNOSIS DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS.

Procedimiento in vitro para la diagnosis de enfermedades neurodegenerativas. [0001] La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento in vitro para la diagnosis de enfermedades neurodegenerativas, y en particular, de enfermedades de demencia tales como la enfermedad de Alzheimer. [0002] Dentro del marco de la presente invención el concepto de diagnóstico (o diagnosis) se usa como concepto general para determinaciones médicas que según el estado clínico del paciente al que se le efectúa la determinación pueden estar basadas en distintos planteamientos y sirven en particular para la detección y la detección precoz, la determinación del grado de severidad y la valoración evolutiva, y también la valoración evolutiva como acompañamiento a la terapia y la prognosis de la futura evolución de una enfermedad. A este respecto tiene además particular importancia el hecho de que un diagnóstico puede ser también un diagnóstico negativo, en el que en vista de la no detectabilidad de una determinada característica típica de enfermedad, como p. ej. la no determinabilidad de un biomarcador asociado a la enfermedad en cuestión en una muestra de sangre de un paciente, se excluye con fiabilidad la existencia de una determinada enfermedad. [0003] Para el diagnóstico negativo son también de gran valor biomarcadores que pueden encontrarse incrementados en varias distintas enfermedades y por consiguiente aún no permiten en solitario y por sí solos diagnóstico positivo alguna de una enfermedad específica; si bien por regla general y cuando se añadan adicionales parámetros clínicos o bioquímicos pueden también ser decisivos para el diagnóstico positivo. [0004] Las enfermedades de cuya diagnosis se ocupa la presente invención son enfermedades neurodegenerativas crónicas de etiología no infecciosa que evolucionan más bien lentamente, y son en particular enfermedades de demencia presenil. [0005] Se califican de enfermedades de demencia (demencia) en general las enfermedades para las que una característica común es la pérdida de capacidades intelectuales adquiridas, y ante todo de la memoria y del nivel de personalidad normal como consecuencia de lesiones cerebrales. Las enfermedades de demencia son enfermedades de carácter crónico que por regla general evolucionan con relativa lentitud. Si surgen fenómenos de demencia en la mediana edad y antes de la edad avanzada, se les califica de enfermedades de demencia presenil, y entre las mismas se distinguen sobre la base de los síntomas y de las modificaciones cerebrales patológicas que se dan típicamente para las mismas en particular las siguientes enfermedades, o mejor dicho los siguientes grupos de enfermedades: [0006] La demencia de Alzheimer (AD) (enfermedad de Alzheimer; Morbus Alzheimer) es la enfermedad de demencia neurodegenerativa más frecuente y constituye los 2/3 de todos los casos de demencia. La AD se distingue por tres importantes características patológicas, que por cierto no son detectables con seguridad más que post mortem: La formación de placas amiloides y de haces neurofibrilares, así como la pérdida de células nerviosas (para la sinopsis, véase 19; los datos de referencias de la literatura que se dan en la descripción en forma de números se refieren a la lista de referencias de la literatura que se da a continuación de la descripción). Las placas amiloides constan de agregados extraneuronales de la proteína ß-amiloide, mientras que los haces de neurofibrillas contienen principalmente proteína tau y neurofilamentos. Se presume que la formación de placas de neurofibrillas es la causa de la necrosis de células nerviosas. [0007] Los síntomas más importantes de la AD son los crecientes trastornos de la capacidad de concentración y de la capacidad de razonamiento con irritabilidad relativamente persistente, yendo estos síntomas acompañados de otros trastornos menos específicos que dificultad la delimitación entre la AD y otras formas de demencia. [0008] La demencia con corpúsculos de Lewy (dementia with lewy-bodies: DLB) es después de la demencia de Alzheimer la segunda causa más común de enfermedad demencial. Neuropatológicamente la DLB está caracterizada por la aparición de los llamados corpúsculos de Lewy en el tronco cerebral y en la corteza. Estos corpúsculos de Lewy constan predominantemente de agregados de la proteína presináptica ( -sinucleina) y ubiquitina. La patología de los corpúsculos de Lewy puede en distinta medida estar asociada a las modificaciones neuropatológicas típicas del Parkinson y del Alzheimer. Así, también en la DLB se produce la formación de beta-amiloide y de placas seniles, pero no se producen haces de neurofibrillas (para la sinopsis, véase 14). También en el cerebro de pacientes con Morbus Parkinson hay corpúsculos de Lewy, si bien en una distinta distribución. [0009] Son síntomas centrales de DLB un trastorno cognitivo progresivo, episodios de confusión mental con un fluctuante estado de atención y de conciencia, el parkinsonismo, y frecuentes caídes y síncopes (desmayos de corta duración del tipo de un ataque). La sensibilidad y especificidad de los criterios diagnósticos presentan en todos casos una alta especificidad, pero en parte una muy baja sensibilidad. Esto significa que en la cotidianeidad clínica a menudo no se diagnostica la DLB. 2   [0010] La demencia frontotemporal (FTD) se denomina también enfermedad de Pick y supone aproximadamente el 20% de las enfermedades de demencia presenil. La FTD está en parte condicionada genéticamente y se cuenta entre las llamadas tauopatías, que se distinguen por una sobreexpresión o subexpresión de un subtipo de proteína tau o por la expresión de una proteína tau mutada. Neuropatológicamente se produce una atrofia local de la cortaza frontal y/o temporal, así como de la substantia nigra y de los ganglios basales. Esto trae como consecuencia trastornos del habla diversamente pronunciados, una modificación del carácter y excentricidades del comportamiento. En total la FTD es subdiagnosticada con una sensibilidad de un 93% para una especificidad de tan sólo un 23%, representando la AD el diagnóstico erróneo más frecuente. [0011] Se agrupan bajo el concepto de demencia vascular (vascular dementia; VAD) enfermedades en las que es provocada una demencia debido a trastornos de la perfusión en el cerebro. Hay distintos tipos de VAD, de los cuales la demencia con infartos múltiples (MID) y la VAD subcortical (también denominada enfermedad de Binswanger) representan las formas más frecuentes. [0012] En el caso de la enfermedad de Binswanger se trata de una evolución demencial lentamente progresiva que patológicamente está caracterizada por lesiones cerebrovasculares en la sustancia cerebral blanca. Clínicamente esto redunda en excentricidades del comportamiento tales como agitación, irritabilidad, depresión y euforia, así como en un ligero trastorno de la memoria. [0013] La demencia con infartos múltiples se produce gradualmente como consecuencia de varias pequeñas apoplejías cerebrales, también llamadas ataques isquémicos transitorios (TIA), que condujeron al perecimiento de tejido cerebral en la corteza y/o en regiones subcorticales. Las apoplejías cerebrales también pueden haber pasado totalmente desapercibidas, siendo la demencia en este caso la primera consecuencia perceptible. En caso de haber una MID, se produce una disminución escalonada de capacidades cognitivas, combinada con severas depresiones, saltos de humor y epilepsia. [0014] Un diagnóstico de enfermedades de demencia se efectúa hoy en día preponderantemente sobre la base de exámenes neuropsicológicos y de la observación del desarrollo de la enfermedad y de su evolución, recurriendo a criterios de exclusión para determinadas formas de demencia. Estos exámenes dan en muchísimos casos resultados ambiguos que aclaran las cifras anteriormente mencionadas para las formas de demencia subdiagnosticadas o los casos diagnosticados incorrectamente. Naturalmente, las modificaciones del cerebro típicas de enfermedad no pueden constatarse directamente en pacientes vivientes, y los exámenes con aparatos médicos de las funciones cerebrales p. ej. mediante tomografía de rayos X o tomografía de resonancia magnética nuclear son aparatosos y caros. [0015] Para la diagnosis del Alzheimer publicaron el Instituto Ronald y Nancy Reagan de la Asociación de Alzheimer y el Grupo de Trabajo del NIA (NIA = Instituto Nacional del Envejecimiento) directrices para los criterios que se establecen para un biomarcador ideal para la detección de la AD (7). En el caso ideal el biomarcador debe satisfacer los criterios siguientes: 1. Debería ser cerebro-específico y detectar una característica fundamental de la neuropatología de estas enfermedades. 2. Debería darse una sensibilidad diagnóstica y una especificidad de al menos un... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vitro para la detección, para determinación del grado de severidad y para la valoración evolutiva y la prognosis de enfermedades neurodegenerativas, caracterizado por el hecho de que en un fluido biológico de un paciente que padece de una enfermedad neurodegenerativa o del que se tiene la sospecha de la existencia de una enfermedad de este tipo se determina la presencia y/o la concentración de un péptido parcial de proadrenomedulina fisiológicamente inactivo, y sobre la base de la constatada presencia y/o concentración o de la ausencia del determinado péptido parcial se sacan conclusiones con respecto a la existencia, a la evolución, al grado de severidad o al éxito de una terapia de la enfermedad neurodegenerativa. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que el procedimiento de determinación es un procedimiento de determinación inmunodiagnóstico. 3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por el hecho de que se determina en el plasma de un paciente un péptido parcial de proadrenomedulina de la región media (MR-proADM; ID SEC Nº: 2) que presenta los aminoácidos 45-92 de la preproadrenomedulina completa (ID SEC Nº: 1). 4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 2 o 3, caracterizado por el hecho de que el procedimiento de determinación inmunodiagnóstica es un inmunoensayo del tipo sándwich. 5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por el hecho de que la enfermedad neurodegenerativa es una enfermedad de demencia presenil que está seleccionada de entre los miembros de un grupo que consta de la demencia de Alzheimer (AD), la demencia con corpúsculos de Lewy (DLB), la demencia frontotemporal (FTD) y diversas formas de la demencia vascular (VD). 6. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado por el hecho de que se ejecuta dentro del marco de la diagnosis del Alzheimer. 7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por el hecho de que se ejecuta dentro del marco de una determinación multiparamétrica en la que se determina al mismo tiempo al menos otro parámetro bioquímico o fisiológico con valor diagnóstico para el respectivo cuadro de enfermedad, y en la que se obtiene un resultado de medición en forma de un conjunto de al menos dos magnitudes de medición, que se valora para el diagnóstico de precisión de la enfermedad neurodegenerativa. 8. Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado por el hecho de que dentro del marco de la determinación multiparamétrica además de la determinación del péptido parcial de proadrenomedulina se determina al menos otro parámetro bioquímico que se selecciona de entre los miembros de los grupos que constan de los mediadores inflamatorios, los componentes del complemento, las citoquinas, las quimioquinas, los coagulantes sanguíneos y los factores fibrinolíticos, las proteínas de fase aguda y los compuestos radicales. 9. Procedimiento según la reivindicación 7 u 8, caracterizado por el hecho de que la determinación multiparamétrica se efectúa como determinación simultánea mediante un dispositivo de medición con tecnología de chips o mediante un dispositivo de medición inmunocromatográfica. 10. Procedimiento según una de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado por el hecho de que la evaluación del complejo resultado de medición de la determinación multiparamétrica se hace con ayuda de un programa de ordenador.   11