Procedimiento de administración de FGF-18.

Una composición para administración intra-articular de polipéptidos condrogénicos que comprende una mezcla farmacéuticamente aceptable que comprende FGF18 y un vehículo negativamente cargado,

en la que el vehículo negativamente cargado está seleccionado entre el grupo que consiste en:

hialuronanos, en los que los hialuronanos son formas de hialuronanos de bajo peso molecular o formas de hialuronanos de alto peso molecular;

proteoglucanos sulfatados;

tetradecasulfato de B-ciclodextrina; y

microesferas de alginato.

Procedimiento de administración de FGF-18. Antecedentes de la invención

La familia del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) consiste en al menos veintitrés miembros distintos (Basilico y col., Adv. Cáncer Res. 59, 115-165, 1992 y Fernig y col. Prog Growth Factor Res. 5(4):353-377, 1994) que generalmente actúan como mitogenes para un amplio espectro de tipos celulares. FGF 18 se ha identificado como un miembro de la familia de FGF que se ha relacionado de la manera más estrecha con FGF18 y FGF17. Las actividades asociadas a FGF18 incluyeron las simulaciones de las células de linaje mesenquimal, en particular los miocitos cardíacos, osteoblastos y condrocitos (patente de EE.UU. N°. 6.352.971). FGF18 tiene enlaces y activa FGF4 y las variantes de empalme "lile" de FGFR3 y FGFR2. Se ha comprobado que FGFR3 juega un papel en el crecimiento óseo. Los ratones convertidos por completo en homocigóticos para FGFR3(-/-) dieron lugar a anormalidades esqueléticas después del nacimiento (Colvin y col, Nature Genet. 12:39-397, 1996 y Deng y col., Cell 84:911-921, 1996). El fenotipo mutante sugiere que en ratones normales, FGFR-3 juega un papel en la regulación de la división celular del condrocito en el crecimiento de la región de placa del hueso (Goldfarb, Cytokine and Growth Factor Rev. 7(4):311-325, 1996). También se han encontrado mutaciones del receptor FGF en síndromes de condrodisplasia y craniosinostosis (Omitz y Marie, Genes and Development 16: 1446-1465, 22).

La remodelación ósea es el proceso dinámico por el cual se mantienen la masa tisular y la arquitectura del esqueleto. El proceso es un equilibrio entre la resorción ósea y la formación ósea, siendo dos tipos de células las consideradas como los agentes principales. Estas células son los osteoblastos y los osteoclastos. Los osteoblastos sintetizan y depositan matriz para generar nuevo hueso. Las actividades de los osteoblastos y osteoclastos se regulan por medio de muchos factores, sistémicos y locales, que incluyen factores de crecimiento.

Cuando la resorción ósea supera a la formación ósea, tiene lugar una pérdida neta de hueso, y aumenta la propensión a fracturas. Una menor formación ósea está asociada al envejecimiento y determinados estados de patologías. Solo en Estados Unidos, existen aproximadamente 1,5 millones de fracturas al año, que se atribuyen a la osteoporosis. El impacto de estas fracturas sobre la calidad de vida del paciente es enorme. Se estima que los costes asociados al sistema sanitario de Estados Unidos son de 5-1 millones de dólares al año, excluyendo los costes a largo plazo.

Otras aplicaciones terapéuticas para los factores de crecimiento que influyen en la remodelación ósea incluyen, por ejemplo, el tratamiento de lesiones que requieren la proliferación de osteoblastos para la curación, tales como fracturas, así como la estimulación de la proliferación de células mesenquimales y la síntesis de hueso intra- membranoso que se han indicado como aspectos de la reparación de fracturas (Joyce y col., 36° Annual Meeting, Orthopaedic Research Society, Febrero 5-8, 199, Nueva Orleans, LA).

La sustitución del cartílago articular dañado provocado por lesión o enfermedad es un reto principal para los médicos, y los tratamientos disponibles se consideran impredecibles y eficaces únicamente durante un tiempo limitado. Final y actualmente todos los tratamientos disponibles para el daño del cartílago están basados en el alivio del dolor, con escaso o nulo énfasis en la regeneración de los tejidos dañados. Por tanto, la mayoría de los pacientes jóvenes no buscan un tratamiento o se les aconseja posponer el tratamiento durante el mayor tiempo posible. Cuando se requiere el tratamiento, el procedimiento convencional es una sustitución total de la articulación o microfractura, un procedimiento que implica la penetración del hueso sub-condral para estimular la deposición de fibro-cartílago por parte de los condrocitos. Aunque la deposición de fibro-cartílago no es un equivalente funcional del cartílago articular, actualmente es el mejor tratamiento disponible debido a que se ha logrado escaso éxito en la sustitución del cartílago articular. Se están investigando dos enfoques para estimular la deposición de cartílago articular: estimulación de la actividad del condrocito in vivo y expansión ex vivo de los condrocitos y sus progenitores para el trasplante (Jackson y col, Arthroscopy: The J. of Arthroscopy and Related Surg. 12:732-738, 1996). Además, la regeneración o reparación del cartílago elástico es apreciable para el tratamiento de lesiones y defectos en oído y nariz. Cualquier factor de crecimiento con especificidad por las células de linaje de condrocito que estimule la proliferación de las mismas, diferenciación o inducción de la producción de cartílago será apreciable para mantener, reparar o sustituir el cartílago articular.

Generalmente, la administración de proteínas requiere una formulación que prolongue la semivida o la actividad biológica de la proteína activa aumentando la resistencia a la degradación proteolótica o la agregación. El suministro de una composición terapéutica proteínica también puede resultar difícil cuando el sitio de acción terapéutica se limita preferentemente a una ubicación específica en el cuerpo. La presente invención proporciona formulaciones de FGF18 que son más fáciles de administrar y más eficaces, y otros usos que deberían resultar evidentes para los expertos en la técnica a partir de las consideraciones de la presente memoria.

El documento WO /78356 describe conjugados de polisacáridos inyectables de hialuronato-sulfatado.

Shimoaka T y col., JBC, 1 de marzo de 22, Vol. 277 (9), páginas 7493-75, describe la regulación de funciones

de osteoblastos, condrocitos y osteoclastos por parte de FGF18 en comparación con FGF2 y FGF1.

Ellsworth JL y col., Osteoarthritis and Cartilage, Vol. 1(4), 1 de abril 22, páginas 38-32, presenta que FGF18 es un factor trófico para condrocitos maduros y sus progenitores.

El documento US 6221854 describe un procedimiento para promover el crecimiento óseo con ácido hialurónico y factores de crecimiento.

El documento WO 1/78682 describe composiciones de fármaco de liberación prolongada.

El documento WO 98/16644 describe homólogos de FGF.

Antes de explicar la invención con detalle, puede resultar útil para su comprensión la definición de los siguientes

términos:

La expresión "cola de afinidad", según se usa en la presente memoria, indica un segmento de polipéptido que se puede unir a un segundo polipéptido para la purificación o detección del segundo polipéptido o para proporcionar sitios para la unión del segundo polipéptido a un sustrato. Principalmente, se puede usar cualquier péptido y/o proteínas para el cual se encuentre disponible un anticuerpo o agente de unión específico, como cola de afinidad. Las colas de afinidad incluyen una proteína A de tracto de poli-histidina (Nilsson y col., EMBO. J. 4:175, 1985; Nilsson y col., Methods Enzymol, 198:3, 1991), glutatión S transferasa (Smith y Johnson, Gene 67:31, 1988), cola de afinidad Glu-Glu (Grussenmeyer y col., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU 82:7952-4, 1985), sustancia P, péptido Flag (Hopp y col., Biotechnology 6: 124-1, 1988), péptido de unión a estreptavidina, u otro epítopo antigénico o dominio de unión. Véase, en general, Ford y col., Protein Expression and Purification 2: 95-17, 1991. Las colas de afinidad que codifican ADNs se encuentran disponibles a partir de suministradores comerciales (por ejemplo, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ).

La expresión "variante alélica", según se usa en la presente memoria, indica cualquiera de las dos o más formas alternativas de un gen que ocupa el mismo locus cromosómico. La variación alélica surge de forma natural a través de mutación, y puede ser el resultado de polimorfismo fenotípico dentro de las poblaciones. Las mutaciones génicas pueden ser silentes (sin cambio en el polipéptido codificado) o pueden codificar polipéptidos que tienen la secuencia de amino ácidos alterada. La expresión variante alélica también se usa en la presente memoria para indicar una proteína codificada por una variante alélica de un gen.

Los términos "amino-terminal" y "carboxilo-terminal", según se usan en la presente memoria, indican posiciones dentro de los polipéptidos. Cuando el contexto lo permite, estos términos se usan con referencia a una secuencia particular o parte de un polipéptido para indicar proximidad o posición relativa. Por ejemplo, una secuencia determinada ubicada en carboxilo-terminal con respecto a una secuencia dentro de un polipéptido se encuentra ubicada en posición próxima al... [Seguir leyendo]

1.- Una composición para administración ¡ntra-articular de polipéptidos condrogénicos que comprende una mezcla farmacéuticamente aceptable que comprende FGF18 y un vehículo negativamente cargado, en la que el vehículo negativamente cargado está seleccionado entre el grupo que consiste en:

hialuronanos, en los que los hialuronanos son formas de hialuronanos de bajo peso molecular o formas de

hialuronanos de alto peso molecular;

proteoglucanos sulfatados;

tetradecasulfato de B-ciclodextrina; y

microesferas de alginato.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el vehículo negativamente cargado es un hialuronano de bajo peso molecular o un hialuronano de alto peso molecular.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en la que dicha composición es una formulación de liberación retardada.

4. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que dicha formulación de liberación retardada comprende una matriz seleccionada entre el grupo que consiste en una disolución, un gel, una pasta o una masilla.

5. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que dicha formulación de liberación retardada comprende un sistema de reserva.

6. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que además comprende un fármaco anti-inflamatorio.

7. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de reparación de tejido cartilaginoso por medio del aumento de la proliferación de condrocitos en una articulación de un mamífero que lo necesita.

8. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de tratamiento de la osteoartritis en un mamífero.

9. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7 ó 8, en el que dicha composición es para administración al interior de la cavidad sinovial.

1. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7 ó 8, en el que dicha composición es una formulación de liberación retardada.

11. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha formulación de liberación retardada comprende una matriz seleccionada entre el grupo que consiste en una disolución, un gel, una pasta o una masilla.

12. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha formulación de liberación retardada comprende un sistema de reserva.

13. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en el que dicha composición es para administración por inyección.

14. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en el que dicha composición es para administración por implante quirúrgico.

15. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en el que dicha composición permite el crecimiento de un nuevo tejido de cartílago y la formación quirúrgica del contorno de la nueva superficie de cartílago.

16. El uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para la reparación de tejido cartilaginoso por medio del aumento de la proliferación de condrocitos en una articulación de un mamífero.

17. El uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la osteoartritis en un mamífero.

18. El uso de acuerdo con la reivindicación 16 ó 17, en el que dicho medicamento o dicha composición es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 3-6.

19. Una composición como se define en la reivindicación 1 ó 2, para su uso en un procedimiento para mantener el tejido cartilaginoso en una articulación dañada por osteoartritis, artritis reumatoide o lesión traumática.

2. El uso de una composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para 5 mantener tejido cartilaginoso en una articulación dañada por osteoartritis, artritis reumatoide o lesión traumática.