Preparación de una composición terapéutica.

Un péptido de SEC ID No: 1.

Preparación de una composición terapéutica ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

1. Campo de la invención

La presente invención se refiere a un nuevo polipéptido útil como un modulador inmunitario para tratar diversas infecciones víricas y enfermedades del sistema inmunitario.

2. Descripción de la técnica relacionada

El concepto de un agente antivírico compuesto de peptonas, péptidos, proteínas y ácido nucleico se originó en 1934. Después de algunos años de experimentación, tal agente antivírico se modificó usando seroalbúmina bovina en combinación con peptona, un ácido ribonucleico para producir un agente biótico antivírico que es no tóxico, está libre de propiedades anafilactogénicas, y es miscible con fluidos tisulares y sueros sanguíneos. El agente usado se describe como un "compuesto de lipopéptido-ácido nucleico"1, y se registró con la marca RETICULOSE® por Chemico Laboratories, Inc. Physician Desk Reference, p. 651, 1960. RETICULOSE® se ha dado a conocer como un agente antivírico para tratar una variedad de infecciones víricas humanas, tales como gripe, herpes, hepatitis A y B. Después se supuso que RETICULOSE® actúa como un agente antivírico al menos incrementando la leucogénesis, la síntesis de anticuerpos, y potenciando la fagocitosis. Finalmente, RETICULOSE® se vendió en los Estados Unidos de América en 1964.

El método para obtener RETICULOSE® se ha mantenido como un secreto industrial por el fabricante hasta la expedición de la patente U.S. 5.849.196, que describe el método para obtener RETICULOSE®.

Como se describe en la patente U.S. 5.849.196, los materiales de partida para obtener RETICULOSE® consisten, en peso, en 40-50% de caseína, 1-10% de albúmina sanguínea, 15-40% de peptona de carne de vacuno, 10-25% de ARN y 5-25% de hidróxido sódico. Estos materiales de partida se suspendieron en agua, que produce una relación de proteínas (caseína, peptona y albúmina sanguínea) a agua igual a alrededor de 4, 3 a alrededor de 100 en peso. Después de un tratamiento con autoclave de la mezcla de los materiales de partida, la disolución resultante se filtra y el pH se ajusta a aproximadamente 8, 5 y después a 7, 8, después de lo cual la disolución neutralizada se filtra nuevamente. El pH se ajusta adicionalmente hasta aproximadamente 7, 5 después de que se diluye la disolución. Tal procedimiento produce una mezcla de péptidos y ácidos nucleicos que tienen pesos moleculares en un intervalo de aproximadamente 1 a 25 kDa.

Como enseña la patente U.S. 5.849.196, los componentes de alrededor de 15 kDa de la composición convencional de RETICULOSE® son más eficaces tratando enfermedades víricas tales como VIH, el virus de la gripe, el virus del herpes simple, etc., mientras que los componentes en un intervalo de aproximadamente 1 a 15 kDa funcionan como inhibidores de la fagocitosis.

Sin embargo, los métodos convencionales sufren varias desventajas: 1) el método no asegura que cada preparación produzca los componentes acabados con la misma relación, y de ese modo el producto no es reproducible; 2) el método convencional produce un amplio intervalo de componentes acabados, lo que hace extremadamente difícil, si es posible, el control de calidad de la preparación, debido a que es necesario determinar demasiados parámetros; 3) la presencia de los componentes de mayor peso molecular, tales como el componente de 25 kDa, esencialmente péptidos, aumenta el riesgo de hipersensibilidad o de reacción inmunitaria, y hace al producto menos estable. Por lo tanto, es deseable tener un producto desprovisto de las deficiencias de RETICULOSE® convencional, a la vez que mantenga sus propiedades terapéuticas. También es deseable identificar y aislar ingredientes o componentes activos de tal producto de forma que el modo de acción del Producto R se puede estudiar posteriormente y se pueden desarrollar nuevos agentes terapéuticos.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

En consecuencia, un objeto de la presente invención se refiere a un nuevo péptido identificado y aislado de la composición Producto R que se describe en la solicitud de patente U.S. Serie Número 09/344.095.

Otro objeto de la presente invención se refiere a un nuevo péptido que muestra efecto terapéutico.

Un objeto adicional de la presente invención se refiere a los usos terapéuticos del nuevo compuesto peptídico para tratar enfermedades tales como infecciones víricas o trastornos del sistema inmunitario.

Otros objetos y características de la presente invención serán manifiestos a partir de la siguiente descripción detallada considerada en conjunto con los dibujos que se acompañan. Sin embargo, se ha de entender que los dibujos se diseñan simplemente con fines ilustrativos y no como una definición de los límites de la invención, para la cual se ha de hacer referencia a las reivindicaciones anejas. Se debería entender además que los dibujos no están dibujados necesariamente a escala, y que, excepto que se indique de otro modo, están destinados simplemente a ilustrar conceptualmente las estructuras y procedimientos descritos aquí.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

En los dibujos:

La Figura 1 muestra un perfil de absorción ultravioleta representativo del Producto R;

la Figura 2 muestra un cromatograma representativo del Producto R obtenido a partir de un análisis de HPLC

de fase inversa; la Figura 3 muestra un perfil de fraccionamiento de BioGel P-2 del Producto R; la Figura 4 muestra los componentes de la fracción I del perfil de fraccionamiento de BioGel P-2 resueltos en una electroforesis de 16% de SDS-gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) ;

la Figura 5 muestra la masa relativa (Mr) de los dos componentes peptídicos principales del Producto R resueltos en 16% de SDS-PAGE; la Figura 6 es un 16% de SDS-PAGE, que muestra los efectos de una variedad de enzimas catabólicas sobre el Producto R;

la Figura 7 es un histograma citométrico de flujo, que muestra el efecto del Producto R sobre la fagocitosis de Dextrano-FITC; la Figura 8 es un histograma citométrico de flujo, que muestra el efecto del Producto R sobre la fagocitosis de Dextrano-BoDipyFL; la Figura 9 es un espectro de RMN de protón del Péptido A; la Figura 10 es un espectro de HSQC de carbono/hidrógeno del Péptido A; la Figura 11 es un espectro de RMN de protón del Péptido B; la Figura 12 es un espectro de RMN de fósforo 31 del Péptido B; la Figura 13 es un espectro de HSQC de carbono/hidrógeno del Péptido B; la Figura 14 es un espectro de RMN de C-13 del Péptido B; la Figura 15 muestra la estructura del Péptido B; la Figura 16 muestra la naturaleza del enlace entre serina 18 y el dinucleótido en el Péptido B; la Figura 17 muestra la estructura general de un péptido enlazado con un dinucleótido; la Figura 18 es un dato espectral de masas para el Péptido B; la Figura 19 muestra el efecto de la concentración del componente peptídico del Producto R sobre la secreción de IL-8 y MCP-1 por células U937; y la Figura 20 muestra el efecto de los péptidos A y B, aislados del Producto R, sobre la secreción de IL-8 y MCP-1 por células U937. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA REALIZACIÓN ACTUALMENTE PREFERIDA Preparación del Producto R Generalmente, el Producto R se prepara de acuerdo con la siguiente manera. En primer lugar, los materiales de partida caseína, peptona de ternera, ARN, BSA, e hidróxido sódico, se suspenden en proporciones de, en peso, 35-50% (caseína) , 15-40% (peptona de carne de vacuno) , 10-25% (ARN) , 1-10% (BSA) y 5-25% (hidróxido de sodio) en un volumen apropiado de agua destilada. Todos los materiales de partida están generalmente disponibles, o de otro modo se pueden preparar fácilmente por una persona de pericia normal en la técnica. Aunque cualquier ARN es adecuado para el fin pretendido de la presente invención, se prefiere ARN vegetal, y el más preferido es ARN de levadura. La relación de proteínas totales frente al volumen de agua destilada es generalmente alrededor de 1, 5-2, 5 a alrededor de 100 en peso, preferiblemente alrededor de 2, 2 a alrededor de 100 en peso. Esto significa que cada 1, 5-2, 5 gramos de las proteínas totales están suspendidos en alrededor de 100 mililitros de agua destilada.

Todos los materiales de partida están generalmente disponibles en el comercio, o se pueden preparar fácilmente por una persona de pericia normal en la técnica.

La suspensión como se prepara anteriormente se somete entonces a autoclave a una presión de aproximadamente... [Seguir leyendo]

1. Un péptido de SEC ID No: 1.

2. El péptido de la reivindicación 1, en el que dicho péptido se forma mediante un procedimiento que comprende las etapas de:

a. formar una mezcla que incluye una combinación de proteínas que consiste en caseína, peptona de carne de vacuno y seroalbúmina bovina, un ARN vegetal y una base en agua, en el que la relación de dicha combinación de proteínas a dicho agua está en un intervalo de alrededor de 1, 5/100 a alrededor de 2, 5/100 en peso;

b. procesar dicha mezcla a una temperatura elevada y a una presión elevada para formar una disolución y 10 elementos insolubles;

c. eliminar dichos elementos insolubles;

d. diluir dicha disolución con agua; y

e. después de llevar a cabo las etapas b, c y d, ajustar el pH de dicha disolución hasta un pH fisiológicamente aceptable.