Potenciador de la actividad anticancerosa en terapia viral y método de prevención o de tratamiento del cáncer.

Un virus del herpes simple recombinante que se replica selectivamente en células cancerosas para su uso en la prevención o el tratamiento del cáncer en un paciente,

que comprende la coadministración de interleucina 18 y el virus del herpes simple recombinante, de manera simultánea o secuencial, en donde la coadministración de la interleucina 18 es sistémica, y en donde el gen !34.5 y el gen ICP6 del virus del herpes simple recombinante se han delecionado o inactivado.

Potenciador de la actividad anticancerosa en terapia viral y método de prevención o de tratamiento del cáncer

Antecedentes La presente invención se refiere a un potenciador de la actividad anticancerosa en terapia viral, que contiene, como componente efectivo, interleucina. La presente invención también se refiere a un método de prevención o de tratamiento del cáncer, en el que la interleucina se coadministra con el virus del herpes simple recombinante.

Basándose en el conocimiento de los mecanismos citomoleculares de infección viral, en los mecanismos genéticos relacionados con la carcinogénesis y en los mecanismos biológicos moleculares causantes de la proliferación de células cancerosas, en los últimos años se han producido virus que se replican selectivamente en células cancerosas por modificación del genoma viral usando técnicas de modificación por ingeniería genética, y se están realizando intentos para aplicar estos virus en el tratamiento del cáncer.

En 1991, Martuza et al., propusieron el concepto de la aplicación de virus recombinantes para el tratamiento del cáncer (véase, por ejemplo, Martuza, R.L. et al., Science 252: 854-6 (1991) ) . Muchos virus son propiamente patógenos y también tienen un efecto negativo sobre las células normales cuando se administran inatenuados, por ejemplo, a seres humanos. Sin embargo, a través de la deleción de genes específicos por recombinación genética, pueden construirse virus que son incapaces de sintetizar ADN viral en células normales y por tanto, son incapaces de replicarse en células normales, pero son capaces de replicarse en células tumorales proliferantes debido a una compensación en su interior durante la función de los genes delecionados.

Los virus oncolíticos, que se han modificado por recombinación genética, para replicarse selectivamente solo en las células cancerosas, se replican in situ cuando se infectan en células cancerosas y mediante este proceso ocasionan la destrucción de las células cancerosas hospedadoras. Los virus replicados se propagan después al medio circundante y vuelven a infectar a células cancerosas, después de lo cual muestran una actividad antitumoral por repetición de las etapas de replicación, muerte celular, propagación e infección. Por otro lado, los virus terapéuticos que tienen las células normales infectadas, son incapaces de replicarse y como resultado de esto no producen daños a tejidos normales.

Un ejemplo de un virus mutante de este tipo es el virus mutante dlsptk, que se construye por deleción del gen de la timidina quinasa (tk) del genoma del virus del herpes simple de tipo 1 (HSV-1) . El dlsptk es incapaz de sintetizar ADN viral en células normales y por tanto es incapaz de replicarse en células normales; sin embargo, la alta actividad tk de las células tumorales proliferantes compensa la pérdida de la tk viral y el virus es entonces capaz de replicarse. En modelos tumorales cerebrales de animales, se ha demostrado que la infección de células tumorales con dlsptk da como resultado la aparición de un efecto terapéutico a través de la rotura selectiva de únicamente células tumorales (véase, por ejemplo, Martuza, R.L. et al., Science 252: 854-6 (1991) ) .

El HSV-1 se clasifica como un virus de ADN bicatenario con envoltura y tiene las siguientes características que son ventajosas para el tratamiento del cáncer: 1) puede infectar muchos tipos de células humanas; 2) se ha esclarecido el ciclo de vida y la secuencia genómica de este virus; 3) se conoce la función de la mayoría de los genes de este virus y puede aplicarse manipulación genética; y 4) el gran tamaño del genoma viral (aproximadamente 152 kb) hace que sea posible integrar genes grandes o números múltiples de genes. El HSV-1 también tiene las siguientes ventajas en cuanto a su aplicación clínica: 5) la muerte de toda la población de células tumorales es posible a una baja multiplicidad de infección (MOI) ; 6) se dispone de fármacos antivirales que inhiben la replicación viral; 7) los anticuerpos anti-HSV-1 en la sangre no afectan a la propagación de infección de célula a célula por el virus; 8) dado que existen ratones y primates no humanos sensibles al HSV-1, puede realizarse una evaluación preclínica sobre la seguridad y eficacia en animales; y 9) el ADN viral no se integra en el genoma de la célula hospedadora y permanece episomal.

Dentro de la esfera de virus oncolíticos, hasta ahora el autor de la presente invención ha desempeñado una función importante en el desarrollo de G207, un HSV-1 con deleción del gen !34.5 con un gen ICP6 inactivado (consultar, por ejemplo, Chahlavi, A. et al., Neoplasia 1: 162-169 (1999) ; Hunter, W.D. et al., J. Virol. 73: 6319-6326 (1999) ; Chahlavi, A. et al., Gene Ther. 6: 1751-1758 (1999) ; Nakamura, S. et al., Glia 28: 53-65 (1999) ; Todo, T. et al., Hum. Gene Ther. 10: 2741-2755 (1999) ; Todo, T. et al., Hum. Gene Ther. 10: 2869-2878 (1999) ; Todo, T. et al., Cancer Gene Ther. 7: 939-946 (2000) ; Markert, J.M. et al., Gene Ther. 7: 867-874 (2000) ; Todo, T. et al., Mol. Ther. 2: 588595 (2000) ; Nakano, K. et al., Mol. Ther. 3: 431-437 (2001) ; Varghese, S. et al., Hum. Gene Ther. 12: 999-1010 (2001) ; Jorgensen, T.J. et al., Neoplasia 3: 451-456 (2001) ; y Todo, T. et al., San Diego, Academic Press: 45-75 (2001) ) , y también ha inventado y desarrollado G47∀, un HSV-1, en el que, además de los dos genes ya mencionados, el gen ICP47 (conocido también como gen #47) también está inactivado (consultar, por ejemplo, la Solicitud US Publicada 2002/0187163A1; Todo, T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 6396-6401 (2001) ) . Aunque tanto el G207 como el G47∀ han perdido la capacidad de replicarse en tejido normal, conservan la capacidad de replicarse en células tumorales. Debido a la modificación de tres genes en su interior, el G47∀ es en particular muy

útil como virus terapéutico ya que presenta una alta especificidad tumoral y es altamente inocuo.

Adicionalmente, en investigaciones realizadas utilizando ratones con sistemas inmunitarios normales, el autor de la presente invención descubrió que el HSV-1 genéticamente recombinante, después de inoculación intratumoral, no solo se proliferaba dentro del tumor, mediante lo cual presenta una actividad destructora celular, sino que también suscita una inmunidad antitumoral específica, potenciando por lo tanto su actividad antitumoral (consultar, por ejemplo, Todo, T. et al., Hum. Gene Ther. 10: 2741-2755 (1999) ; Todo, T. et al., Hum. Gene Ther. 10: 2869-2878 (1999) ; y Toda M. et al., Hum. Gene Ther. 10: 385-393 (1999) ) . Por ejemplo, cuando el G207 se inoculó por vía intratumoral en tumores N18 (neuroblastoma) generados por vía subcutánea en ratones A/J, se indujo una inmunidad antitumoral sistémica asociada con una elevación de actividad por linfocitos T citotóxicos (CTL) específicos contra células N18, y el crecimiento de tumores subcutáneos o intracelulares distantes también se inhibió. Ratones curados por tratamiento con G207 adquieren una inmunidad protectora específica tumoral y la elevación en la actividad CTL específica de células N18 persiste durante más de un año. En otras palabras, la inoculación intratumoral del HSV-1 oncolítico también actúa como una vacuna contra el cáncer in situ, que es extremadamente ventajosa desde un punto de vista clínico por las siguientes razones: no se requiere identificación de un antígeno tumoral; mayor conveniencia en comparación con el método ex vivo que requiere, entre otras cosas, el cultivo de células tumorales; y la posibilidad de que el tratamiento del foco primario también sea capaz de suprimir el foco metastásico a través de una inmunidad antitumoral sistémica Hara I et al (Cancer Gene Therapy, vol. 7, páginas 83 a 90, 2000) , describen la administración de IL-18 e IL-12 en células tumorales. Toda M et al (J. Immunol., vol. 160, páginas 4457 a 4464) , desvelan un HSV que expresa IL-12. El documento WO2002/076216 se refiere a vectores virales, tales como vectores HSV-1 y métodos de uso de dichos vectores para tratar enfermedades. Fujioka et al (J. of Virology, mar. 1999, páginas 2401 a 2409) examinan el efecto de IL-18 contra infección aguda del HSV-1. Malmgaard et al (J. of General Virology, 2003, 84. 2497-2500) investigan el efecto de IL-12 e IL-18 sobre la infección del HSV-2.

Sumario En el tratamiento del cáncer utilizando un virus del herpes simple recombinante (denominado más adelante simplemente HSV recombinante) tal como el G207, la introducción de una cantidad de virus suficiente en el tejido tumoral es un requisito previo para poner de manifiesto su efecto. Sin embargo, no siempre es necesario que esta circunstancia ideal se realice clínicamente.

Un método y/o... [Seguir leyendo]

1. Un virus del herpes simple recombinante que se replica selectivamente en células cancerosas para su uso en la prevención o el tratamiento del cáncer en un paciente, que comprende la coadministración de interleucina 18 y el virus del herpes simple recombinante, de manera simultánea o secuencial, en donde la coadministración de la interleucina 18 es sistémica, y en donde el gen !34.5 y el gen ICP6 del virus del herpes simple recombinante se han delecionado o inactivado.

2. El virus del herpes simple recombinante de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la prevención o el tratamiento del cáncer comprenden adicionalmente una administración local de interleucina 12 en un tejido tumoral.

3. El virus del herpes simple recombinante de acuerdo con la reivindicación 2, el ADN genómico del virus del herpes simple recombinante que comprende un gen expresable que codifica la interleucina 12. 15

4. El virus del herpes simple recombinante de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en inyección en un tejido tumoral.

5. El virus del herpes simple recombinante de acuerdo con la reivindicación 4, para su uso en la prevención o el

tratamiento del cáncer en una localización en el paciente fuera del tejido tumoral inyectado con el virus del herpes simple.

6. El virus del herpes simple recombinante de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el

que el gen ICP47 del virus del herpes simple recombinante también se ha delecionado o inactivado. 25

7. Interleucina 18 para su uso en la prevención o el tratamiento del cáncer en un paciente, que comprende la coadministración de interleucina 18 y de un virus del herpes simple recombinante que se replica selectivamente en células cancerosas, de manera simultánea o secuencial, en donde la interleucina 18 es para administración sistémica y en donde el gen !34.5 y el gen ICP6 del virus del herpes simple recombinante se han delecionado o inactivado.

8. Interleucina 18 de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la prevención o el tratamiento del cáncer comprende adicionalmente una administración local de interleucina 12 en un tejido tumoral.

9. Interleucina 18 de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el ADN genómico del virus del herpes simple recombinante comprende un gen expresable que codifica la interleucina 12.

10. Interleucina 18 de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en donde el virus del herpes simple recombinante se administra por inyección en un tejido tumoral. 40

11. Interleucina 18 de acuerdo con la reivindicación 10, para su uso en la prevención o el tratamiento del cáncer en una localización en el paciente fuera del tejido tumoral inyectado con el virus del herpes simple.

12. Interleucina 18 de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, en donde el gen ICP47 del virus 45 del herpes simple recombinante también se ha delecionado o inactivado.