POLIPEPTIDOS Y ACIDOS NUCLEICOS QUE LOS CODIFICAN.

Ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido PRO245, o el complemento del mismo,

en el que el polipéptido:

(i) comprende los aminoácidos 1 a 312 de la figura 2 (SEC ID No. 64) o una forma madura de la misma;

(ii) comprende una forma truncada o secretada de forma natural, una forma de variante natural o una variante alélica natural del polipéptido de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64);

(iii) tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64); o

(iv) tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia

Polipéptidos y ácidos nucleicos que los codifican.

Campo de la invención

La presente invención se refiere de modo general a la identificación y aislamiento de ADN novedoso y a la producción recombinante de polipéptidos novedosos codificados por ese ADN.

Antecedentes de la invención

Las proteínas extracelulares y transmembrana juegan importantes papeles en la información, diferenciación y mantenimiento de los organismos pluricelulares. El destino de muchas células individuales, por ejemplo, proliferación, migración, diferenciación o interacción con otras células, normalmente está dirigido por la información recibida desde otras células y/o en el entorno inmediato. Esta información a menudo la transmiten polipéptidos de secreción (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos u hormonas) que son, a su vez, recibidos e interpretados por diversos receptores celulares o proteínas transmembrana. Estos polipéptidos de secreción o moléculas de señalización pasan a través de la ruta de secreción celular para alcanzar su lugar de acción en el entorno extracelular, normalmente en una proteína receptora transmembrana.

Las proteínas de secreción tienen varias aplicaciones industriales, incluyendo su uso como productos farmacéuticos, de diagnóstico, biosensores y bioreactores. De hecho, la mayoría de fármacos proteicos disponibles en el presente, como agentes trombolíticos, interferones, interleucinas, eritropoyetinas, factores de estimulación de colonias y otras varias citoquininas, son proteínas de secreción. Sus receptores, que son proteínas transmembrana, tienen además un potencial como agentes terapéuticos o de diagnóstico. Los receptores inmunoadhesinas, por ejemplo, se pueden emplear como agentes terapéuticos para bloquear la interacción receptor/ligando. Las proteínas transmembrana se pueden también emplear para la selección de péptidos potenciales o pequeñas moléculas inhibidoras de la interacción receptor/ligando pertinente. Tales proteínas transmembrana y receptores celulares, incluyen, pero no se limitan a, citoquininas, receptores, receptor quinasas, receptor fosfatasas, receptores implicados en las interacciones célula-célula y moléculas de adhesión celular como selectinas e integrinas. La transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celular está regulada en parte por la fosforilación de varias proteínas celulares. Las proteína tirosina quinasas, enzimas que catalizan ese proceso, pueden actuar además como receptores de factores de crecimiento. Algunos ejemplos incluyen el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos y el receptor del factor de crecimiento nervioso.

Se están realizando esfuerzos tanto a nivel industrial como académico para identificar proteínas de secreción receptoras transmembrana nativas, nuevas. Muchos de los esfuerzos se están centrando en la selección de genotecas de ADN recombinante de mamíferos para identificar las secuencias codificantes de proteínas de secreción y transmembrana novedosas. Algunos ejemplos de procedimientos y técnicas de selección están descritos en la bibliografía [ver por ejemplo, Klein y col., Proc. Nati. Acad. Sci., 93: 7108-7113 (1996)]; Patente de EE.UU. Nº 5.536.637].

En la presente memoria descriptiva nosotros describimos la identificación y caracterización de polipéptidos de secreción y transmembrana novedosos y ácidos nucleicos novedosos que codifican esos polipéptidos.

PRO245

Algunas de las proteínas más importantes implicadas en la regulación y modulación de los procesos celulares descritos anteriormente son las enzimas que regulan los niveles de fosforilación de proteína en la célula. Por ejemplo, se sabe que la transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celular se regula, por lo menos en parte, mediante la fosforilación y desfosforilación de varias proteínas celulares. Las enzimas que catalizan estos procesos incluyen las proteínas quinasas, que actúan fosforilando varias proteínas celulares, y las proteínas fosfatasas, que actúan eliminando los residuos de fosfato de varias proteínas celulares. De este modo, el equilibrio del nivel de la fosforilación de proteínas en la célula está mediado por las actividades relativas de estos dos tipos de enzimas.

Aunque se han identificado muchas enzimas proteína quinasa, el papel fisiológico jugado por muchas de estas proteínas catalíticas aún debe elucidarse. Sin embargo, es bien conocido, que un conjunto de las proteínas quinasas conocidas actúan fosforilando residuos de tirosina en proteínas, conduciendo de este modo a una variedad de efectos diferentes. Quizás, de manera más importante, ha habido un gran interés en las proteínas tirosina quinasa, ya que el descubrimiento de que muchos productos oncogenes y factores de crecimiento poseen actividad intrínseca de proteínas tirosina quinasa. Por tanto, existe la necesidad de identificar nuevos miembros de la familia de proteínas tirosina quinasa.

Dada la importancia fisiológica de las proteínas quinasas, se están realizando esfuerzos por parte de la industria y los científicos para identificar nuevas proteínas quinasas nativas. Muchos de estos esfuerzos se centran en el cribado de bibliotecas de ADN recombinante de mamífero para identificar las secuencias codificantes para nuevas proteínas quinasas. En la presente invención se describe la identificación y caracterización de polipéptidos nuevos que presentan homología a proteínas tirosina quinasa, denominadas en la presente invención como polipéptidos PRO245.

Descripción resumida de la invención

PRO245

Los solicitantes han identificado un clon de ADNc que codifica un nuevo polipéptido, en el que el polipéptido se denomina en la presente solicitud como "PRO245".

En una realización, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada tal como se define en las reivindicaciones que comprende un ADN que codifica un polipéptido PRO245. En un aspecto, el ácido nucleico aislado comprende el ADN que codifica el polipéptido PRO245 que tiene los residuos de aminoácidos 1 a 312 de la Figura 2 (SEC. ID Nº 64), o es complementario a dicha secuencia de ácido nucleico codificante, y permanece unido de manera estable al mismo bajo condiciones por lo menos de moderada astringencia, y opcionalmente, de alta astringencia.

En otra realización, la presente invención proporciona un polipéptido PRO245 aislado tal como se define en las reivindicaciones. En particular, la presente invención proporciona un polipéptido PRO245 de secuencia nativa aislada, que en una realización, incluye una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos 1 a 312 de la Figura 2 (SEC ID. Nº 64).

Realizaciones adicionales

En otras realizaciones de la presente invención, la invención proporciona vectores tal como se definen en las reivindicaciones. También se proporciona una célula huésped que comprende cualquiera de dichos vectores. A modo de ejemplo, las células huésped puedes ser células CHO, E. coli o levaduras. Se proporciona además un procedimiento para producir cualquiera de los polipéptidos descritos anterior o posteriormente, tal como se define en las reivindicaciones y comprende el cultivo de células huésped en condiciones adecuadas para la expresión del polipéptido deseado y la recuperación del polipéptido deseado a partir del cultivo celular.

En otras realizaciones, la presente invención proporciona moléculas quiméricas tal como se definen en las reivindicaciones. Un ejemplo de dicha molécula quimérica comprende cualquiera de los polipéptidos descritos anterior o posteriormente fusionados a una secuencia de epítopo etiqueta o una región Fc de una inmunoglobulina.

En otra realización, la presente invención proporciona un anticuerpo tal como se define en las reivindicaciones, que se une específicamente a cualquiera de los polipéptidos descritos anterior o posteriormente. Opcionalmente, el anticuerpo en un anticuerpo monoclonal.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra una secuencia de nucleótidos (SEC ID. Nº 63) de un ADNc de PRO245 de secuencia nativa, en la que la SEC ID. Nº 63 es un clon denominado en la presente invención como "UNQ219" y/o "DNA35638-1141".

La Figura 2 muestra la secuencia de aminoácidos (SEC ID. Nº 64) derivada de la secuencia codificante de la SEC ID. Nº 63 mostrada en las Figuras 1.

Descripción detallada de...

1. Ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido PRO245, o el complemento del mismo, en el que el polipéptido:

(i) comprende los aminoácidos 1 a 312 de la figura 2 (SEC ID No. 64) o una forma madura de la misma;

(ii) comprende una forma truncada o secretada de forma natural, una forma de variante natural o una variante alélica natural del polipéptido de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64);

(iii) tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64); o

(iv) tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia.

2. Ácido nucleico según la reivindicación 1, parte (iii), en el que el nivel de identidad es por lo menos del 85%.

3. Ácido nucleico según la reivindicación 1, parte (iii), en el que el nivel de identidad es por lo menos del 90%.

4. Ácido nucleico según la reivindicación 1, en el que dicha secuencia de nucleótidos comprende una secuencia de nucleótidos que consiste en la secuencia codificante de longitud completa de la secuencia mostrada en la figura 1 (SEC ID No. 63), o el complemento de la misma.

5. Ácido nucleico según la reivindicación 1, en el que dicha secuencia de nucleótidos comprende una secuencia de nucleótidos que consiste en la secuencia mostrada en la figura 1 (SEC ID No. 63), o el complemento de la misma.

6. Ácido nucleico según la reivindicación 1, que comprende la secuencia codificante para PRO245 de longitud completa del ADN depositado bajo el número de acceso ATCC 209265.

7. Vector que comprende el ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

8. Vector según la reivindicación 7, unido operativamente a secuencias de control reconocidas por una célula huésped transformada con el vector.

9. Célula huésped que comprende el vector según la reivindicación 7 o la reivindicación 8.

10. Célula huésped según la reivindicación 9, en la que dicha célula es una célula CHO.

11. Célula huésped según la reivindicación 9, en la que dicha célula es E. coli.

12. Célula huésped según la reivindicación 9, en la que dicha célula es una célula de levadura.

13. Proceso para producir un polipéptido PRO245 que comprende el cultivo de la célula huésped según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en condiciones adecuadas para la expresión de dicho polipéptido PRO245 y la recuperación de dicho polipéptido PRO245 a partir del cultivo celular.

14. Polipéptido PRO245 aislado, en el que dicho polipéptido:

(i) comprende los aminoácidos 1 a 312 de la figura 2 (SEC ID No. 64) o una forma madura de la misma;

(ii) comprende una forma truncada o secretada de forma natural, una forma de variante natural o una variante alélica natural del polipéptido de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64);

(iii) tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64);

(iv) tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de PRO245 codificada por el nucléotido depositado bajo el número de acceso ATCC 209265 e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia, con la condición de que el polipéptido no consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64); o

(v) tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos de la figura 2 (SEC ID No. 64) e inhibe la proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF, en el que dicha identidad de secuencia se determina sobre la longitud completa de dicha secuencia.

15. Polipéptido según la reivindicación 14, parte (iii), en el que el nivel de identidad es por lo menos del 85%.

16. Polipéptido según la reivindicación 14, parte (iii), en el que el nivel de identidad es por lo menos del 90%.

17. Molécula quimérica que comprende un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 14-16, fusionado a una secuencia de aminoácidos heteróloga.

18. Molécula quimérica según la reivindicación 17, en la que dicha secuencia de aminoácidos heteróloga es una secuencia de un epítopo etiqueta.

19. Molécula quimérica según la reivindicación 17, en la que dicha secuencia de aminoácidos heteróloga es una región Fc de una inmunoglobulina.

20. Anticuerpo que se une específicamente al polipéptido PRO245 según la reivindicación 14, parte (i) o parte (ii), con la condición de que el anticuerpo no es un anticuerpo que se une a un polipéptido que consista en los aminoácidos 1-288 ó 21-288 de la figura 2 (SEC ID No. 64).

21. Anticuerpo según la reivindicación 20, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

22. Anticuerpo que se une específicamente al polipéptido PRO245 según la reivindicación 14, parte (i) o parte (ii), que es un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, un anticuerpo biespecífico, o un anticuerpo heteroconjugado o tiene especificidad poliepitópica.

23. Anticuerpo anti-PRO245 antagonista, que se une específicamente al polipéptido PRO245 según la reivindicación 14, parte (i) o parte (ii), e inhibe la actividad de dicho polipéptido de inhibir proliferación del crecimiento de células endoteliales estimulada por VEGF.

24. Polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 14-16, para su uso en un método de tratamiento.

25. Polipéptido según la reivindicación 24, para su uso en la terapia contra el cáncer.

26. Polipéptido según la reivindicación 25, para su uso en la inhibición de la angiogénesis tumoral.

27. Uso del polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 14-16 en la fabricación de un medicamento para la terapia contra el cáncer.

28. Uso según la reivindicación 27, en el que el medicamento es para la inhibición de la angiogénesis tumoral.