Polipéptidos y ácidos nucleicos inmunosupresores.

Un polipéptido aislado o recombinante que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SECID Nº:

36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54,55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posicionescorrespondientes en SEC ID Nº: 36, en el que el polipéptido se une a CD80 humano o CD86 humano o un dominioextracelular de cualquiera de ambos y tiene una capacidad para inhibir una respuesta inmunitaria que es mayor quela capacidad de un polipéptido LEA29Y que comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 168para inhibir una respuesta inmunitaria.

Polipéptidos y ácidos nucleicos inmunosupresores Campo de la invención La presente invención se refiere, en general, a polipéptidos novedosos que se unen a CD80 y/o CD86, a ácido nucleico que codifica tales polipéptidos y, a procedimientos de preparación y, a uso de tales polipéptidos y ácidos nucleicos.

Antecedentes de la invención Los linfocitos T desempeñan una función importante en la iniciación y regulación de respuestas inmunitarias. Para que se produzca la activación completa de linfocitos T se requieren al menos dos acontecimientos de señalización distintos. Una primera señal se produce por la interacción de receptores de linfocitos T (TCR) expresados sobre linfocitos T con antígenos específicos (Ag) presentados en el contexto de moléculas del complejo de histocompatibilidad mayor (MHC) expresadas sobre células presentadoras de antígeno (APC) . Una segunda señal (co-estimulación) resulta de la interacción entre ligandos co-estimuladores expresados sobre APC y sus receptores correspondientes expresados sobre linfocitos T. Una ruta de co-estimulación dominante implica la interacción entre los ligandos CD80 (B7-1 o B7.1) y CD86 (B7-2 o B7.2) expresados sobre APC con CD28 y CTLA-4 (también conocidos como CD152) expresados principalmente sobre linfocitos T. CTLA-4 (antígeno 4 del linfocito T citotóxico) y CD28 sirven de receptores para los ligandos CD80 y CD86.

La señalización positiva está mediada por el receptor CD28. La unión del (de los) ligando (s) CD80 y/o CD86 a CD28 reduce el umbral de activación de linfocitos T promoviendo la formación de sinapsis inmunológicas (Viola A. y col., Science 283:680-682 (1999) ) . Adicionalmente, la co-estimulación de CD28 activa o potencia la producción de factores fundamentales para la proliferación y supervivencia de linfocitos T tal como interleucina-2 (IL-2) , NF-κB y Bcl-XL (Norton S. D. y col., J. Immunol. 149:1556-1561 (1992) ; Vella A. T. y col., J. Immunol. 158: 4714-4720 (1997) ) . In vivo, ratones deficientes en CD28 están gravemente inmunodeprimidos y muestran escasas respuestas de linfocitos T específicas para antígeno (Green, J. M. y col., Immunity 1:501-508 (1994) ) . La alergia o tolerancia a linfocitos T puede producirse cuando los linfocitos T se activan en ausencia de la señal co-estimulante.

La señalización negativa está mediada por el receptor de CTLA-4. Cada uno de los ligandos CD80 y CD86 se unen con alta avidez a CTLA-4 y compensan respuestas inmunoproliferativas derivadas de la señalización de CD28. Posibles mecanismos de señalización de CTLA-4 incluyen la unión competitiva de moléculas co-estimuladoras CD80/CD86 (Masteller, E. M. y col., J. Immunol. 164:5319 (2000) ) , inhibición de la señalización de TCR por inducción de fosfatasas para la inmunosinapsis (Lee K. M. y col., Science 282:2263 (1998) ) e interrupción de las sinapsis inmunológicas (Pentcheva-Hoang T. y col., Immunity 21:401 (2004) ; Chikuma S. y col., J. Exp. Med 197:129 (2003) ; Schneider H. y col., Science 313: 1972 (2006) ) . In vivo, ratones deficientes en CTLA-4 muestran fenotipos autoinmunitarios profundos caracterizados por infiltración masiva de tejido y destrucción de órganos (Waterhouse P. y col., Science 270:985 (1995) ) .

Agentes terapéuticos diseñados para antagonizar la ruta de co-estimulación de CD80/CD86, tales como CTLA-4 humano-Ig soluble, son prometedores para el tratamiento de enfermedades y trastornos autoinmunitarios. La presente invención proporciona moléculas ventajosas que tienen capacidades mejoradas para modular o suprimir la señalización por la ruta de co-estimulación de CD80/CD86 y procedimientos de uso de tales moléculas para la manipulación seleccionada y diferencial de respuestas de linfocitos T. Tales moléculas son de uso beneficioso en una variedad de aplicaciones que se tratan en detalle más adelante.

Resumen de la invención La invención proporciona un polipéptido aislado o recombinante que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes en SEC ID Nº: 36, en el que el polipéptido se une a CD80 humano o CD86 humano o un dominio extracelular de cualquiera de ellos y tiene una capacidad para inhibir una respuesta inmunitaria que es mayor que la capacidad de un polipéptido LEA29Y que comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 168 para inhibir una respuesta inmunitaria.

La invención también proporciona un dímero de polipéptidos aislado o recombinante que comprende dos polipéptidos de la invención, en el que el dímero tiene una mayor capacidad para suprimir una respuesta inmunitaria que un dímero que comprende dos polipéptidos LEA29Y, en el que cada polipéptido LEA29Y comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 168.

La invención también proporciona un polipéptido de la invención, que es una proteína de fusión aislada o recombinante que comprende (a) un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes en SEC ID Nº: 36 y (b) un segundo polipéptido, en el que el segundo polipéptido es un polipéptido del Fc de Ig, en el que la proteína de fusión tiene una mayor capacidad para suprimir una respuesta inmunitaria que una proteína de fusión LEA29Y-Ig, en el que la proteína de fusión LEA29Y-Ig comprende la secuencia de polipéptidos de SEC ID Nº: 166.

La invención también proporciona un dímero de polipéptidos de la invención, que es un dímero de proteínas de fusión aisladas o recombinantes que comprende dos proteínas de fusión monoméricas ligadas por al menos un enlace disulfuro formado entre dos residuos de cisteína presentes en cada proteína de fusión mutante monomérica, en el que cada proteína de fusión monomérica comprende (a) un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes en SEC ID Nº: 36 y (b) un polipéptido del Fc de Ig, y en el que el dímero de proteínas de fusión tiene una mayor capacidad para suprimir una respuesta inmunitaria que un dímero de proteínas de fusión LEA29Y-Ig, en el que el dímero de proteínas de fusión LEA29Y-Ig comprende dos proteínas de fusión LEA29Y-Ig monoméricas comprendiendo cada una la secuencia de polipéptidos de SEC ID Nº: 166.

La invención también proporciona un ácido nucleico aislado o recombinante que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de la invención, un dímero de polipéptidos de la invención, una proteína de fusión de la invención, o un dímero de proteínas de fusión de la invención, o una secuencia de polinucleótidos complementaria del mismo.

La invención también proporciona un vector que comprende un ácido nucleico de la invención.

La invención también proporciona una célula huésped aislada o recombinante que comprende:

(a) un polipéptido de la invención;

(b) un dímero de polipéptidos de la invención;

(c) una proteína de fusión de la invención;

(d) un dímero de proteínas de fusión de la invención;

(e) un ácido nucleico de la invención; y/o

(f) un vector de la invención.

La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable o vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más de los siguientes:

(a) un polipéptido de la invención;

(b) un dímero de polipéptidos de la invención;

(c) una proteína de fusión de la invención;

(d) un dímero de proteínas de fusión de la invención;

(e) un ácido nucleico de la invención;

(f) un vector de la invención; y/o

(g) una célula huésped de la invención.

La invención también proporciona un polipéptido de la invención, un dímero de polipéptidos de la invención, una proteína de fusión de la invención, un dímero de proteínas de fusión de la invención, un ácido nucleico de la invención, un vector de la invención o una célula de la invención para su uso en:

(i) un tratamiento profiláctico o terapéutico... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido aislado o recombinante que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes en SEC ID Nº: 36, en el que el polipéptido se une a CD80 humano o CD86 humano o un dominio extracelular de cualquiera de ambos y tiene una capacidad para inhibir una respuesta inmunitaria que es mayor que la capacidad de un polipéptido LEA29Y que comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 168 para inhibir una respuesta inmunitaria.

2. El polipéptido de la reivindicación 1, en el que el polipéptido se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 1, 2, 3, 4 ó 5 residuos de aminoácidos.

3. El polipéptido de la reivindicación 1, en el que el polipéptido comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 36.

4. Un dímero de polipéptidos aislado o recombinante que comprende dos polipéptidos de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el dímero tiene una mayor capacidad para suprimir una respuesta inmunitaria que un dímero que comprende dos polipéptidos LEA29Y, en el que cada polipéptido LEA29Y comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 168.

5. El polipéptido de la reivindicación 1 que es una proteína de fusión aislada o recombinante que comprende (a) un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes en SEC ID Nº: 36 y (b) un segundo polipéptido, en el que el segundo polipéptido es un polipéptido del Fc de Ig, en el que la proteína de fusión tiene una mayor capacidad para suprimir una respuesta inmunitaria que una proteína de fusión LEA29Y-Ig, en el que la proteína de fusión LEA29Y-Ig comprende la secuencia de polipéptidos de SEC ID Nº: 166.

6. La proteína de fusión de la reivindicación 5, en el que la proteína de fusión comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 197 ó 211.

7. El dímero de polipéptidos de la reivindicación 4, que es un dímero de proteínas de fusión aisladas o recombinantes que comprende dos proteínas de fusión monoméricas ligadas por al menos un enlace disulfuro formado entre dos residuos de cisteína presentes en cada proteína de fusión mutante monomérica, en el que cada proteína de fusión monomérica comprende (a) un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptidos que se diferencia de SEC ID Nº: 36 en no más de 6 residuos de aminoácidos y que incluye residuos en las posiciones 24, 30, 32, 41, 50, 54, 55, 56, 64, 65, 70, 85, 104 y 106 que son idénticos a los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes en SEC ID Nº: 36 y (b) un polipéptido del Fc de Ig, y en el que el dímero de proteínas de fusión tiene una mayor capacidad para suprimir una respuesta inmunitaria que un dímero de proteínas de fusión LEA29Y-Ig, en el que el dímero de proteínas de fusión LEA29Y-Ig comprende dos proteínas de fusión LEA29Y-Ig monoméricas comprendiendo cada una la secuencia de polipéptidos de SEC ID Nº: 166.

8. El dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 7, en el que cada proteína de fusión monomérica comprende la secuencia de polipéptidos mostrada en SEC ID Nº: 197 ó 211.

9. Un ácido nucleico aislado o recombinante que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, un dímero de polipéptidos de la reivindicación 4, una proteína de fusión de la reivindicación 5 o la reivindicación 6, o un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 7 o la reivindicación 8, o una secuencia de polinucleótidos complementaria del mismo.

10. Un vector que comprende un ácido nucleico de la reivindicación 9.

11. Una célula huésped aislada o recombinante que comprende:

(a) un polipéptido de cualquier de las reivindicaciones 1-3;

(b) un dímero de polipéptidos de la reivindicación 4;

(c) una proteína de fusión de la reivindicación 5 o la reivindicación 6;

(d) un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 7 o la reivindicación 8;

(e) un ácido nucleico de la reivindicación 9; y/o

(f) un vector de la reivindicación 10.

12. Una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable o vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más de los siguientes:

(a) un polipéptido de cualquier de las reivindicaciones 1-3;

(b) un dímero de polipéptidos de la reivindicación 4;

(c) una proteína de fusión de la reivindicación 5 o la reivindicación 6;

(d) un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 7 o la reivindicación 8;

(e) un ácido nucleico de la reivindicación 9;

(f) un vector de la reivindicación 10; y/o

(g) una célula huésped de la reivindicación 11.

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 12 que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable

o vehículo farmacéuticamente aceptable y un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 8.

14. Un polipéptido de cualquier de las reivindicaciones 1-3, un dímero de polipéptidos de la reivindicación 4, una proteína de fusión de la reivindicación 5 o la reivindicación 6, un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 7

o la reivindicación 8, un ácido nucleico de la reivindicación 9, un vector de la reivindicación 10 o una célula de la reivindicación 11 para su uso en:

(i) un tratamiento profiláctico o terapéutico para inhibir o suprimir una respuesta inmunitaria en un mamífero;

(ii) el tratamiento de una enfermedad o trastorno del sistema inmunitario; o

(iii) el tratamiento de rechazo de trasplante de tejido u órgano en un mamífero.

15. El dímero de proteínas de fusión para su uso de la reivindicación 14, en el que el dímero de proteínas de fusión es un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 8.

16. Uso de un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, un dímero de polipéptidos de la reivindicación 4, una proteína de fusión de la reivindicación 5 o la reivindicación 6, un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 7 o la reivindicación 8, un ácido nucleico de la reivindicación 9, un vector de la reivindicación 10

o una célula de la reivindicación 11 para la fabricación de un medicamento para:

(i) un tratamiento profiláctico o terapéutico para inhibir o suprimir una respuesta inmunitaria en un mamífero;

(ii) el tratamiento de una enfermedad o trastorno del sistema inmunitario; o

(iii) el tratamiento de rechazo de trasplante de tejido u órgano en un mamífero.

17. El uso de un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 16, en el que el dímero de proteínas de fusión es un dímero de proteínas de fusión de la reivindicación 8.

18. Un procedimiento de producir un polipéptido que comprende cultivar una célula huésped de la reivindicación 11 en un medio de cultivo y recuperar el polipéptido expresado por la célula.