Un polipéptido aislado para usar en un procedimiento de tratamiento médico,

teniendo el polipéptido: la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 (SEC ID Nº: 4), con o sin el péptido señal; o que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 80% respecto a la secuencia de los restos de aminoácidos 1 ó 20 a 105 mostrada en la figura 2 (SEC ID Nº: 4), en el que la identidad de secuencia se determina usando el programa informático ALIGN-2, y en el que el polipéptido tiene la capacidad de estimular el crecimiento de células endoteliales corticosuprarrenales; o la secuencia de aminoácidos codificada por la molécula de ácido nucleico depositada con el número de acceso en ATCC 203091, con o sin el péptido señal

CAMPO DE LA INVENCIÓN [0001] La presente invención se refiere en general a la identificación y aislamiento de ADN nuevo y a la producción recombinante de nuevos polipéptidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN [0002] Las proteínas extracelulares tienen funciones importantes, entre otras cosas, en la formación, diferenciación y mantenimiento de organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, p. ej., la proliferación, migración, diferenciación o interacción con otras células, normalmente está dirigido por información recibida de otras células y/o el entorno cercano. Esta información, a menudo es transmitida por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitógenos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que son, a su vez, recibidos e interpretados por diferentes receptores celulares o proteínas unidas a membrana. Estos polipéptidos o moléculas de señalización secretados normalmente pasan por la ruta secretora celular para alcanzar su sitio de acción en el entorno extracelular. [0003] Las proteínas secretadas tienen diferentes aplicaciones industriales, incluyendo productos farmacéuticos, de diagnóstico, biosensores y biorreactores. La mayoría de los fármacos proteínicos disponibles actualmente, tales como los agentes trombolíticos, interferones, interleucinas, eritropoyetinas, factores estimulantes de colonias y otras citocinas diferentes son proteínas secretoras. Sus receptores, que son proteínas de membrana, también tienen potencial como agentes terapéuticos o de diagnóstico. Tanto la industria como el mundo académico han hecho esfuerzos para identificar proteínas secretadas nativas nuevas. Muchos esfuerzos se centran en el cribado de bibliotecas de ADN recombinante de mamífero para identificar las secuencias codificantes de nuevas proteínas secretadas. Se describen en la bibliografía ejemplos de procedimientos y técnicas de cribado [véase, por ejemplo, Klein y col., Proc. Natl. Acad. Sci. 93:7108-7113 (1996); patente de EE.UU. nº 5.536.637)]. [0004] Las proteínas unidas a membrana y los receptores pueden tener funciones importantes, entre otras cosas, en la formación, diferenciación y mantenimiento de organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, p. ej., la proliferación, migración, diferenciación o interacción con otras células, normalmente está dirigido por información recibida de otras células y/o el entorno cercano. Esta información, a menudo es transmitida por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitógenos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que son, a su vez, recibidas e interpretadas por diferentes receptores celulares o proteínas unidas a membrana. Dichas proteínas unidas a membrana y receptores celulares incluyen, pero sin limitar, receptores de citocinas, quinasas receptoras, fosfatasas receptoras, receptores implicados en interacciones célula-célula y moléculas de adhesina celular como selectinas e integrinas. Por ejemplo, la transducción de señales que regula el crecimiento y la diferenciación celulares, es regulada en parte por la fosforilación de diferentes proteínas celulares. Las proteína tirosina quinasas, enzimas que catalizan este proceso, también pueden actuar como receptores de factores de crecimiento. Los ejemplos incluyen el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos y receptor del factor de crecimiento nervioso. [0005] Las proteínas unidas a membrana y las moléculas receptoras tienen diferentes aplicaciones industriales, incluyendo como agentes farmacéuticos y de diagnóstico. Las inmunoadhesinas receptoras, por ejemplo, se pueden usar como agentes terapéuticos para bloquear interacciones receptor-ligando. Las proteínas unidas a membrana también se pueden usar para cribar potenciales inhibidores moléculas pequeñas o péptidos de la interacción receptor/ligando relevante. [0006] Tanto en la industria como en el mundo académico se están haciendo esfuerzos por identificar nuevos receptores nativos o proteínas unidas a membrana. Muchos esfuerzos se centran en el cribado de bibliotecas de ADN recombinante de mamífero para identificar las secuencias codificantes de nuevos receptores o proteínas unidas a membrana.

PRO1186 [0007] La proteína A del veneno de Dendroaspis polylepis polylepis (mamba negra) comprende 81 aminoácidos, que incluyen 10 restos semi-cisteína. Los venenos tienen interés, por una parte como armas en la guerra, y por otra parte, para usar en ensayos para determinar agentes que invierten o inhiben los efectos del veneno u otro tóxico similar. El veneno de la mamba negra se describe además en Int. J. Biochem., 17(6):695-699 (1985) y Joubert y Strydom. Hoppe Seylers Z Physiol. Chem., 361(12):1787-1794 (1980). [0008] Los autores de la invención describen en el presente documento la identificación y caracterización de nuevos polipéptidos que tienen homología con la proteína A del veneno de serpiente, denominados en el presente documento polipéptidos PRO1186.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

PRO1186 [0009] Se ha identificado un clon de ADNc (ADN60621-1516) que codifica un nuevo polipéptido que tiene identidad de secuencia con la proteína A del veneno y denominado en la presente solicitud “PRO1186”. [0010] La invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada como se define en las reivindicaciones que codifican un polipéptido PRO1186, para usar en un procedimiento de tratamiento, y el uso de dicho ácido nucleico como se define en las reivindicaciones. [0011] La invención también proporciona el polipéptido PRO1186 aislado como se define en las reivindicaciones, para usar en un procedimiento de tratamiento, y el uso de dicho polipéptido como se define en las reivindicaciones. [0012] En otra realización más, la invención se refiere a antagonistas de un polipéptido PRO1186 nativo como se define en las reivindicaciones, para usar en un procedimiento de tratamiento, y al uso de dichos antagonistas como se define en las reivindicaciones. En una realización particular, el antagonista es un anticuerpo antiPRO1186. [0013] En una realización adicional como se define en las reivindicaciones, la invención se refiere a un procedimiento para identificar antagonistas de un polipéptido PRO1186 nativo, poniendo en contacto el polipéptido PRO1186 nativo con una molécula candidata y seguir una actividad biológica mediada por dicho polipéptido. [0014] En una realización adicional más como se define en las reivindicaciones, la invención se refiere a una composición que comprende un polipéptido PRO1186, o un antagonista como se define en lo que antecede, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Realizaciones adicionales [0015] En otras realizaciones de la presente invención como se define en las reivindicaciones, la invención proporciona vectores que comprenden ADN que codifica cualquiera de los polipéptidos descritos en el presente documento para usar en un procedimiento de tratamiento, y el uso de dichos vectores como se define en las reivindicaciones. [0016] En otras realizaciones como se define en las reivindicaciones, la invención proporciona moléculas quiméricas que comprenden cualquiera de los polipéptidos descritos en el presente documento fusionados con un polipéptido heterólogo o secuencia de aminoácidos para usar en un procedimiento de tratamiento, y el uso de dichas moléculas quiméricas como se define en las reivindicaciones. Los ejemplos de dichas moléculas quiméricas comprenden cualquiera de los polipéptidos descritos en el presente documento fusionados con una secuencia de epítopo etiqueta o una región Fc de una inmunoglobulina. [0017] En otra realización, la invención proporciona un anticuerpo antagonista que se une específicamente a PRO1186. Opcionalmente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, anticuerpo humanizado, fragmento de anticuerpo o anticuerpo monocatenario. [0018] En realizaciones, como se definen en las reivindicaciones, la molécula de ácido nucleico aislada comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido PRO1186. [0019] En otros aspectos como se definen en las reivindicaciones, la molécula de ácido nucleico aislada comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencia de al menos aproximadamente 80%, preferiblemente una identidad de secuencia de al menos aproximadamente 81%, más preferiblemente una identidad de secuencia de al menos 82%, todavía más preferiblemente una identidad de secuencia de al menos 83%, todavía más preferiblemente una identidad de secuencia de al menos 84%, todavía más preferiblemente una identidad de secuencia de al menos 85%, todavía...

1. Un polipéptido aislado para usar en un procedimiento de tratamiento médico, teniendo el polipéptido:

la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2 (SEC ID Nº: 4), con o sin el péptido señal; o que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 80% respecto a la secuencia de los restos de aminoácidos 1 ó 20 a 105 mostrada en la figura 2 (SEC ID Nº: 4), en el que la identidad de secuencia se determina usando el programa informático ALIGN-2, y en el que el polipéptido tiene la capacidad de estimular el crecimiento de células endoteliales corticosuprarrenales; o

la secuencia de aminoácidos codificada por la molécula de ácido nucleico depositada con el número de acceso en ATCC 203091, con o sin el péptido señal.

2. Un polipéptido aislado para usar en un procedimiento de tratamiento médico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el nivel de identidad es al menos 85%.

3. Un polipéptido aislado para usar en un procedimiento de tratamiento médico de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el nivel de identidad es al menos 90%.

4. Un polipéptido aislado para usar en un procedimiento de tratamiento médico de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el nivel de identidad es al menos 95%.

5. Una molécula quimérica para usar en un procedimiento de tratamiento médico, comprendiendo la molécula un polipéptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones precedentes fusionado con una secuencia de aminoácidos heteróloga.

6. La molécula quimérica de la reivindicación 6, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que dicha secuencia de aminoácido heteróloga es una región Fc de inmunoglobulina.

7. Un ácido nucleico aislado para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el ácido nucleico:

codifica un polipéptido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o es el complemento de dicho ácido nucleico; o tiene una identidad de secuencia de al menos 80% con respecto a los restos 91 ó 148 a 405, inclusive, de la figura 1 (SEC ID Nº: 3), en el que la identidad de secuencia se determina usando el programa de ordenador ALIGN-2 y en el que el ácido nucleico codifica un polipéptido que tiene la capacidad de estimular el crecimiento de células endoteliales corticosuprarrenales, o el complemento de dicho ácido nucleico; o

comprende la secuencia codificante de longitud completa del inserto de ADN (DNA60621-1516) contenido en el número de acceso en ATCC 203091.

8. El ácido nucleico de la reivindicación 7, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el nivel de identidad es al menos 85%.

9. El ácido nucleico de la reivindicación 8, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el nivel de identidad es al menos 90%.

10. El ácido nucleico de la reivindicación 9, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el nivel de identidad es al menos 95%.

11. El ácido nucleico de la reivindicación 10, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el ácido nucleico comprende la secuencia codificante de longitud completa de la secuencia mostrada en la figura 1 (SEC ID Nº: 3).

12. El ácido nucleico de la reivindicación 11, para usar en un procedimiento de

tratamiento médico, en el que el ácido nucleico comprende la secuencia de nucleótidos mostrada en la figura 1 (SEC ID Nº: 3).

13. Un vector que comprende el ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, para usar en un procedimiento de tratamiento médico.

14. El vector de la reivindicación 13, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el vector es un vector vírico.

15. El polipéptido, molécula quimérica, ácido nucleico o vector de cualquier

reivindicación precedente, para usar en la promoción de la angiogénesis.

16. El uso de un polipéptido o molécula quimérica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la preparación de un medicamento para promover la angiogénesis.

17. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido como se define en la reivindicación 1, primera o tercera parte, e inhibe su capacidad para estimular el crecimiento de células endoteliales de capilares corticosuprarrenales.

18. El anticuerpo de la reivindicación 17, para usar en un procedimiento de tratamiento médico.

19. Un anticuerpo monoclonal o fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 17 o reivindicación 18.

20. Un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19.

21. Un antagonista del polipéptido de la reivindicación 1, primera o tercera parte, para usar en un procedimiento de tratamiento médico, en el que el antagonista es un oligonucleótido de sentido contrario, ribozima o molécula de triple hélice, que se dirige contra un ácido nucleico como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7, tercera parte, 11 y 12.

22. El anticuerpo, fragmento de anticuerpo o antagonista de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21, para usar en la inhibición de la angiogénesis.

23. El anticuerpo, fragmento de anticuerpo o antagonista de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21, para usar en el tratamiento de tumores cancerosos.

24. El uso de un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o antagonista de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21, en la preparación de un medicamento para inhibir la angiogénesis.

25. El uso de un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o antagonista de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores cancerosos.

5 26. Un procedimiento para identificar un antagonista de un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, comprendiendo el procedimiento:

poner en contacto un compuesto de ensayo con dicho polipéptido en condiciones y durante un tiempo suficiente para permitir que el compuesto de ensayo y 10 el polipéptido interaccionen; y determinar si está modulada la capacidad de dicho polipéptido para estimular el crecimiento de células endoteliales de capilares corticosuprarrenales.