POLIPÉPTIDOS CON ACTIVIDAD DE BETA-GLUCOSIDASA Y POLINUCLEÓTIDOS QUE CODIFICAN LOS MISMOS.

Un polipéptido aislado con actividad de beta-glucosidasa y con una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad con el polipéptido maduro mostrado como aminoácidos 37 a 878 de SEC ID n.º: 2

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2006/030719.

Solicitante: NOVOZYMES, INC.
KROGH, KRISTIAN
HARRIS, PAUL
.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1445 DREW AVENUE DAVIS, CA 95618 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: HARRIS, PAUL, KROGH,Kristian.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 4 de Agosto de 2006.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N9/24 QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › actúan sobre compuestos glicosílicos (3.2).

Clasificación PCT:

  • C07K14/385 C […] › C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Penicillium.
  • C12N15/56 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › que actúan sobre compuestos glicosílicos (3.2), p. ej. amilasa, galactosidasa, lisozima.
  • C12N9/42 C12N 9/00 […] › actúan sobre los enlaces beta-glucosídicos-1,4, p. ej. celulasa.
  • C12P19/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Monosacáridos.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia.

PDF original: ES-2368165_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Polipéptidos con actividad de beta-glucosidasa y polinucleótidos que codifican los mismos Antecedentes de la invención Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a polipéptidos aislados que tienen actividad de beta-glucosidasa y a polinucleótidos aislados que codifican los polipéptidos. La invención también se refiere a constructos de ácido nucleico, vectores y células huéspedes que comprenden los polinucleótidos así como métodos para producir y usar los polipéptidos. Descripción de las técnicas relacionadas [0002] La celulosa es un polímero de la glucosa de azúcar simple unido covalentemente por enlaces beta-1,4. Muchos microorganismos producen enzimas que hidrolizan los betaglucanos. Estas enzimas incluyen endoglucanasas, celobiohidrolasas y beta-glucosidasas. Las endoglucanasas digieren el polímero de celulosa en lugares aleatorios, abriéndolo al ataque por parte de celobiohidrolasas. Las celobiohidrolasas liberan secuencialmente moléculas de celobiosa de los extremos del polímero de celulosa. La celobiosa es un dímero de glucosa de enlace beta 1,4 hidrosoluble. Las beta-glucosidasas hidrolizan celobiosa a glucosa. [0003] La conversión de materias primas celulósicas en etanol tiene las ventajas de la disponibilidad de grandes cantidades de materia prima, la conveniencia de evitar la quema o el vertido de los materiales y la limpieza del combustible de etanol. La madera, los residuos agrícolas, los brotes herbáceos y los residuos sólidos municipales han sido considerados materias primas para la producción de etanol. Estos materiales consisten principalmente en celulosa, hemicelulosa y lignina. Una vez que la celulosa se convierte en glucosa, la glucosa es fácilmente fermentada por levadura en etanol. Ya que la glucosa es fácilmente fermentada a etanol por una variedad de levaduras mientras que la celobiosa no lo es, cualquier celobiosa restante al final de la hidrólisis representa una pérdida de rendimiento de etanol. De manera más importante, la celobiosa es un inhibidor potente de endoglucanasas y celobiohidrolasas. La acumulación de celobiosa durante la hidrólisis es extremadamente indeseable para la producción de etanol. [0004] La acumulación de celobiosa ha sido un problema importante en la hidrólisis enzimática porque los microorganismos productores de celulasa puede producir poca beta-glucosidasa. La baja cantidad de beta-glucosidasa produce un déficit de capacidad para hidrolizar la celobiosa a glucosa. Se han utilizado diferentes métodos para aumentar la cantidad de beta-glucosidasa en la conversión de celulosa a glucosa. [0005] Un método es producir beta-glucosidasa usando microorganismos que producen poca celulasa y añadir la betaglucosidasa exógenamente a endoglucanasa y celobiohidrolasa para mejorar la hidrólisis. No obstante, las cantidades requeridas son demasiado costosas para una biomasa comercial a operación de etanol. [0006] Un segundo método es llevar a cabo hidrólisis de celulosa simultáneamente con fermentación de la glucosa por levadura. Este proceso es conocido como sacarificación y fermentación simultáneas (SSF). En un sistema SSF, la fermentación de la glucosa la extrae de la solución. No obstante, los sistemas SSF aún no están comercialmente disponibles debido a que la temperatura operativa para la levadura de 28 °C es demasiado baja para las condiciones de 50°C requeridas. [0007] Un tercer método para superar la escasez de beta-glucosidasa es sobreexpresar la beta-glucosidasa en un huésped, aumentando así el rendimiento de la beta-glucosidasa. [0008] WO 2005/047499 describe polipéptidos de Aspergillus fumigatus que tienen actividad de beta-glucosidasa y polinucleótidos que codifican la misma. [0009] Sería una ventaja en la técnica identificar beta-glucosidasas nuevas que tengan propiedades mejoradas para convertir materiales celulósicos en monosacáridos, disacáridos y polisacáridos. [0010] Es un objeto de la presente invención proporcionar nuevos polipéptido que tengan actividad de beta-glucosidasa y polinucleótidos que codifiquen los polipéptidos. Resumen de la invención [0011] La presente invención se refiere a polipéptidos aislados con actividad de beta-glucosidasa y con una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95 % de identidad con el polipéptido maduro mostrado como aminoácidos 37 a 878 de SEC ID n.º: 2; [0012] La presente invención también se refiere a polinucleótidos aislados que codifican los polipéptidos anteriores con actividad de beta-glucosidasa. [0013] En otro aspecto preferido, la secuencia codificante de polipéptido maduro son los nucleótidos 171 a 2753 de SEC ID n.º: 1. [0014] La presente invención también se refiere a constructos de ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinantes, células huéspedes recombinantes que comprenden los polinucleótidos, y los métodos de producir los polipéptidos con actividad de beta-glucosidasa. 2   [0015] La presente invención también se refiere a unas planta que comprende los polinucleótidos aislados que codifican los polipéptidos con actividad de beta-glucosidasa. [0016] La descripción también se refiere a métodos para usar los polipéptidos con actividad de beta-glucosidasa en la conversión de material celulósico a glucosa u otras sustancias. [0017] La descripción también se refiere a composiciones detergentes que comprenden polipéptidos con actividad de beta-glucosidasa. Breve descripción de las figuras Las Figuras 1A y 1B muestran la secuencia de ADN genómico y la secuencia de aminoácidos deducida de una betaglucosidasa cepa Penicillium brasilianum IBT 20888 (SEC ID NOs: 1 y 2, respectivamente). La Figura 2 muestra un mapa de restricción de pCR2.1GH3A. La Figura 3 muestra un mapa de restricción de pKKAB. La Figura 4 muestra un mapa de restricción de pKBK01. La Figura 5 muestra la actividad relativa del beta-glucosidasa cepa Penicillium brasilianum IBT 20888 a valores de pH diferentes como una función de la temperatura. La Figura 6 muestra la actividad relativa de la beta-glucosidasa cepa Penicillium brasilianum IBT 20888 a temperaturas diferentes como una función del pH. La Figura 7 muestra la actividad residual de Novozym 188 después de 24 horas de incubación a temperaturas y pHs diferentes. La Figura 8 muestra la actividad residual de la beta-glucosidasa Penicillium brasilianum cepa IBT 20888 después de 24 horas de incubación a temperaturas y pHs diferentes. La Figura 9 muestra la velocidad de reacción inicial a diferentes concentraciones de 4-nitrofenil-beta-D-glucopiranosa para la beta-glucosidasa cepa Penicillium brasilianum IBT 20888. La Figura 10 muestra la velocidad de reacción inicial a diferentes concentraciones de celobiosa para la beta-glucosidasa cepa Penicillium brasilianum IBT 20888. Definiciones [0019] Actividad de beta-glucosidasa: El término "beta-glucosidasa" es definido en la presente como una glucohidrolasa de beta-D-glucósido (E.C. 3.2.1.21) que cataliza la hidrólisis de residuos de beta-D-glucosa no reductores terminales con la liberación de beta-D-glucosa. La celobiasa es sinónimo de beta-glucosidasa. Para objetivos de la presente invención, la actividad de beta-glucosidasase determina a 25°C usando 1 mM de 4-nitrofenil-beta-D-glucopiranósido como sustrato en 50 mM citrato sódico pH 4,8. Una unidad de actividad de beta-glucosidasa es definida como 1.0 µmole de 4-nitrofenol producido por minuto a 25°C, pH 4.8. [0020] Los polipéptidos de la presente invención tienen al menos 20%, preferiblemente al menos 40%, más preferiblemente al menos 50%, más preferiblemente al menos 60%, más preferiblemente al menos 70%, más preferiblemente al menos 80%, incluso más preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95%, e incluso más preferiblemente al menos 100% de la actividad de beta-glucosidasa del polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada como aminoácidos 37 a 878 de SEC ID n.º: 2. [0021] Hidrolasa de glucósido de familia 3 o familia GH3: El término "Familia GH3" o "Familia 3 glicosida hidrolasa" o Cel3" es definida en la presente como un polipéptido que cae dentro de la familia 3 de glucósido hidrolasa según Henrissat B., 1991, A classification of glycosyl hydrolases based on amino-acid sequence similarities, Biochem. J. 280: 309-316, y Henrissat y Bairoch, 1996, Updating the sequence-based classification of glycosyl hydrolases, Biochem. J. 316: 695- 696. [0022] Polipéptido aislado: El término polipéptido aislado según se utiliza en este caso se refiere a un polipéptido que es al menos un 20% puro, preferiblemente al menos un 40% puro, más preferiblemente al menos un 60% puro, incluso más preferiblemente al menos un 80% puro, más preferiblemente al menos un 90% puro, e incluso más preferiblemente al menos un 95% puro, según lo determina la SDS-PAGE. [0023] Polipéptido substancialmente puro: El término... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un polipéptido aislado con actividad de beta-glucosidasa y con una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad con el polipéptido maduro mostrado como aminoácidos 37 a 878 de SEC ID n.º: 2. 2. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID n.º: 2 o un fragmento de la misma con actividad de beta-glucosidasa. 3. Polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizada por el hecho de que la secuencia codificante del polipéptido maduro son los nucleótidos 171 a 2753 de SEC ID n.º: 1. 4. Polipéptido según la reivindicación 1, que es codificado por el polinucleótido contenido en el plásmido pKKAB que está contenido en E. coli NRRL B-30860. 5. Polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-4. 6. Constructo de ácidos nucléicos que comprende el polinucleótido según la reivindicación 5 operativamente enlazado a una o más secuencias de control que dirigen la producción del polipéptido en un huésped de expresión. 7. Vector de expresión recombinante que comprende el constructo de ácidos nucléicos según la reivindicación 6. 8. Una célula huésped recombinante transformada con y que comprende el constructo de ácidos nucléicos según la reivindicación 6. 9. Un método para la producción del polipéptido con actividad de beta-glucosidasa según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende: (a) cultivo de una planta transgénica o una célula vegetal que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene actividad de beta-glucosidasa según cualquiera de las reivindicaciones 1-4 bajo condiciones propicias para la producción del polipéptido; y (b) recuperación del polipéptido. 10. Una planta transgénica, parte de planta o célula vegetal, que ha sido transformada con y que comprende un polinucleótido que codifica el polipéptido con actividad de beta-glucosidasa según cualquiera de las reivindicaciones 1-4. 43   44     46   47   48   49     51   52   53   54

 

Patentes similares o relacionadas:

Xilanasa mutante, método de fabricación y uso de la misma, y método para fabricar lignocelulosa sacarificada, del 29 de Julio de 2020, de MITSUI CHEMICALS, INC.: Una xilanasa mutante que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 con una sustitución del resto de aminoácido en la posición 154 en la cual el resto de lisina […]

Métodos para controlar la producción de proteasas, del 1 de Julio de 2020, de ROAL OY: Una célula hospedadora que comprende al menos un gen cromosómico inactivado en donde el gen cromosómico inactivado comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un […]

POLIPÉPTIDO CON ACTIVIDAD XILANASA, SECUENCIA NUCLEOTÍDICA QUE LO CODIFICA, INGREDIENTE Y PROCESO QUE COMPRENDE DICHO INGREDIENTE PARA LA PREPARACIÓN DE UN PRODUCTO ALIMENTICIO, del 18 de Junio de 2020, de UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE: La presente invención se relaciona con un nuevo polipéptido con actividad xilanasa, la secuencia nucleotídica que lo codifica, un ingrediente que contiene dicho polipéptido, […]

Composiciones de galactosa alfa (1-3) galactosa, del 10 de Junio de 2020, de Janssen Biotech, Inc: Un método para producir una preparación de anticuerpos homogéneamente alfa-galactosilados produciendo una estructura de oligosacáridos alfa-galactosilados […]

Proteína, del 20 de Mayo de 2020, de Dupont Nutrition Biosciences ApS: Una enzima, en donde dicha enzima es una xilanasa GH10 o un fragmento de la misma, que tiene actividad xilanasa, comprendiendo dicha enzima los siguientes aminoácido en dos […]

Polipéptido degradador de carbohidratos y sus usos, del 13 de Mayo de 2020, de DSM IP ASSETS B.V.: Un polipéptido que tiene actividad como hemicelulasa que comprende la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 32 o una secuencia de aminoácidos […]

Procedimiento para la hidrólisis de material lignocelulósico, en el que el hidrolizado se usa para la producción de hidrolasa microbiana, del 6 de Mayo de 2020, de CLARIANT INTERNATIONAL LTD.: Un procedimiento para la hidrólisis enzimática autosuficiente de material que contiene lignocelulosa, que comprende las etapas de: (a) someter un material que contiene lignocelulosa […]

Reticuladores químicos, del 22 de Abril de 2020, de AMICUS THERAPEUTICS, INC: Un método de realización de un péptido de direccionamiento lisosomal modificado que comprende: a. poner en contacto el factor de crecimiento similar […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .