POLÍMEROS IMPRESOS MOLECULARMENTE Y USO DE LOS MISMOS EN DISPOSITIVOS DE DIAGNÓSTICO.

Polímero impreso molecularmente y uso de los mismos en dispositivos de diagnóstico ANTECEDENTES DE LA PRESENTE INVENCIÓN La presente invención está dirigida a polímeros impresos molecularmente, y al uso de los mismos en dispositivos de diagnóstico para el análisis de moléculas diana. El reconocimiento molecular es crítico para el funcionamiento de los sistemas biológicos. Los sistemas biológicos dependen del reconocimiento molecular para realizar funciones específicas. Sistemas de reconocimiento molecular tales como interacciones enzima-sustrato, interacciones anticuerpo-antígeno, replicación del ADN y replicación celular son ejemplos de sistemas biológicos dependientes de interacciones moleculares específicas. Se usan biomoléculas tales como enzimas y anticuerpos en dispositivos de diagnóstico in vitro para detectar y cuantificar una 10 molécula diana específica que es indicativa de una enfermedad o función biológica específica. Por ejemplo, la enzima glucosa oxidasa se usa en tiras diagnósticas de ensayo para cuantificar la concentración de glucosa en fluidos biológicos tales como sangre, suero y fluido intersticial. La glucosa oxidasa reacciona específicamente con la   glucosa. Los diabéticos usan de manera rutinaria tiras de ensayo de glucosa para controlar el nivel de glucosa en su sangre. Los polímeros impresos molecularmente (MIPs, por sus siglas en inglés) son compuestos sintéticos creados con sitios receptores que se exhiben selectivamente a un compuesto diana. La síntesis de un polímero con la funcionalidad para reconocer una molécula diana específica permite al polímero capturar y concentrar la molécula diana. Alternativamente, se puede preparar un polímero impreso molecularmente que contiene moléculas diana para liberar de manera controlable estas moléculas desde la red del polímero. Las aplicaciones para los polímeros impresos molecularmente incluyen: adsorbentes cromatográficos, membranas, sensores y sistemas de administración de fármacos. (Referencias: Molecular Imprinting at the edge of the Third Millenium, Sergey A. Piletsky et al., Trends in Biotechnology, vol 19(1), páginas 9-12, enero de 2001, y Polymers and Gels as Molecular Recognition Agents, Nicholas A. Peppas y Yanbin Huang, Pharmaceutical Research, vol. 19(5), páginas 578-587, mayo de 2002; Molecular Imprinting Science and Technology: A Survey of the Literature for the Years up to and including 2003, Alexander et al., Journal of Molecular Recognition, 2006, Vol. 19, págs. 106- 180. La síntesis de polímeros impresos molecularmente implica la polimerización y reticulación de monómeros funcionales en presencia de una molécula plantilla para capturar la impresión de la plantilla. Las moléculas plantilla pueden ser extraídas del polímero para crear sitios tridimensionales dentro de la matriz del polímero con grupos funcionales que son complementarios a los de la molécula plantilla. (Referencia, Molecular Imprinting: State of the Art and Perspectives, Jean Daniel Marty y Monique Mauzac, Advances in Polymer Science, vol. 172, páginas 1-35, 2005). Las redes de polímeros altamente reticulados son estructuras rígidas que pueden exhibir una alta especificidad a la molécula diana. Esta alta especificidad hace a estos polímeros rígidos ideales para métodos analíticos y técnicas de separación que requieran un emparejamiento complementario exacto de grupos funcionales moleculares y la posición y orientación de los grupos en una molécula diana. Por consiguiente, los polímeros impresos molecularmente se pueden usar como relleno de columnas cromatográficas usadas para separar enantiómeros de mezclas racémicas. Los MIPs rígidos tienen la ventaja de ser altamente específicos a una única molécula diana. Tienen la desventaja de que es difícil extraer la molécula plantilla de la red del polímero altamente reticulado, debido a fuertes interacciones complementarias entre el polímero y las moléculas diana. Además, la funcionalidad complementaria y los requerimientos de orientación reducen la velocidad de reacción o el tiempo para que la molécula plantilla sea adsorbida en el sitio impreso. Reducir la densidad de reticulación de un MIP reduce la especificidad de los sitios de captura. Sin embargo, la velocidad de captura de la plantilla es aumentada. Muchas patentes y artículos describen el uso de interacciones moleculares polímero-biomolécula específicas en biosensores. Per Bjork et al., en Biosensors & Bioelectronics 20 (2005), páginas 1764-1771, describe un biosensor basado en la interacción electrostática y de enlace de hidrógeno entre politiofeno y oligonucleótidos. La publicación de patente de EE.UU. Nº 2004/0053425 describe un ensayo en chip basado en el reconocimiento molecular entre un péptido o proteína y un anticuerpo monoclonal. Estas aplicaciones se basan en el reconocimiento molecular, en lugar de en un polímero impreso molecularmente. La patente de EE.UU. Nº 6.638.498, de Green et al, describe MIPs para unirse a y retirar toxinas del tracto gastrointestinal. Chin-Shiou Huang, en la patente de EE.UU. Nº 6.680.210, muestra técnicas para preparar polímeros en los que se imprimen macromoléculas. Los MIPs se pueden usar para detectar y cuantificar la cantidad de cada macromolécula en una fuente biológica compleja. 2 E06773730 07-11-2011 La patente de EE.UU. Nº 6.762.025, cedida a Molecular Machines, Inc., muestra el uso de oligonucleótidos para el reconocimiento molecular. La patente de EE.UU. Nº 6.807.842 describe un sensor de reconocimiento molecular para detectar un analito usando una película de un polímero semiconductor. La película de polímero está impresa con el analito y la resistencia de la película cambia cuando es expuesta al analito e interferentes. La patente de EE.UU. Nº 6.582.971, de Singh et al., describe un método para imprimir molecularmente polímeros con biomoléculas grandes tales como proteínas. Usando polimerización bifásica, una biomolécula diana es impresa molecularmente en el polímero en la interfaz entre una fase acuosa y una orgánica. La patente de EE.UU. Nº 6.461.873, de Catonia et al., describe un detector de cafeína que usa al menos dos polímeros impresos molecularmente en una primera y segunda zonas en una tira de papel. El MIP en la primera zona retira sustancias que puedan interferir con el análisis de la cafeína. La segunda zona está revestida con un MIP que adsorbe selectivamente cafeína y reactivos cromogénicos que proporcionan una cuantificación colorimétrica de la cafeína. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN 15 Un polímero con sitios impresos molecularmente puede ser formulado en un adhesivo. El adhesivo impreso molecularmente se puede usar en dispositivos de diagnóstico in vitro para concentrar un analito diana en un área de detección. Además, se puede usar un adhesivo impreso molecularmente para extraer o unirse a compuestos interferentes de fluidos donde contactan con el adhesivo, y retirar estos compuestos en un biosensor. Concentrando un analito en el área de detección o retirando compuestos interferentes, la precisión, sensibilidad y nivel de detección del dispositivo pueden ser mejorados.   Alternativamente, un adhesivo que se prepara usando un polímero que ha sido sintetizado para ser impreso con una molécula específica puede liberar de manera controlable la molécula diana según se requiera. Por ejemplo, un adhesivo impreso con un tensioactivo puede retener el tensioactivo en la red del adhesivo y liberar después el tensioactivo en un dispositivo de diagnóstico para reducir la tensión superficial de fluidos. Se pueden usar adhesivos impresos con tensioactivo en dispositivos de flujo lateral para reducir la tensión superficial de fluidos biológicos tales como sangre y esputo, para aumentar las velocidades de flujo y reducir el tiempo de respuesta del sensor. Además, la presente invención comprende un método para realizar un análisis de una muestra líquida que contiene un componente a ser analizado en cuanto a identidad y/o cantidad, que comprende poner en contacto dicha muestra líquida con un adhesivo comprendido de un polímero reticulado que ha sido impreso con dicho componente, y realizar dicho análisis en base a la cantidad de dicho componente absorbida por dicho polímero que ha sido previamente impreso con dicho componente. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1a es una vista cenital de un dispositivo de diagnóstico de flujo lateral; La Figura 1b es un diagrama esquemático del dispositivo de diagnóstico de flujo lateral de la Figura 1a; La Figura 2 representa un dispositivo microfluídico usado en análisis de muestras in vitro; La Figura 3 es una vista lateral de un dispositivo de diagnóstico de flujo lateral de la presente invención; La Figura 4 es una vista cenital del dispositivo de diagnóstico de flujo lateral de la Figura 3; La Figura 5... [Seguir leyendo]

1. Un adhesivo que comprende al menos un polímero reticulado impreso molecularmente. 2. Un adhesivo de la reivindicación 1, que comprende múltiples polímeros impresos molecularmente. 3. Un adhesivo de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que un polímero impreso molecularmente contiene sitios de impresión para uno o más compuestos diana. 4. Un adhesivo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho adhesivo es un adhesivo sensible a la presión. 5. Un adhesivo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho adhesivo es un adhesivo de sellado por calor. 6. Un adhesivo de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho polímero está impreso con un tensioactivo. 7. Un adhesivo de la reivindicación 1, en el que dicho polímero está impreso con un componente contenido por la sangre. 8. Un adhesivo de la reivindicación 7, en el que dicho polímero está impreso con al menos uno de ácido úrico, acetaminofeno o ácido ascórbico. 9. Un adhesivo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho polímero está impreso con ácido úrico y/o ácido ascórbico. 10. Un adhesivo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho polímero está impreso con glucosa. 11. Un adhesivo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho polímero impreso molecularmente está presente en dicho adhesivo en la forma de un polvo como mezcla con el mismo. 12. Un adhesivo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho polímero impreso molecularmente está presente en una superficie de dicho adhesivo. 13. Un método para preparar un adhesivo como el definido en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende las etapas de proporcionar los monómeros polimerizables requeridos para formar el polímero deseado que es para ser impreso molecularmente, combinar dichos monómeros polimerizables con un componente 25 adaptado para imprimir dicho polímero y que es compatible con dichos monómeros, copolimerizar y reticular dichos monómeros polimerizables para formar un polímero impreso en mezcla con dicho componente adaptado para imprimir dicho polímero, y combinar dicho polímero reticulado impreso molecularmente con un adhesivo.   14. Un dispositivo de diagnóstico in vitro de flujo lateral que comprende una carcasa, medios en la carcasa para introducir una muestra a ser ensayada en dicho dispositivo, medios en dicha carcasa para la recogida de fluidos, y una tira de soporte que tiene separados por un espacio un primer y segundo extremos, en donde dicha tira de soporte está comprendida de un adhesivo como el definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12. 15. Un dispositivo de flujo lateral de la reivindicación 14, que comprende además una membrana microporosa o porosa unida a dicha tira de soporte entre dichos primer y segundo extremos. 16. Un dispositivo de diagnóstico in vitro microfluídico comprendido de una base que tiene al menos un canal de fluidos dentro del cual una muestra fluida a ser ensayada pasa desde un orificio de entrada hasta una zona de detección, en el que dicho al menos un canal de fluidos está encerrado por al menos una superficie de cierre, en donde al menos una superficie del canal de fluidos está comprendida de un adhesivo que comprende un polímero reticulado impreso molecularmente. 17. Un dispositivo microfluídico de la reivindicación 16, en el que dicha al menos una superficie de cierre está sellada por calor a dicha base para sellar dicho al menos un canal de fluidos. 18. Un dispositivo microfluídico de la reivindicación 16, en el que la superficie de dicha al menos una superficie de cierre que se enfrenta a dicho al menos un canal de fluidos exhibe propiedades adhesivas sensibles a la presión. 19. Un dispositivo microfluídico de la reivindicación 17, en el que la superficie de dicha al menos una superficie de cierre que se enfrenta a dicho al menos un canal de fluidos está impresa molecularmente con un tensioactivo. 20. Un dispositivo microfluídico de la reivindicación 17, en el que dichos canales de fluidos están troquelados en dicha capa adhesiva. 21. Un dispositivo de diagnóstico in vitro comprendido de una microplaca que tiene una placa base que tiene formados en la misma una multitud de microorificios o cavidades y al menos una cubierta colocada en relación de sellado para dichos microorificios o cavidades, en donde una superficie de al menos dicha cubierta que sella dichos E06773730 07-11-2011   microorificios o cavidades está comprendida de un adhesivo que comprende un polímero reticulado impreso molecularmente. 22. Un dispositivo de diagnóstico de la reivindicación 21, en el que dicha al menos una parte de cubierta está sellada por calor a dicha base para sellar dichos microorificios o cavidades. 23. Un dispositivo de diagnóstico de la reivindicación 21, en el que la superficie de dicha al menos una cubierta que se enfrenta a dichos microorificios o cavidades exhibe propiedades adhesivas sensibles a la presión. 24. Un dispositivo de diagnóstico de la reivindicación 21, en el que la superficie de dicha al menos una cubierta que se enfrenta a dichos microorificios o cavidades está impresa molecularmente con un tensioactivo. 25. Un método para realizar un análisis de una muestra líquida que contiene un componente a ser analizado en cuanto a identidad y/o cantidad, que comprende poner en contacto dicha muestra líquida con un adhesivo que comprende un polímero reticulado que ha sido impreso con dicho componente, y realizar dicho análisis en base a la cantidad de dicho componente absorbida por dicho polímero que ha sido previamente impreso con dicho componente. 26. Un método de la reivindicación 25, en el que dicho polímero es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10. 16 E06773730 07-11-2011   17 E06773730 07-11-2011   18 E06773730 07-11-2011   19 E06773730 07-11-2011   E06773730 07-11-2011   21 E06773730 07-11-2011   22 E06773730 07-11-2011   23 E06773730 07-11-2011   24 E06773730 07-11-2011   E06773730 07-11-2011