Péptidos para tratar las beta-amiloidosis.

Utilización de por lo menos un compuesto que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEFKHG(C),

TLHEFRH(C), ILFRHG(C), TSVFRH(C), SQFRHY(C), LMFRHN(C), SPNQFRH(C), ELFKHHL(C), THTDFRH(C), DEHPFRH(C), QSEFKHW(C), ADHDFRH(C), YEFRHAQ(C) y TEFRHKA(C) para producir un medicamento destinado a la prevención y/o al tratamiento de la b-amiloidosis

Péptidos para tratar las beta-amiloidosis.

La presente invención se refiere a la utilización de mimotopos para la prevención, el tratamiento y el diagnóstico de enfermedades asociadas con la formación y/o agregación de β-amiloide (β-amiloidosis) .

Diversas enfermedades degenerativas se caracterizan por la polimerización anormal y acumulación de proteínas específicas. Estas denominadas proteopatías incluyen trastornos neurológicos tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington, así como trastornos sistémicos diversos, incluyendo las amiloidosis. La presente invención se refiere a la prevención, al tratamiento y al diagnóstico de proteopatías asociadas con proteínas β-amiloides, resumidas bajo el término β-amiloidosis. La forma más destacada de las βamiloidosis es la enfermedad de Alzheimer (EA) . Otros ejemplos incluyen de manera no limitativa la demencia con cuerpos de Lewy y la demencia en el síndrome de Down.

La EA se caracteriza por la acumulación anormal de placas amiloides extracelulares - estrechamente asociadas con las astrocitosis y microgliosis extensas, así como las neuronas distróficas y la pérdida neuronal. Estas placas amiloides consisten principalmente en los péptidos β-amiloideos (Aβ) Aβ40 y Aβ42 derivados de la proteína precursora amiloide (PPA) , que se expresa en varios tipos de células en el sistema nervioso. Se considera que los péptidos Aβ están directamente implicados en la patogenia y progresión de la EA.

La PPA se procesa normalmente mediante dos etapas de escisión para formar las formas actualmente conocidas de Abeta x-40/42/43. La primera escisión se realiza por las denominadas enzimas 1 y 2 que escinden PPA en el punto beta (BACE1 y BACE2) ; la segunda etapa proteolítica se lleva a cabo por el complejo gamma-secretasa (revisado en De Strooper et al. J Cell Sci 113 (2000) : 1857-1870) .

Las enzimas BACE reconocen dos sitios en la porción N-terminal del supuesto péptido Aβ: la primera interacción de BACE con PPA conduce a un corte de la secuencia DAEFR (pos. 1 en Aβ) y la formación de Abeta 1-X. Alternativamente, BACE también puede cortar una futura posición 11 en Aβ, dando como resultado el fragmento 11-

X. De este modo, el procesamiento de PPA mediado por BACE crea una variedad de diferentes especies de Aβ con Abeta 1-40/42 de longitud completa como contribuyente principal. La actividad de la gamma-secretasa conduce a la producción de 3 fragmentos principales: Aβ 1-40/42/43. Una vez que estos péptidos se producen, se procesan adicionalmente mediante amino-peptidasas que dan como resultado su degradación gradual subsiguiente. Estas etapas adicionales conducen a la formación de otras formas como por ejemplo Aβ3-40/42 respectivamente. En seres humanos, por término medio, el 60 - 85% de material de placa amiloide está formado por derivados de Aβ40/42 que están truncados N-terminalmente y modificados con frecuencia. Las cantidades relativas de especies Aβ truncadas N-terminalmente son variables con respecto a los niveles de Aβ, mutaciones y actividad de BACE.

Las formas truncadas de Aβ más abundantes son: Aβ3-40/42 y Aβ11-40/42. Ambos péptidos contienen un resto de glutamato N-terminal, que está modificado frecuentemente de forma enzimática a piroglutamato, dando como resultado la formación de Aβ3 (pE) -40/42 y Aβ11 (pE) -40/42, respectivamente. Debido a que el término amino de los péptidos Abeta 3 (pE) y 11 (pE) está bloqueado por lactama interna, está protegido de la acción proteolítica de otras aminopeptidasas distintas de las específicas para piroglutamato, y por lo tanto puede permanecer estable en los tejidos.

La forma más prominente de amiloide modificado N-terminalmente truncado está formada por el péptido 3 (pE) 40/42, que se cree que constituye hasta el 50% de todas las formas truncadas. Esto significa que estas isoformas constituyen el 25-40% de todos los péptidos amiloides en cerebros con EA. Otra forma destacada de péptidos Aβ truncados es Aβ11-40/42: Naslund et al. y Huse et al. pudieron demostrar que hay un nivel significativo de estas especies truncadas detectables en cerebros humanos de pacientes con EA así como en pacientes infraclínicos para EA. Además, estos péptidos sufren deshidratación intramolecular y forman formas (pE) estables con consecuencias similares como se describen para 3 (pE) -40/42.

Se ha demostrado anteriormente que los péptidos truncados y modificados son más estables en el tejido nervioso que Aβ de longitud completa. Además, las formas truncadas N-terminalmente de Aβ son más amiloidógenas que los péptidos Aβ sin modificar, aumentando así la cantidad de formación de placas, y además muestran actividad neurotóxica cuando se aplican a las neuronas en cultivo así como en experimentos in vivo. Las formas truncadas de Aβ ya se pueden detectar en agregaciones difusas de Aβ en las etapas iniciales de la EA, y podrían estar involucradas en la formación inicial de placas, actuando como semillas individuales in vivo.

Existen pruebas convincentes de que la aparición de especies Aβ N-terminalmente truncadas está correlacionada con el aumento de la gravedad e inicio temprano de la neurodegeneración en la enfermedad de Alzheimer esporádica y familiar, así como en pacientes con síndrome de Down. Los efectos agregantes junto con la mayor estabilidad de estos péptidos los hacen un jugador potencialmente peligroso en el desarrollo de EA. El análisis en pacientes infraclínicos que sufren EA familiar o Síndrome de Down ha mostrado inequívocamente que Aβ 3 (pE) -42 se puede detectar durante las etapas más tempranas de la enfermedad, también denominadas las etapas de “germen”. En este momento no se pueden detectar o sólo se pueden detectar síntomas neurológicos menores, aunque se comienzan a acumular placas que poseen la especie peptídica Aβ 3 (pE) -42. De este modo, los datos procedentes de estos pacientes implican una relación entre la formación temprana de especies de Aβ truncadas y el comienzo, así como la evolución, de la enfermedad.

A partir de estos hallazgos, parece ser importante disminuir la cantidad de estas especies de péptidos en pacientes con EA para modificar la progresión de la enfermedad y reducir la toxicidad y la disminución cognitiva que la acompaña. Una vacuna contra EA óptima debería provocar de este modo una respuesta inmunitaria que sea capaz de dirigirse a las formas más destacadas de péptidos Aβ presentes en el cerebro de pacientes con EA.

De hecho, el tratamiento inmunoterapéutico que usa estrategias de inmunización activa y pasiva para dirigirse a Aβ de longitud completa, condujo a la reducción de las placas de Aβ y tuvo un impacto beneficioso sobre la progresión de la enfermedad en modelos animales de EA. Los experimentos de vacunación pasiva en modelos de ratón de EA mostraron claramente que anticuerpos dirigidos específicamente contra los términos N y C de Aβ40/42 son capaces de reducir la carga de placas en el cerebro y también mejoran las funciones cognitivas en animales tratados, según se juzga de análisis de comportamiento. Se han realizado observaciones similares en experimentos de vacunación activa, usando diferentes enfoques para inducir respuestas inmunitarias dirigidas contra Aβ40/42 en ratones. Todos estos enfoques usaron Aβ40/42 de longitud completa o fragmentos que contienen la secuencia nativa de Aβ, y la mayoría redujo la carga de amiloides en modelos de ratón transgénico. De forma importante, estos animales también mostraron funciones cognitivas mejoradas. Sorprendentemente, Lemere et al. (Am J Pathol 165 (2004) : 283-297) pudo reproducir estos resultados en primates no humanos, que mostraron reducción clara de la deposición de placas y patología asociada en respuesta a la vacunación activa con Aβ de longitud completa. Sin embargo, el primer ensayo de vacunación clínica de fase IIa en pacientes con EA que usa Aβ42 de longitud completa como antígeno tuvo que ser interrumpido debido a efectos secundarios neuroinflamatorios graves, incluyendo la infiltración en el cerebro de linfocitos T autorreactivos. No obstante, los estudios que investigan los efectos clínicos en pacientes tratados con AN-1792 pusieron de manifiesto que los pacientes que desarrollaron una respuesta de anticuerpos contra Aβ42 pero que no padecían de meningoencefalitis respondían mejor a las pruebas cognitivas que los pacientes que no respondían, lo que indica que la inmunoterapia podría ser un enfoque de tratamiento muy útil en EA.

De forma más importante,... [Seguir leyendo]

1. Utilización de por lo menos un compuesto que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en SEFKHG (C) , TLHEFRH (C) , ILFRHG (C) , TSVFRH (C) , SQFRHY (C) , LMFRHN (C) , SPNQFRH (C) , ELFKHHL (C) , THTDFRH (C) , DEHPFRH (C) , QSEFKHW (C) , ADHDFRH (C) , YEFRHAQ (C) y TEFRHKA (C) para producir un medicamento destinado a la prevención y/o al tratamiento de la β-amiloidosis.

2. Utilización de por lo menos un compuesto que comprende la secuencia de aminoácidos

X1RX2DX3 (X4) n (X4) m (X6) o (Fórmula I) ,

en la que X1 es isoleucina (I) o valina (V) , X2 es triptófano (W) o tirosina (Y) , X3 es treonina (T) , valina (V) , alanina (A) , metionina (M) , glutamina (Q) o glicina (G) , X4 es prolina (P) , alanina (A) , tirosina (Y) , serina (S) , cisteína (C) o glicina (G) , X5 es prolina (P) , leucina (L) , glicina (G) o cisteína (C) , X6 es cisteína (C) , n, m y o son, independientemente, 0 o 1,

presentando dicho compuesto una capacidad de unión a un anticuerpo que es específico para un epítopo del péptido beta amiloide (Aβ) que comprende la secuencia de aminoácidos EFRHDSGY y/o pEFRHDSGY

para producir un medicamento destinado a la prevención y/o al tratamiento de la β-amiloidosis.

3. Utilización según la reivindicación 2, caracterizada porque el compuesto comprende un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en IRWDTP (C) , VRWDVYP (C) , IRYDAPL (C) , IRYDMAG (C) , IRWDTSL (C) , IRWDQP (C) , IRWDG (C) e IRWDGG (C) .

4. Utilización de por lo menos un compuesto que comprende la secuencia de aminoácidos

EX1WHX2X3 (X4) n (X5) m (Fórmula II) ,

en la que X1 es valina (V) , arginina (R) o leucina (L) , X2 es arginina (R) o ácido glutámico (E) , X3 es alanina (A) , histidina (H) , lisina (K) , leucina (L) , tirosina (Y) o glicina (G) , X4 es prolina (P) , histidina (H) , fenilalanina (F) , glutamina (Q) o cisteína X5 es cisteína (C) , n y m son, independientemente, 0 o 1,

presentando dicho compuesto una capacidad de unión a un anticuerpo que es específico para un epítopo del péptido beta-amiloide (Aβ) que comprende la secuencia de aminoácidos EVHHQKL,

para producir un medicamento destinado a la prevención y/o al tratamiento de la β-amiloidosis.

5. Utilización según la reivindicación 4, caracterizada porque el compuesto comprende un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en EVWHRHQ (C) , ERWHEKH (C) , EVWHRLQ (C) , ELWHRYP (C) , ELWHRAF (C) , ELWHRA (C) , EVWHRG (C) , EVWHRH (C) y ERWHEK (C) , preferentemente EVWHRHQ (C) , ERWHEKH (C) , EVWHRLQ (C) , ELWHRYP (C) y ELWHRAF (C) .

6. Utilización de por lo menos un compuesto que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en QDFRHY (C) , SEFKHG (C) , TSFRHG (C) , TSVFRH (C) , TPFRHT (C) , SQFRHY (C) , LMFRHN (C) , SAFRHH (C) , LPFRHG (C) , SHFRHG (C) , ILFRHG (C) , QFKHDL (C) , NWFPHP (C) , EEFKYS (C) , NELRHST (C) , GEMRHQP (C) , DTYFPRS (C) , VELRHSR (C) , YSMRHDA (C) , AANYFPR (C) , SPNQFRH (C) , SSSFFPR (C) , EDWFFWH (C) , SAGSFRH (C) , QVMRHHA (C) , SEFSHSS (C) , QPNLFYH (C) , ELFKHHL (C) , TLHEFRH (C) , ATFRHSP (C) , APMYFPH (C) , TYFSHSL (C) , HEPLFSH (C) , SLMRHSS (C) , EFLRHTL (C) , ATPLFRH (C) , QELKRYY (C) , THTDFRH (C) , LHIPFRH (C) , NELFKHF (C) , SQYFPRP (C) , DEHPFRH (C) , MLPFRHG (C) , SAMRHSL (C) , TPLMFWH (C) , LQFKHST (C) , ATFRHST (C) , TGLMFKH (C) , AEFSHWH (C) , QSEFKHW (C) , AEFMHSVC (C) , ADHDFRH (C) , DGLLFKH (C) , IGFRHDS (C) , SNSEFRR (C) , SELRHST (C) , THMEFRR (C) , EELRHSV (C) , QLFKHSP (C) , YEFRHAQ (C) , SNFRHSV (C) , APIQFRH (C) , AYFPHTS (C) , NSSELRH (C) , TEFRHKA (C) , TSTEMWH (C) , SQSYFKH (C) , (C) SEFKH, SEFKH (C) , (C) HEFRH y HEFRH (C) para producir un medicamento destinado a la prevención y/o al tratamiento de la β-amiloidosis.

7. Utilización según la reivindicación 6, caracterizada porque el compuesto comprende un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en QDFRHY (C) , SEFKHG (C) , TSFRHG (C) , TSVFRH (C) , TPFRHT (C) , SQFRHY (C) , LMFRHN (C) , SAFRHH (C) , LPFRHG (C) , SHFRHG (C) , ILFRHG (C) ,

QFKHDL (C) , NWFPHP (C) , EEFKYS (C) , SPNQFRH (C) , TLHEFRH (C) , THTDFRH (C) , DEHPFRH (C) , QSEFKHW (C) , ADHDFRH (C) , DGLLFKH (C) , EELRHSV (C) , TEFRHKA (C) , (C) SEFKH, SEFKH (C) , (C) HEFRH y HEFRH (C) , preferentemente SEFKHG (C) , TSVFRH (C) , SQFRHY (C) , LMFRHN (C) , ILFRHG (C) , SPNQFRH (C) , ELFKHHL (C) , TLHEFRH (C) , THTDFRH (C) , DEHPFRH (C) , QSEFKHW (C) , ADHDFRH (C) , YEFRHAQ (C) , TEFRHKA (C) .

8. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque el compuesto es un polipéptido que comprende 4 a 20 restos de aminoácidos.

9. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque el compuesto está acoplado a un vehículo farmacéuticamente aceptable, preferentemente KLH (hemocianina de lapa californiana) . 15

10. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el compuesto se formula para administración intravenosa, subcutánea, intradérmica o intramuscular.

11. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizada porque el compuesto se formula con un 20 adyuvante, preferentemente hidróxido de aluminio.

12. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada porque el compuesto está contenido en el medicamento en una cantidad de 0, 1 ng a 10 mg, preferentemente 10 ng a 1 mg, en particular 100 ng a 10 μg.

13. Utilización de un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para tratar y/o aliviar los síntomas de la sinucleopatía.

14. Utilización según la reivindicación 13, caracterizada porque la sinucleopatía se selecciona de entre el grupo de enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia multisistémica y neurodegeneración con 30 acumulación de hierro encefálica.

15. Péptido que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste en IRWDTP (C) , VRWDVYP (C) , IRYDAPL (C) , IRYDMAG (C) , IRWDTSL (C) , IRWDQP (C) , IRWDG (C) , IRWDGG (C) , EVWHRHQ (C) , ERWHEKH (C) , EVWHRLQ (C) , ELWHRYP (C) , ELWHRAF (C) , ELWHRA (C) , EVWHRG (C) , 35 EVWHRH (C) , ERWHEK (C) , QDFRHY (C) , SEFKHG (C) , TSFRHG (C) , TSVFRH (C) , TPFRHT (C) , SQFRHY (C) , LMFRHN (C) , SAFRHH (C) , LPFRHG (C) , SHFRHG (C) , ILFRHG (C) , QFKHDL (C) , NWFPHP (C) , EEFKYS (C) , NELRHST (C) , GEMRHQP (C) , DTYFPRS (C) , VELRHSR (C) , YSMRHDA (C) , AANYFPR (C) , SPNQFRH (C) , SSSFFPR (C) , EDWFFWH (C) , SAGSFRH (C) , QVMRHHA (C) , SEFSHSS (C) , QPNLFYH (C) , ELFKHHL (C) , TLHEFRH (C) , ATFRHSP (C) , APMYFPH (C) , TYFSHSL (C) , HEPLFSH (C) , SLMRHSS (C) , EFLRHTL (C) ,

ATPLFRH (C) , QELKRYY (C) , THTDFRH (C) , LHIPFRH (C) , NELFKHF (C) , SQYFPRP (C) , DEHPFRH (C) , MLPFRHG (C) , SAMRHSL (C) , TPLMFWH (C) , LQFKHST (C) , ATFRHST (C) , TGLMFKH (C) , AEFSHWH (C) , QSEFKHW (C) , AEFMHSV (C) , ADHDFRH (C) , DGLLFKH (C) , IGFRHDS (C) , SNSEFRR (C) , SELRHST (C) , THMEFRR (C) , EELRHSV (C) , QLFKHSP (C) , YEFRHAQ (C) , SNFRHSV (C) , APIQFRH (C) , AYFPHTS (C) , NSSELRH (C) , TEFRHKA (C) , TSTEMWH (C) , SQSYFKH (C) , (C) SEFKH, SEFKH (C) , (C) HEFRH y HEFRH (C) .

16. Péptido según la reivindicación 15, caracterizado porque el péptido está acoplado a un vehículo farmacéuticamente aceptable, preferentemente KLH (hemocianina de lapa californiana) .

17. Formulación farmacéutica, preferentemente una vacuna, que comprende por lo menos un péptido según la 50 reivindicación 15 o 16.