Péptido, péptido magnético y método para detectar la enfermedad celíaca.

La presente invención se refiere a un péptido, a un péptido magnético y a un método para detectar la enfermedad celíaca. También se refiere a un péptido deaminado que se emplea para preparar dicho péptido magnético

, y al empleo de ambos para la detección de la enfermedad celíaca. Dicho péptido deaminado comprende una cola de histidinas y está unido a un complejo magnético particulado. También se refiere a un inmunosensor que comprende dicho péptido magnético, a un método apropiado para detectar la enfermedad celíaca basado en un immunoensayo magnético y a un kit que comprende dicho péptido magnético.

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201430198.

Solicitante: UNIVERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA.

Nacionalidad solicitante: España.

Inventor/es: PIVIDORI GURGO,María Isabel, KERGARAVAT,Vanessa Silvina.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/68 (en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/415 (de vegetales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos fijados sobre un soporte o inmovilizados;... > C07K17/14 (Péptidos inmovilizados sobre, o en, un soporte inorgánico)

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Fragmento de la descripción:

PÉPTIDO, PÉPTIDO MAGNETICO Y MÉTODO PARA DETECTAR LA ENFERMEDAD CELÍACA

Campo de la técnica La presente invención se refiere a un método para la detección de la enfermedad celíaca mediante el empleo de un péptido inmovilizado sobre partículas magnéticas.

Estado de la técnica anterior

La Enfermedad Celíaca (EC) es una forma de enteropatía que afecta a individuos genéticamente predispuestos, al entrar en contacto con alimentos que contienen gluten. Ello determina la aparición de una lesión histológica característica, que en las formas más graves provoca atrofia de las vellosidades intestinales. Como consecuencia de ello, puede producirse un defecto de malabsorción de nutrientes (principios inmediatos, sales minerales y vitaminas) que conduce a diversos estados carenciales responsables de un amplio espectro de manifestaciones clínicas como osteomalacia (reblandecimiento de huesos por pérdida de sales calcáreas) , úlceras digestivas y procesos malignos como neoplasia gastrointestinal.

La EC puede presentarse a cualquier edad de la vida y cursa con manifestaciones clínicas muy variadas, aunque en muchos casos la enfermedad es asintomática. Estas premisas hacen especialmente relevante el papel del pediatra y del médico de familia en atención primaria en el diagnóstico precoz, evitando así el desarrollo de complicaciones graves a largo plazo.

La EC consiste en una intolerancia permanente a las proteínas del gluten del trigo (gliadina) , del centeno (secalina) , de la cebada (hordeina) y del triticale (híbrido de trigo y centeno) .

A pesar de que esta enfermedad fue considerada rara en muchos países europeos, la disponibilidad de ensayos serológicos sensibles no invasivos han permitido detectar la enfermedad celíaca en la población en general.

La prevalencia mundial se estima en 1/266, y en España oscila entre 1/118 en la población infantil y 1/389 en la población adulta. Sin embargo, se considera que la epidemiología de la EC tiene las características de un iceberg ya que esta prevalencia podría ser mucho mayor, puesto que un porcentaje importante de casos permanece sin detectar. Se estima que por cada paciente diagnosticado se encuentran entre 5 y 10 que no lo son. Así, según diversos estudios epidemiológicos realizados en todo el mundo, la EC sin sintomatología clásica es más frecuente que la forma sintomática, constituyendo un reto para el sistema sanitario su detección precoz.

Inicialmente, la detección de la enfermedad celíaca se basaba en un ensayo de malabsorción mediante el empleo de D-xilosa. Posteriormente se empezaron a utilizar ensayos serológicos para anticuerpos anti-gliadina (AGA) y anticuerpos anti-endomisio (EMA) . Más adelante se incorporó la detección de los anticuerpos anti-transglutaminasa tisular 2 (ATG2) y, más recientemente, de los anticuerpos anti-péptidos deaminados de gliadina (APDG) .

Los marcadores séricos son de gran utilidad como indicadores de EC, si bien la biopsia intestinal sigue siendo el método definitivo para establecer el diagnóstico. Dichos marcadores ayudan a seleccionar a los individuos con mayor probabilidad de presentar la EC, siendo particularmente útiles en aquéllos sin síntomas gastrointestinales, en aquellos con enfermedades asociadas a la EC y para el control de familiares de primer grado de enfermos diagnosticados. Debe considerarse, no obstante, que la negatividad de estos marcadores no excluye definitivamente el diagnóstico, siendo necesario en ocasiones recurrir a pruebas más avanzadas (estudio genético) cuando la sospecha diagnóstica es elevada.

Los anticuerpos anti-gliadina (AGA) fueron los primeros en utilizarse, tal como se describe en Stern et al., Validation and standardization of serological screening tests for coeliac disease in 1996, 3rd EMRC/ESPGAN Workshop, Dec. 5-8, 1996, Molsheim, Francia, pág. 9-24. Son tanto de clase IgA como IgG. Se utilizan preferentemente los de clase IgA y su eficacia para el cribado de EC es mayor en niños que en adultos.

Los anticuerpos anti-endomisio (EMA) son también de clase IgA. Su sensibilidad y su especificidad son variables según la edad. Según el documento Diagnóstico precoz de la enfermedad celíaca, Ministerio de Sanidad y Consumo, Madrid, 2008, (NIPO: 351-08-086-X) , dichos anticuerpos tienen el inconveniente de la laboriosidad de su determinación y su interpretación es subjetiva. Además, es conocido que algunos pacientes de la EC presentan un déficit de IgA, por lo que dichos pacientes darían negativos con este test.

Los anticuerpos anti-transglutaminasa tisular humana de clase IgA (ATG2) se consideran marcadores sensibles, específicos y muy útiles tanto para el diagnóstico como el seguimiento de la EC. También se han divulgado otras alternativas como los anticuerpos combinados ATG2-IgA/IgG.

En el estado de la técnica se han descrito diversos métodos en los que se emplean los anticuerpos ATG2. Por ejemplo, en el artículo Kergeravat et al., Magneto immunofluorescence assay for diagnosis of celiac disease, Anal. Chim Acta., 2013, 798, 89-96 se describe un método para el diagnóstico de la EC basado en la detección de anticuerpos anti-ATG2 mediante el uso de la enzima ATG2 inmovilizada en partículas magnéticas y la detección se realizó por inmunofluorescencia. Se describe que dicho ensayo presentó una sensibilidad del 96, 6% y una especificidad del 89, 5%, y una eficiencia del 93, 8% comparado con el kit comercial ELISA.

Para evitar la toma de muestras de sangre también se ha divulgado la detección de anticuerpos ATG2 en saliva como, por ejemplo, en la solicitud de patente norteamericana US-A-2008/0038760.

Posteriormente, tal como se describe en Aleanzi et al., Antibody Recognition against Native and Selectively Deamidated Gliadin Peptides, Clin. Chem., 2001, 47, 2023–2028, se comenzó a estudiar la relación entre la enfermedad celíaca y los APDG del isotipo IgG e IgA, ya que en la enfermedad celíaca, los péptidos de gliadina ingeridos en la dieta son selectivamente deaminados en el intestino por la enzima TG2, de modo que la glutamina, H2NCOCH2CH (NH2) COOH, es transformada por dicha enzima en ácido glutámico, HOOCCH2CH (NH2) COOH. Esta deaminación selectiva puede ser el evento que inicia la respuesta inmune al gluten en individuos predispuestos genéticamente. En Schwertz et al., Serologic Assay Based on Gliadin-Related Nonapeptides as a Highly Sensitive and Specific Diagnostic Aid in Celiac Disease, Clin. Chem., 2004, 50, 2370–2375, se describen nonapéptidos derivados de gliadina que son reconocidos por los anticuerpos de pacientes con la ED. También se describe que ninguno de los octadecapéptidos deaminados ensayados fue mejor epitopo que los péptidos de cadena más corta.

En el estado de la técnica se han descrito métodos para detectar estos anticuerpos APDG. Dichos métodos se basan en ensayos ELISA con detección óptica como, por ejemplo, el descrito en Sakly et al., Performance of anti-deamidated gliadin peptides antibodies in celiac disease diagnosis, Clin. Res. Hepatol. Gastroenterol., 2012, 36, 598-603, o un ensayo inmunofluorimétrico como el descrito en Ankelo et al., Antibody responses to deamidated gliadin peptide show high specificity and parallel antibodies to tissue transglutaminase in developing coeliac disease, Clin. Exp. Immunol., 2007, 150, 285–293.

En el estado de la técnica se siguen divulgando nuevos métodos para la detección de la EC. Por ejemplo, en la solicitud de patente internacional WO-A2009/131909 se describe un método para detectar la EC en un individuo en el que se emplea un antígeno formado por una gliadina recombinante deaminada unida a una cola tal como la proteína glutationa-S-transferasa o His-tag, que puede incluir transaminasa tisular.... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Péptido caracterizado porque responde a la fórmula general (I) :

H2N- (H) n-LPFPXXPXXPFPXPXXPX- (H) m-COOH (I)

en donde:

X es Q o E indistintamente, y al menos un X es E, y

en donde:

n está comprendido entre 2 y 20, y m es 0, o m está comprendido entre 2 y 20, y n es 0.

2. Péptido según la reivindicación 1, caracterizado porque m es 0 y n está comprendida entre 4 y 15.

3. Péptido según la reivindicación 2, caracterizado porque m es 0 y n está comprendida entre 6 y 8.

4. Péptido según la reivindicación 3, caracterizado porque responde a la estructura H2N- (H) 6-LPFPEQPEQPFPQPEQPQ-COOH (SEQ_ID_NO: 39) .

5. Péptido magnético, caracterizado porque comprende:

a) el péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, y

b) un complejo magnético particulado de fórmula general (II) :

en donde: Z es una partícula polimérica magnética unida covalentemente al ligando aspartato carboximetilado a través de R1, R1 es un brazo de unión que conecta el átomo de nitrógeno del ligando aspartato carboximetilado con la partícula polimérica magnética Z, y M es un ion de un metal de transición con un número de coordinación 6.

6. Péptido magnético según la reivindicación 5, caracterizado porque la partícula polimérica magnética está constituida por un polímero estirénico reticulado.

7. Péptido magnético según las reivindicaciones 5 ó 6, caracterizado porque el brazo de unión R1 consta de una cadena de entre 3 y 20 átomos y se selecciona de entre alquileno-NH-, -alquileno-CO-NH-, -alquileno-NH-CO-, -alquileno-O-, -alquileno-CO-O-, -alquileno-O-CO-, -alquileno-S-, -alquileno-CO-S-, -alquileno-S-CO-, -alquileno-NHalquileno-R2, -alquileno-NH-CO-alquileno-R2, -alquileno-CO-NH-alquileno-R2, alquileno-O-alquileno-R2, -alquileno-O-CO-alquileno-R2, -alquileno-CO-O-alquileno-R2, -alquileno-S-alquileno-R2, -alquileno-S-CO-alquileno-R2, -alquileno-CO-S-alquileno-R2, -hidroxialquileno-NH-, -hidroxialquileno-CO-NH-, -hidroxialquileno-NH-CO-, hidroxialquileno-O-, -hidroxialquileno-CO-O-, -hidroxialquileno-O-CO-, hidroxialquileno-S-, -hidroxialquileno-CO-S-, -hidroxialquileno-S-CO-, -hidroxialquileno-NH-alquileno-R2, -hidroxialquileno-NH-CO-alquileno-R2, -hidroxialquileno-CO-NHalquileno-R2, -hidroxialquileno-O-alquileno-R2, -hidroxialquileno-O-CO-alquileno-R2, -hidroxialquileno-CO-O-alquileno-R2, -hidroxialquileno-S-alquileno-R2, -hidroxialquilenoS-CO-alquileno-R2, -hidroxialquileno-CO-S-alquileno-R2, -alquileno-NHhidroxialquileno-R2, -alquileno-NH-CO-hidroxialquileno-R2, -alquileno-CO-NHhidroxialquileno-R2 , -alquileno-O-hidroxialquileno-R2, -alquileno-O-COhidroxialquileno-R2, -alquileno-CO-O-hidroxialquileno-R2, -alquileno-S-hidroxialquileno-R2, -alquileno-S-CO-hidroxialquileno-R2, y -alquileno-CO-S-hidroxialquileno-R2, en donde R2 es O, S o NH, y preferiblemente es NH.

8. Péptido magnético la reivindicación 7, caracterizado porque el brazo de unión R1 se selecciona de entre -alquileno-NH-, -alquileno-CO-NH-, -alquileno-NH-CO-, -alquileno-O-, -alquileno-CO-O-, -alquileno-O-CO-, -alquileno-NH-alquileno-R2, -alquileno-NH-CO-alquileno-R2, -alquileno-CO-NH-alquileno-R2, -alquileno-O-alquileno-R2, -alquilenoO-CO-alquileno-R2, -alquileno-CO-O-alquileno-R2, -hidroxialquileno-NH-, hidroxialquileno-CO-NH-, -hidroxialquileno-NH-CO-, -hidroxialquileno-O-, hidroxialquileno-CO-O-, -hidroxialquileno-O-CO-, -hidroxialquileno-NH-alquileno-R2, hidroxialquileno-NH-CO-alquileno-R2, -hidroxialquileno-CO-NH-alquileno-R2, hidroxialquileno-O-alquileno-R2, -hidroxialquileno-O-CO-alquileno-R2, -hidroxialquileno-CO-O-alquileno-R2, -alquileno-NH-hidroxialquileno-R2, -alquileno-NH-COhidroxialquileno-R2, -alquileno-CO-NH-hidroxialquileno-R2, -alquileno-Ohidroxialquileno-R2, -alquileno-O-CO-hidroxialquileno-R2, y -alquileno-CO-Ohidroxialquileno-R2, en donde R2 es O, S o NH, y preferiblemente es NH.

9. Péptido magnético según la reivindicación 8, caracterizado porque el brazo de unión R1 se selecciona de entre -alquileno-NH-alquileno-R2, -alquileno-NH-COalquileno-R2, -alquileno-CO-NH-alquileno-R2, -alquileno-O-alquileno-R2, -alquileno-O-CO-alquileno-R2, y -alquileno-CO-O-alquileno-R2 en donde R2 es O, S o NH, y preferiblemente es NH.

10. Péptido magnético según la reivindicación 9, caracterizado porque el brazo de unión R1 es -alquileno-NH-alquileno-R2 en donde R2 es O, S o NH, y preferiblemente es NH.

11. Péptido magnético según la reivindicación 10, caracterizado porque el brazo de unión R1 es - (CH2) x-NH- (CH2) y-NH, en donde x e y están comprendidos entre 1 y 6, y preferiblemente entre 3 y 5.

12. Péptido magnético según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, caracterizado porque el metal de transición M se selecciona de entre el grupo formado por Ni, Fe, Ga, Mn, Co, Cu y Zn.

13. Péptido magnético según la reivindicación 12, caracterizado porque el metal de transición M se selecciona de entre el grupo formado por Ni, Fe, Mn y Co.

14. Péptido magnético según la reivindicación 13, caracterizado porque el metal de transición M es Co.

15. Péptido magnético según la reivindicación 14, caracterizado porque el metal de transición tiene un estado de oxidación de +2.

16. Péptido magnético según la reivindicación 5, caracterizado porque el complejo magnético particulado es Dynabeads®TALON®.

17. Inmunosensor caracterizado porque comprende el péptido magnético de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 16 y un transductor que tiene acoplado o integrado un imán.

18. Método para detectar la enfermedad celíaca, caracterizado porque comprende las siguientes etapas: 1) incubar una suspensión del péptido magnético de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 15 con una muestra de suero o sangre de un individuo,

2) añadir anti-suero humana-HRP, seleccionado de entre anti-IgA humana-HRP y anti-IgG humana-HRP, a la suspensión incubada en el punto 1) e incubar la suspensión obtenida, y

3) medir la señal electroquímica u óptica obtenida a partir de la suspensión obtenida en el punto 2) .

19. Kit para detectar la enfermedad celíaca, caracterizado porque comprende el péptido magnético de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 16.

20. Uso del péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para detectar la enfermedad celíaca.

21. Uso del péptido magnético de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 16 para detectar la enfermedad celíaca.

22. Uso del inmunosensor de la reivindicación 17 para detectar la enfermedad celíaca.

SEQUENCE LISTING

<110> Universitat Autònoma de Barcelona <120> Péptido, péptido magnético ymétodo para detectar la enfermedad celíaca <130> P201402

<160> 52

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Synthetic peptide <220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (20)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 1

His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro 1 5 10 15

Xaa Xaa Pro Xaa 20

<210> 2

<211> 21

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Synthetic peptide <220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (21)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 2

His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20

<210> 3

<211> 22

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Synthetic peptide <220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (22)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 3

His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro 1 5 10 15

Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20

<210> 4

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Synthetic peptide <220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (23)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 4

His His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe 1 5 10 15

Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20

<210> 5

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<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (24)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 5

His His His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro 1 5 10 15

Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20

<210> 6

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<212> PRT

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<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (25)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 6

His His His His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25

<210> 7

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<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (26)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 7

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Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25

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<212> PRT

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<223> SYNTHETIC PEPTIDE

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<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (27)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 8

His His His His His His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro 1 5 10 15

Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25

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<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

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<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (28)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 9

His His His His His His His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25

<210> 10

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<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

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<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (29)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 10

His His His His His His His His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa 1 5 10 15

Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25

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<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (30)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 11

His His His His His His His His His His His His Leu Pro Phe Pro 1 5 10 15

Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25 30

<210> 12

<211> 31

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (31)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 12

His His His His His His His His His His His His His Leu Pro Phe 1 5 10 15

Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25 30

<210> 13

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (32)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 13

His His His His His His His His His His His His His His Leu Pro 1 5 10 15

Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 20 25 30

<210> 14

<211> 33

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (33)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 14

His His His His His His His His His His His His His His His Leu 1 5 10 15

Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa Pro 20 25 30

Xaa <210> 15

<211> 34

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (34)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 15

His His His His His His His His His His His His His His His His 1 5 10 15

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 20 25 30

Pro Xaa <210> 16

<211> 35

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (35)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 16

His His His His His His His His His His His His His His His His 1 5 10 15

His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa 20 25 30

Xaa Pro Xaa 35

<210> 17

<211> 36

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE <220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (36)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 17

His His His His His His His His His His His His His His His His 1 5 10 15

His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro 20 25 30

Xaa Xaa Pro Xaa 35

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<211> 37

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (37)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 18

His His His His His His His His His His His His His His His His 1 5 10 15

His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa 20 25 30

Pro Xaa Xaa Pro Xaa 35

<210> 19

<211> 38

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (38)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 19

His His His His His His His His His His His His His His His His 1 5 10 15

His His His His Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro 20 25 30

Xaa Pro Xaa Xaa Pro Xaa 35

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<211> 20

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (20)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 20

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His 20

<210> 21

<211> 21

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (21)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 21

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His 20

<210> 22

<211> 22

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (22)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 22 Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His 20

<210> 23

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (23)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 23

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His 20

<210> 24

<211> 24

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (24)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E <400> 24

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His 20

<210> 25

<211> 25

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (25)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 25

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His 20 25

<210> 26

<211> 26

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (26)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 26

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His 20 25

<210> 27

<211> 27

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (27)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 27

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His 20 25

<210> 28

<211> 28

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220> <221> PEPTIDE

<222> (1) .. (28)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 28

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His 20 25

<210> 29

<211> 29

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (29)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 29

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His 20 25

<210> 30

<211> 30

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE <220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (30)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 30

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His 20 25 30

<210> 31

<211> 31

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (31)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 31

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

<210> 32

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (32)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 32

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

<210> 33

<211> 33

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (33)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 33

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

His <210> 34

<211> 34

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (34)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 34

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

His His <210> 35

<211> 35

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (35)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 35

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

His His His 35

<210> 36

<211> 36

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (36)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 36

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

His His His His 35

<210> 37

<211> 37

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220> <221> PEPTIDE

<222> (1) .. (37)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 37

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

His His His His His 35

<210> 38

<211> 38

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1) .. (38)

<223> Synthetic peptide X is Q or E, at least one is E

<400> 38

Leu Pro Phe Pro Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Pro Phe Pro Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 15

Pro Xaa His His His His His His His His His His His His His His 20 25 30

His His His His His His 35

<210> 39

<211> 24

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 39

His His His His His His Leu Pro Phe Pro Glu Gln Pro Glu Gln Pro 1 5 10 15

Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro Gln 20

<210> 40

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 40

Leu Pro Phe Pro Glu Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 41

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 41

Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 42

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 42

Leu Pro Phe Pro Glu Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 43

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 43

Leu Pro Phe Pro Glu Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 44

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 44 Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Glu

<210> 45

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 45

Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Glu 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 46

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 46

Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 47

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 47

Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Glu Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 48

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 48

Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln Glu Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 49

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 49

Leu Pro Phe Pro Gln Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 50

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 50

Leu Pro Phe Pro Gln Glu Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 51

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 51

Leu Pro Phe Pro Glu Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15

Pro Gln

<210> 52

<211> 19

<212> PRT

<213> Artificial Sequence <220>

<223> SYNTHETIC PEPTIDE

<400> 52

Leu Pro Phe Pro Glu Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 1 5 10 15

Pro Gln Lys