Nuevos receptores mutantes de sustitución y su uso en un sistema de expresión génica inducible basado en receptores nucleares.

Un sistema de modulación de expresión de genes que comprende

a) un primer casete de expresión de genes que es capaz de expresarse en una célula huésped que comprendeun polinucleótido que codifica un primer polipéptido que comprende:



i) un dominio de transactivación;

ii) un dominio de unión al ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuyaexpresión va a modularse; y

iii) un domino de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B, en el que el domino de unión aligandos de receptores nucleares del Grupo B se selecciona del grupo que consiste en un receptor Xretinoide, una proteína de unión a la región II de H-2 (H-2RIIBP), un co-regulador-1 de ReceptoresNucleares (RCoR-1), una proteína ultra espiráculo, un receptor nuclear 2C1 y un domino de unión a ligandodel factor 1 coriónico (CF-1), y en el que los restos de aminoácidos que se encuentran en una posiciónequivalente o análoga a la de los restos de aminoácidos 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 hacen que elsistema de modulación de expresión de genes presente una inducción de plegamiento y una magnitud deinducción mejoradas, en comparación con un sistema de modulación de expresión de genes que contieneel dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente y

b) un segundo casete de expresión de genes que es capaz de expresarse en una célula huésped quecomprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende un dominio de unión aligandos de receptores nucleares seleccionado del grupo que consiste en un receptor de ecdisona, un receptorubicuo, un receptor huérfano 1, un receptor 1 nuclear de hormonas esteroideas, una proteína 15 queinteracciona con el receptor X retinoide, un receptor hepático X β, una proteína similar al receptor de hormonasesteroideas, un receptor hepático X, un receptor hepático X α, un receptor X farnesoide, una proteína 14 queinteracciona con receptores y un dominio de unión a ligandos de receptores de farnesol.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2002/005708.

Solicitante: INTREXON CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1750 Kraft Drive, Suite 1400 Blacksburg VA 24060 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: PALLI,Subba,Reddy, KAPITSKAYA,MARIANNA ZINOVJEVNA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01H5/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01H NOVEDADES VEGETALES O PROCEDIMIENTOS PARA SU OBTENCION; REPRODUCCION DE PLANTAS POR TECNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS.Angiospermas,es decir, plantas con flores, caracterizadas por sus partes vegetales; Angiospermas caracterizadas de forma distinta que por su taxonomía botánica.
  • C07K14/705 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
  • C07K14/72 C07K 14/00 […] › para hormonas.
  • C12N15/12 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
  • C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12N15/85 C12N 15/00 […] › para células animales.
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • G01N33/68 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.

PDF original: ES-2390070_T3.pdf

 

Nuevos receptores mutantes de sustitución y su uso en un sistema de expresión génica inducible basado en receptores nucleares.

Fragmento de la descripción:

Nuevos receptores mutantes de sustitución y su uso en un sistema de expresión génica inducible basado en receptores nucleares

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de la biotecnología o la ingeniería genética. Específicamente, la presente invención se refiere al campo de la expresión génica. Más específicamente, la presente invención se refiere a nuevos receptores nucleares que comprenden una mutación por sustitución y su uso en un sistema de expresión génica inducible a base de receptores nucleares, y a procedimientos de modular la expresión de un gen en una célula huésped usando este sistema de expresión génica inducible.

Antecedentes de la invención

En el presente documento se citan varias publicaciones. No obstante, la mención de cualquier referencia en el presente documento no debe interpretarse como admisión de que dicha referencia está disponible como “Técnica anterior” a la presente solicitud.

En el campo de la ingeniería genética, el control preciso de la expresión génica es una valiosa herramienta para estudiar, manipular y controlar el desarrollo y otros procesos fisiológicos. La expresión génica es un proceso biológico complejo que implica una serie de interacciones proteína-proteína específicas. Con el fin de desencadenar la expresión génica de modo que produzca el ARN necesario como primera etapa en la síntesis de proteínas, un activador de la transcripción debe llegar cerca de un promotor que controle la transcripción génica. Normalmente, el propio activador de la transcripción se asocia con una proteína que tiene al menos un dominio de unión a ADN que se une a los sitios de unión del ADN presentes en las regiones promotoras de los genes. Por tanto, para que se produzca expresión génica, una proteína que comprende un dominio de unión a ADN y un dominio de transactivación localizado a una distancia adecuada del dominio de unión a ADN debe colocarse en la posición correcta en la región promotora del gen.

El enfoque transgénico tradicional usa un promotor específico de tipo celular para dirigir la expresión de un transgen diseñado. Primero, una construcción de ADN que contiene el transgen se incorpora en un genoma huésped. Una vez desencadenada por un activador de la transcripción, la expresión del transgen se produce en un tipo de célula dada.

Otro medio para regular la expresión de genes extraños en células es a través de promotores inducibles. Ejemplos del uso de dichos promotores inducibles incluyen el promotor PR1-a, los sistemas represor-operador procarióticas, los sistemas inmunosupresor-inmunofilina y los sistemas de activación de la transcripción de eucariotas superiores, tales como los sistemas de receptores de hormonas esteroides y se describen más adelante.

El promotor PR1-a del tabaco es inducido durante la respuesta de resistencia adquirida sistémica tras un ataque de un patógeno. El uso de PR1-a puede estar limitado porque a menudo responde a materiales endógenos y factores externos, tales como patógenos, radiación UV-B y contaminantes. Se han descrito sistemas de regulación génica basados en promotores inducidos por shock térmico, interferón y metales pesados (Wurn y col., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 5414-5418; Amheiter y col., 1990, Cell 62: 51-61; Filmus y col., 1992 Nucleic Acids Research 20: 27550-27560) . No obstante, estos sistemas tienen limitaciones debido a su efecto sobre la expresión de genes no diana. Estos sistemas también tienen fugas.

Los sistemas de operador-represor procarióticas usan proteínas represoras bacterianas y las secuencias de ADN de operador único a las que se unen. Los sistemas represor-operador de tetraciclina ("Tet") y lactosa ("Lac") de la bacteria Escherichia coli se han usado en plantas y animales para controlar la expresión génica. En el sistema Tet, la tetraciclina se une a la proteína represora TetR, que tiene como resultado un cambio conformacional que libera la proteína represora del operador que, como resultado, permite que se produzca la transcripción. En el sistema Lac, se activa un operón lac en respuesta a la presencia de lactosa o análisis sintéticos tales como isopropilo-b-Dtiogalactósido. Por desgracia, el uso de dichos sistemas está restringido por la química inestable de los ligandos, es decir tetraciclina y lactosa, su toxicidad, su presencia natural o los niveles relativamente altos necesarios para inducción o represión. Por motivos similares, la utilidad de dichos sistemas en animales es limitada. Las moléculas inmunosupresoras, tales como FK506, rapamicina y ciclosporina A, se pueden unir a las inmunoflinas FKBP12, ciclofilina etc. Usando esta información, se ha ideado una estrategia general para juntar dos proteínas cualesquiera simplemente colocando FK506 en cada una de las dos proteínas o colocando FK506 en una y ciclosporina a en otra. Después, se puede usar un homodímero sintético de FK506 (FK1012) o un compuesto resultante de la fusión de FK506-ciclosporina (FKCsA) para inducir la dimerización de estas moléculas (Spencer y col., 1993, Science 262: 1019-24; Belshaw y col., 1996, Proc Natl Acad Sci USA 93: 4604-7) . El dominio de unión a ADN Gal4 condensado con el dominio activador FKBP12 y VP16 condensado con ciclofilina y el compuesto FKCsA se usaron para mostrar la heterodimerización y activación de un gen indicador bajo el control de un promotor que contiene los sitios de unión Gal4. Por desgracia, este sistema incluye inmunosupresores que pueden tener efectos secundarios indeseados y, por tanto, limita su uso para varias aplicaciones de cambio de genes de mamífero.

También se han empleado sistemas de activación de la transcripción de eucariotas superiores, tales como los sistemas del receptor de hormonas esteroides, Los receptores de hormonas esteroides son miembros de la superfamilia de receptores nucleares y se encuentran en células de vertebrados e invertebrados. Por desgracia, el uso de compuestos esteroideos que activan los receptores para la regulación de la expresión génica, en particular en plantas y mamíferos, está limitado por su implicación en muchas otras vías biológicas naturales de dichos organismos. Con el fin de superar dichas dificultades se ha desarrollado un sistema alternativo usando receptores de ecdisona de insectos (EcR) .

El crecimiento, la muda y el desarrollo en insectos están regulados por la hormona esteroide ecdisona (hormona de la muda) y las hormonas juveniles (Dhadialla, et al., 1998, Annu. Rev. Entomol. 43: 545-569) . La diana molecular de la ecdisona en insectos está constituida por al menos un receptor de la ecdisona (EcR) y la proteína ultraespiráculo (USP) . El EcR es un miembro de la superfamilia de los receptores nucleares de esteroides que se caracteriza por dominios de unión a ADN firma y a ligando, y un dominio de activación (Koelle y col. 1991, Cell, 67:59-77) . Los receptores EcR responden a una serie de compuestos esteroideos, como la ponasterona A y la muristerona A. Recientemente se han descrito compuestos no esteroideos con actividad agonista ecdiesteroide, incluidos los insecticidas disponibles comercialmente tebufenozida y metoxifenozida comercializados en todo el mundo por Rohmand Haas Company (véase la solicitud de patente internacional Nº PCT/EP96/00686 y la patente de EE.UU. 5, 530, 028) . Ambos análogos tienen perfiles de seguridad excepcionales para otros organismos.

El receptor de ecdisona de insecto (EcR) heterodimeriza con el ultraespiráculo (USP) , el homólogo en insectos del RXR de mamífero y se une a los ecdiesteroides y a los elementos de respuesta al receptor de ecdisona y activan la transcripción de los genes respondedores a ecdisona (Riddiford y col., 2000) . Los complejos EcR/USP/ligando desempeñan papeles importantes durante el desarrollo del insecto y su reproducción. El EcR es un miembro de la superfamilia de receptores de hormonas esteroides y tiene cinco dominios modulares, dominios A/B (transactivación) , C (unión a ADN, heterodimerización) ) , D (bisagra, heterodimerización) , E (unión al ligando, heterodimerización y transactivación) y F (transactivación) . Algunos de estos dominios, tales como A/B, C y E, conservan su función cuando se fusionan a otras proteínas.

Los sistemas de expresión génica inducible estrechamente regulados o “interruptores génicos” son útiles para varias aplicaciones, tales como terapia génica, producción a gran escala de proteínas en células, ensayos de detección selectiva de alto rendimiento a base de células, genómica funcional y regulación... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un sistema de modulación de expresión de genes que comprende

a) un primer casete de expresión de genes que es capaz de expresarse en una célula huésped que comprende un polinucleótido que codifica un primer polipéptido que comprende:

i) un dominio de transactivación; ii) un dominio de unión al ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión va a modularse; y iii) un domino de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B, en el que el domino de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B se selecciona del grupo que consiste en un receptor X retinoide, una proteína de unión a la región II de H-2 (H-2RIIBP) , un co-regulador-1 de Receptores Nucleares (RCoR-1) , una proteína ultra espiráculo, un receptor nuclear 2C1 y un domino de unión a ligando del factor 1 coriónico (CF-1) , y en el que los restos de aminoácidos que se encuentran en una posición equivalente o análoga a la de los restos de aminoácidos 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 hacen que el sistema de modulación de expresión de genes presente una inducción de plegamiento y una magnitud de inducción mejoradas, en comparación con un sistema de modulación de expresión de genes que contiene el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente y

b) un segundo casete de expresión de genes que es capaz de expresarse en una célula huésped que comprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende un dominio de unión a ligandos de receptores nucleares seleccionado del grupo que consiste en un receptor de ecdisona, un receptor ubicuo, un receptor huérfano 1, un receptor 1 nuclear de hormonas esteroideas, una proteína 15 que interacciona con el receptor X retinoide, un receptor hepático X 1, una proteína similar al receptor de hormonas esteroideas, un receptor hepático X, un receptor hepático X a, un receptor X farnesoide, una proteína 14 que interacciona con receptores y un dominio de unión a ligandos de receptores de farnesol.

2. Un sistema de modulación de expresión de genes que comprende

a) un primer casete de expresión de genes que es capaz de expresarse en una célula huésped que comprende un polinucleótido que codifica un primer polipéptido que comprende:

i) un dominio de unión al ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado a un gen cuya expresión va a modularse; y ii) un dominio de unión a ligandos de receptores nucleares; y

b) un segundo casete de expresión de genes que es capaz de expresarse en la célula huésped que comprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende:

i) un dominio de transactivación; y ii) un domino de unión a ligandos de receptores nucleares, en el que uno de los dominios de unión a ligandos de receptores nucleares es un dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B seleccionado del grupo que consiste en un receptor X retinoide, una proteína de unión a la región II de H-2 (H-2RIIBP) , un co-regulador-1 de Receptores Nucleares (RCoR-1) , una proteína ultra-espiráculo, un receptor nuclear 2C1 y un domino de unión a ligando del factor 1 coriónico (CF-1) y en el que los restos de aminoácidos que se encuentran en una posición equivalente o análoga a la de los restos de aminoácidos 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 hacen que el sistema de modulación de expresión de genes presente una inducción de plegamiento y una magnitud de inducción mejoradas en comparación con un sistema de modulación de expresión de genes que contiene el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente y

3. El sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B es un dominio de unión a ligandos de un receptor X retinoide.

4. El sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el polinucleótido codifica un ácido aspártico en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 481 en la SEC ID Nº: 2, un ácido glutámico en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 482 en la SEC ID Nº: 2 y una prolina en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 483 de la SEC ID Nº: 2.

5. El sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el domino de unión al ADN se selecciona del grupo que consiste en un dominio de unión al ADN del receptor de ecdisona, un dominio de unión al ADN de GAL4 y un dominio de unión al ADN LexA.

6. El sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el dominio de transactivación se selecciona del grupo que consiste en un dominio de transactivación del receptor de ecdisona, un dominio de transactivación de VP16, un domino de transactivación del activador ácido B42 y un dominio de transactivación de p65.

7. Un casete de expresión de genes que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en:

a) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión al ADN y un dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B, b) un polipéptido que comprende un dominio de unión al ADN y un dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B, y c) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B; en el que el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B se selecciona del grupo que consiste en un receptor X retinoide, una proteína de unión a la región II de H-2 (H2RIIBP) , un co-regulador-1 de Receptores Nucleares (RCoR-1) , una proteína ultra-espiráculo, un receptor nuclear 2C1 y un domino de unión al ligando del factor 1 coriónico (CF-1) y en el que los restos de aminoácidos en dicho dominio de unión a receptores nucleares del Grupo B que se encuentran en una posición equivalente o análoga a la de los restos de aminoácidos 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 hacen que el polipéptido presente una inducción de plegamiento y una magnitud de inducción mejoradas en comparación con un polipéptido que contiene el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente.

8. Un polinucleótido aislado que codifica un domino de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B, en el que el polinucleótido aislado codifica los aminoácidos que se encuentran en una posición equivalente o análoga a la de los restos de aminoácidos 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 que dan como resultado una inducción de plegamiento y una magnitud de inducción mejoradas en comparación con el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre de la SEC ID Nº: 2.

9. El polinucleótido aislado de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el polinucleótido aislado codifica un ácido aspártico en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 481 en la SEC ID Nº: 2, un ácido glutámico en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 482 en la SEC ID Nº: 2 y una prolina en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 483 de la SEC ID Nº: 2.

10. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido aislado de la reivindicación 8 o 9 unido operativamente a un elemento regulador de la transcripción.

11. Una célula huésped aislada que comprende el vector de expresión de la reivindicación 10, en la que el elemento regulador de la transcripción es operativo en la célula huésped.

12. Un polipéptido aislado codificado por el polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 8 o 9.

13. Un polipéptido aislado que comprende un domino de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B, en el que los restos de aminoácidos que se encuentran en una posición equivalente o análoga a 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 hacen que el polipéptido presente una inducción de plegamiento y una magnitud de inducción mejoradas en comparación con un polipéptido que contiene el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente.

14. El polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 13, en el que el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B es un dominio de unión a ligandos de un receptor X retinoide.

15. El polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el polipéptido contiene ácido aspártico en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 481 en la SEC ID Nº: 2, ácido glutámico en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 482 en la SEC ID Nº: 2 y prolina en una posición equivalente o análoga a la del resto de aminoácido 483 de la SEC ID Nº: 2.

16. Un procedimiento para modular la expresión de un gen en una célula huésped no animal que comprende las etapas de:

a) introducir en la célula huésped el sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6; y b) introducir un ligando en la célula huésped;

en el que el gen a modular es un componente de un casete de expresión de genes que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión al ADN ii) un promotor que es activado por el dominio de transactivación; y iii) un gen cuya expresión va a modularse; mediante el cual después de la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión del gen de b) iii) .

17. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el ligando es

a) un compuesto de fórmula: en la que:

E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario; R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, CºCH, 1propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN, SCHF2; R2 es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, Cl, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3, OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3, OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN, o está unido a R3 y a los carbonos fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilendioxi, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo; R3 es H, Et, o está unido a R2 y a los carbonos fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilendioxi, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo; R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, Cl, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CN, CºCH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe o SEt;

b) una ecdisona.

2. hidroxiecdisona, ponasterona A o muristerona A; c) un oxisterol, un 22 (R) hidroxicolesterol, 24 (S) hidroxicolesterol.

2. epoxicolesterol, T0901317, 5-alfa-6-alfaepoxicolesterol-3-sulfato, 7-cetocolesterol-3-sulfato, farnesol, un ácido biliar, un éster 1, 1-bifosfonato o una hormona Juvenil III; o d) un ácido 9-cis-retinoico, ácido 4- (1- (3, 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidro-2-naftil) -etenil) benzoico (3-metil-TTEB) , ácido ( (E) -2) 2- (5, 6, 7, 8-tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-pentametil-2-naftil) propen-1-il) -4-tiofenocarboxílico) , 2 (5, 6, 7, 8 tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftil) -2- (carboxifenil) -1, 3-dioxolano, ácido 4- (5H-2, 3- (2, 5-dimetil-2, 5hexano) -5-metil-dibenzo (b, e) ácido (1, 4) diazepin-11-il) -benzoico (HX600) o sus análogos tiadiazepínicos, ácido 3, 7, 11, 15-tetrametil hexadecanoico (ácido fitánico) , ácido 6- (1- (3, 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2il) ciclopropil) nicotínico, 2- (4-carboxifenil) -2- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftalenil) -1, 3-ditiano o ácido 4- (2-metil) -1- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftalenil) propenil) benzoico.

18. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16 o 17, en el que el procedimiento comprende adicionalmente introducir en la célula huésped un segundo ligando, en el que el segundo ligando es el ácido 9-cis retinoico o un análogo sintético de un ácido retinoico.

19. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 o 18, en el que la célula huésped no animal es una célula huésped bacteriana, una célula huésped fúngica o una célula huésped vegetal.

20. Una célula huésped aislada que comprende el sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

21. Un organismo no humano que comprende la célula huésped de la reivindicación 20.

22. El sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que dicho sistema presenta una sensibilidad mejorada a ligandos no esteroideos en comparación con un sistema de modulación de expresión de genes que contiene el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre de la SEC ID Nº:2.

23. El casete de expresión de genes de acuerdo con la reivindicación 7, en el que dicho polipéptido presenta sensibilidad mejorada a ligandos no esteroideos en comparación con un polipéptido que contiene el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente.

24. El polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el polinucleótido aislado codifica aminoácidos que se encuentran en una posición equivalente o análoga a la de los restos de aminoácidos 481, 482 y 483 de la SEC ID Nº: 2 que dan como resultado una sensibilidad mejorada a ligandos no esteroideos en comparación con el dominio de unión a ligandos de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente.

25. El polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 13, en el que dicho polipéptido presenta una sensibilidad mejorada a ligandos no esteroideos en comparación con un polipéptido que contiene el dominio de unión a ligandos

de receptores nucleares del Grupo B de tipo silvestre correspondiente.

26. Un procedimiento de modulación in vitro de la expresión de un gen en una célula huésped que comprende las etapas de:

a) introducir en la célula huésped el sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con una

cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y

b) introducir un ligando en la célula huésped;

en el que el gen a modular es un componente de un casete de expresión de genes que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión al ADN; ii) un promotor que es activado por el dominio de transactivación; y 10 iii) un gen cuya expresión va a modularse; mediante el cual después de la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión del gen de b) iii) .

27. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26, en el que el ligando es a) un compuesto de fórmula:

en la que:

E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario; R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C CH, 1propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN, SCHF2;

R2 es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, Cl, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3, OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3, OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN, o está unido a R3 y a los carbonos fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilendioxi, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo o un anillo dihidropirilo con el

oxígeno adyacente a un carbono fenilo; R3 es H, Et, o está unido a R2 y a los carbonos fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilendioxi, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo; R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, Cl, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH,

CN, C CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe, o SEt;

b) una ecdisona.

2. hidroxiecdisona, ponasterona A o muristerona A; c) un oxisterol, un 22 (R) hidroxicolesterol, 24 (S) hidroxicolesterol.

2. epoxicolesterol, T0901317, 5-alfa-6-alfaepoxicolesterol-3-sulfato, 7-cetocolesterol-3-sulfato, farnesol, un ácido biliar, un éster 1, 1-bifosfonato o una hormona Juvenil III; o

d) un ácido 9-cis-retinoico, ácido 4- (1- (3, 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidro-2-naftil) -etenil) benzoico (3-metil-TTEB) , ácido ( (E) -2) 2- (5, 6, 7, 8-tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-pentametil-2-naftil) propen-1-il) -4-tiofenocarboxílico) , 2 (5, 6, 7, 8 tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftil) -2- (carboxifenil) -1, 3-dioxolano, ácido 4- (5H-2, 3- (2, 5-dimetil-2, 5hexano) -5-metil-dibenzo (b, e) ácido (1, 4) diazepin-11-il) -benzoico (HX600) o sus análogos tiadiazepínicos, ácido 3, 7, 11, 15-tetrametil hexadecanoico (ácido fitánico) , ácido 6- (1- (3, 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2

il) ciclopropil) nicotínico, 2- (4-carboxifenil) -2- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftalenil) -1, 3-ditiano o ácido 4- (2-metil) -1- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftalenil) propenil) benzoico.

28. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 26 o 27, en el que el procedimiento comprende adicionalmente introducir en la célula huésped un segundo ligando, en el que el segundo ligando es el ácido 9-cis retinoico o un análogo sintético de un ácido retinoico.

45 29. Un sistema de expresión de genes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 junto con un ligando para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno; en el que el gen a modular es un componente de un casete de expresión de genes que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión al ADN; ii) un promotor que es activado por el dominio de transactivación; y iii) un gen cuya expresión va a modularse; mediante el cual después del contacto con el ligando, se modula la expresión del gen de iii) .

30. Uso del sistema de modulación de expresión de genes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y de un ligando en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno; en el que el gen a modular es un componente de un casete de expresión de genes que comprende:

i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión al ADN;

ii) un promotor que es activado por el dominio de transactivación; y iii) un gen cuya expresión va a modularse; mediante el cual después del contacto con el ligando, se modula la expresión del gen de iii) .

31. El sistema de expresión de genes junto con el ligando para su uso de acuerdo con la reivindicación 29, o el uso de acuerdo con la reivindicación 30 en el que el ligando es

en la que: E es un alquilo (C4-C6) que contiene un carbono terciario o un cianoalquilo (C3-C5) que contiene un carbono terciario;

R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C=CH, 1propinilo, 2-propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN, SCHF2; R2 es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formilo CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, Ac, F, Cl, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, OAc, NMe2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3, OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3, OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2,

SOMe, NH-CN, o está unido a R3 y a los carbonos fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilendioxi, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo o un anillo dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo; R3 es H, Et, o está unido a R2 y a los carbonos fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilendioxi, un anillo dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono fenilo o un anillo dihidropirilo con el

oxígeno adyacente a un carbono fenilo; R4, R5 y R6 son independientemente H, Me, Et, F, Cl, Br, formilo, CF3, CHF2, CHCl2, CH2F, CH2Cl, CH2OH, CN, C CH, 1-propinilo, 2-propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe, o SEt;

b) una ecdisona.

2. hidroxiecdisona, ponasterona A o muristerona A; c) un oxisterol, un 22 (R) hidroxicolesterol, 24 (S) hidroxicolesterol.

2. epoxicolesterol, T0901317, 5-alfa-6-alfa

epoxicolesterol-3-sulfato, 7-cetocolesterol-3-sulfato, farnesol, un ácido biliar, un éster 1, 1-bifosfonato o una hormona Juvenil III; o d) un ácido 9-cis-retinoico, ácido 4- (1- (3, 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidro-2-naftil) -etenil) benzoico (3-metil-TTEB) , ácido ( (E) -2) 2- (5, 6, 7, 8-tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-pentametil-2-naftil) propen-1-il) -4-tiofenocarboxílico) , 2 (5, 6, 7, 8 tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftil) -2- (carboxifenil) -1, 3-dioxolano, ácido 4- (5H-2, 3- (2, 5-dimetil-2, 5

hexano) -5-metil-dibenzo (b, e) ácido (1, 4) diazepin-11-il) -benzoico (HX600) o sus análogos tiadiazepínicos, ácido 3, 7, 11, 15-tetrametil hexadecanoico (ácido fitánico) , ácido 6- (1- (3, 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2il) ciclopropil) nicotínico, 2- (4-carboxifenil) -2- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftalenil) -1, 3-ditiano o ácido 4- (2-metil) -1- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5, 5, 8, 8-tetrametil-2-naftalenil) propenil) benzoico.

Comparación de RXR, LmUSP, Quimera, RXRmutE265D, RXRmutG293S con CfEcRCDEF en células 3T3; respuesta GSE

Comparación de respuestas de RXR-E, mutantes sencillos y dobles frente a GSE en células 3T3

Figura 2 Figura 3

Figura 4


 

Patentes similares o relacionadas:

Imagen de 'CD52 soluble para su uso en el tratamiento o la prevención de…'CD52 soluble para su uso en el tratamiento o la prevención de la esclerosis múltiple o de la artritis reumatoide, del 29 de Julio de 2020, de THE WALTER AND ELIZA HALL INSTITUTE OF MEDICAL RESEARCH: Uno cualquiera o más de: i) glucoproteína CD52 soluble, ii) una proteína de fusión que comprende la glucoproteína CD52 soluble como una primera proteína, y una segunda proteína; […]

Anticuerpo biespecífico o mezcla de anticuerpos con cadenas ligeras comunes, del 15 de Julio de 2020, de Jiangsu Alphamab Biopharmaceuticals Co., Ltd: Anticuerpo biespecífico o parte de unión a antígeno del mismo, en el que el anticuerpo biespecífico o la parte de unión a antígeno del mismo tiene una cadena […]

Imagen de 'Proteínas de dominio de fibronectina tipo III con solubilidad…'Proteínas de dominio de fibronectina tipo III con solubilidad mejorada, del 24 de Junio de 2020, de BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY: Un polipéptido que comprende restos de armazones a base de fibronectina que comprenden un 10º dominio de fibronectina tipo III (10Fn3) modificado, […]

PÉPTIDO DE MITICINA Y SU USO EN REGENERACIÓN CELULAR, del 4 de Junio de 2020, de CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS: La presente invención se refiere a unos péptidos derivados de la micitina C y sus usos terapéuticos, más concretamente en la regeneración celular y/o […]

Péptido de miticina y su uso en regeneración celular, del 28 de Mayo de 2020, de CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS: Péptido de miticina y su uso en regeneración celular. La presente invención se refiere a unos péptidos derivados de la micitina C y sus usos terapéuticos, más concretamente […]

Moléculas de unión de alta avidez que reconocen MAGE-A1, del 8 de Abril de 2020, de Max Delbrück Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Berlin-Buch: Una construcción de reconocimiento de antígenos que es un receptor de células T (TCR), que comprende (i) una región variable de la cadena alfa […]

Moléculas de unión a ligando y usos de las mismas, del 25 de Diciembre de 2019, de Vegenics Pty Limited: Una molécula de unión a ligando que comprende un polipéptido de unión a ligando fusionado a un fragmento de dominio constante de inmunoglobulina, comprendiendo […]

Tratamiento de las enfermedades relacionadas con la apolipoproteína a1 por inhibición del transcrito antisentido natural a la apolipoproteína a1, del 17 de Octubre de 2019, de CuRNA, Inc: Un oligonucleótido que se dirige a un transcrito antisentido natural de apolipoproteína A1 para su uso como un compuesto terapéutico, donde el oligonucleótido […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .