Un compuesto de la fórmula (1): **Fórmula** en la que X es un resto de tirosina o un resto de metionina;

cada uno de Y y Z se selecciona independientemente entre un enlace sencillo y un grupo peptídico divalente que consiste en 1-10 restos de aminoácido, R1 es hidrógeno o alquilo, R2 es hidroxilo, amino, alquilamino o dialquilamino, R3 es hidrógeno, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino o alquilcarbonilamino sustituido o sin sustituir, R4 es hidrógeno, alquilo, carboxi, carbamoílo, alquilcarbamoílo, dialquilcarbamoílo o un grupo de la fórmula (2): **Fórmula** en la que W es un resto de aminoácido, m es 1 ó 2, y n es un número entero de 0-2, con la condición de que cuando n sea 0, R3 sea hidrógeno o alquilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a una terapia con vacunas contra el cáncer, especialmente a un nuevo compuesto peptídico útil como un medicamento para la inmunoterapia contra el cáncer. En particular, la presente invención se refiere a un péptido antigénico del cáncer derivado de WP1, que tiene una actividad inductora de CTL in vivo y es útil como vacuna contra el cáncer. Antecedentes de la técnica

La inmunidad celular, particularmente una célula T citótóxica (en lo sucesivo, denominada "CTL") desempeña un papel significativo en el rechazo in vivo de células cancerosas o células infectadas por virus. Las CTL reconocen un complejo entre un péptido antigénico ("péptido antigénico del cáncer") derivado de una proteína antigénica del cáncer y un antígeno de MHC (complejo mayor de histocompatibilidad) de clase I, que se denomina "antígeno HLA" en el caso de un ser humano, en una célula cancerosa y ataca y mata a la célula.

Se sabe generalmente que un péptido antigénico del cáncer que se une a moléculas de MHC de clase I es un péptido que tiene restos de 8-12 aminoácidos producidos por procesamiento intracelular de la proteína. Por tanto, en general, un péptido que tiene restos de 8-12 aminoácidos derivados de una proteína antigénica del cáncer puede ser un candidato para un péptido antigénico del cáncer. Cuando un resto de glutamina o un resto de cisteína están presentes en el péptido antigénico del cáncer, en general los restos de aminoácidos se oxidan espontáneamente en aire atmosférico. Se ha notificado que la oxidación espontánea disminuye la afinidad de unión del péptido para la molécula de MHC de clase I y la respuesta cognitiva al péptido por el receptor de células T (véase bibliografía no relacionada con patentes 1 y 2).

Se ha aislado el gen supresor de tumores WT1 del tumor de Wilms (gen WT1) del cromosoma 11p 13 como uno de los genes causantes del tumor de Wilms basándose en el análisis del síndrome de WAGR que se produce como una complicación del tumor de Wilms, aniridia, anomalías urogenitales, retraso mental y así sucesivamente, y se conoce públicamente la secuencia de aminoácidos de WT1 (véase bibliografía no relacionada con patentes 3). El gen WT1 se expresa con gran frecuencia en la leucemia humana y cuando las células leucémicas se tratan con oligómeros antisentido de WT1, se inhibe el crecimiento celular. Por tanto, se cree que el gen WT1 actúa para promover el crecimiento de las células leucémicas. Además, el gen WT1 también se expresa mucho en cánceres sólidos tales como cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer embrionario, cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer uterino, cáncer de ovario y cáncer de cuello uterino y se ha demostrado que el gen WT1 es una nueva proteína antigénica del cáncer en la leucemia y los cánceres sólidos (véase bibliografía no relacionada con patentes 4 y 5). Además, se identificó un péptido antigénico del cáncer que tiene una secuencia parcial de proteína de WT1 que es un péptido antigénico del cáncer de tipo silvestre (véase bibliografía de patentes 1 y 2).

Particularmente, WT1235-243 (Cys-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu; SEC ID Nº: 1), que es un péptido que ocupa las posiciones de 235 a 243 de la proteína antigénica del cáncer WT1, es un péptido antigénico del cáncer que tiene una actividad para inducir las CTL de un modo restringido por HLA-A24 (véanse bibliografía no relacionada con patentes 6 y bibliografía de patentes 1). El péptido modificado (Cys-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu; SEC ID Nº: 2, en lo sucesivo se puede denominar WT1235-243 (2M→Y)), en el que el resto de metionina en la posición 2 de WT1235-243 se sustituye con un resto de tirosina, tiene una afinidad de unión mayor para el antígeno HLA–A24 que el péptido de tipo silvestre (véase bibliografía de patentes 3). El desarrollo de tanto el péptido de tipo silvestre WT1235-243 como el péptido modificado WT1235-243 (2M→Y) como un agente inmunoterapéutico es prometedor.

Además, se conoce que cada uno de dicho péptido de tipo silvestre y dicho péptido modificado tiene un resto de cisteína en el sitio N terminal, cuya oxidación en aire atmosférico produce dímeros unidos por medio de enlaces disulfuro y dicho dímero puede también funcionar como un péptido antigénico del cáncer (véase bibliografía de patentes 4).

Literatura de patentes 1: WO 00/06602

Literatura de patentes 2: WO 00118795

Literatura de patentes 3: WO 02/079253

Literatura de patentes 4: WO 2004/063217 Literatura no relacionada con patentes 1: Immunity., 6:273, 1997

Literatura no relacionada con patentes 2: J. Inmunol., 160:2099, 1998

Literatura no relacionada con patentes 3: Cell, 60:509, 1990

Literatura no relacionada con patentes 4: J. Inmunol., 164: 1873-80,

2000

Literatura no relacionada con patentes 5: J. Clin, Immunol., 20, 195-202,

2000

Literatura no relacionada con patentes 6: Clin. Res. 8: 2626, 2002 Descripción de la intención Un problema solucionado por la invención

Un problema a solucionar por la presente invención es proporcionar un nuevo compuesto peptídico que tiene una actividad inductora de CTL in vivo y es útil como una vacuna contra el cáncer en la inmunoterapia contra el cáncer. Un medio para solucionar el problema

Los inventores realizaron formalmente varios estudios sobre las modificaciones de los péptidos antigénicos del cáncer WT1 235-243 y WT1 235-243 (2M→Y) derivados de la proteína WT1 para producir un péptido antigénico del cáncer que tiene propiedades fisicoquímicas, estabilidad y bioactividad mejoradas. En particular, se prepararon los compuestos modificados a partir de estos péptidos y examinaron la inmunogenicidad usando ratones transgénicos HLA-A2402/Kb (véase el documento WO 02/47474, en lo sucesivo también se pueden denominar ratones HLA-A24).

Consecuentemente, se consiguió la preparación de un compuesto peptídico que tiene estabilidad y propiedades fisicoquímicas mejoradas por medio de la modificación de restos de cisteína (Cys) en el sitio N terminal de WT1235-243 y WT1235-243 (2M→Y), especialmente modificando el grupo Tiol del resto de cisteína en el sitio N terminal. El compuesto peptídico de la presente invención tiene una inmunogenicidad y una actividad inductora de CTL mejoradas. Las células T específicamente inducidas por el presente compuesto peptídico son útiles como un medicamento para la inmunoterapia contra el cáncer debido a su reacción cruzada con péptido de tipo silvestre WT1235-243 que lo presentan originalmente células cancerosas.

Hasta ahora, no se sabía que el compuesto peptídico en el que se modifica el resto de cisteína de WT1235-243 o WT1235-243 (2M→Y) como el péptido antigénico de WT1 mostrara la inmunogenicidad suficiente para funcionar como un antígeno del cáncer. Los presentes inventores primero descubrieron que un derivado peptídico preparado por la condensación de los grupos tiol del resto de cisteína en el N terminal con el grupo tiol de la cisteína, glutatión o ácido tioglicólico para formar un enlace disulfuro, se puede usar

5 como un antígeno del cáncer eficaz. La presente invención se llevo a cabo basándose en los hallazgos como describe anteriormente. La presente invención se refiere a las realizaciones como se caracteriza en las reivindicaciones. Por ejemplo a 10

**(Ver fórmula)**

en la que X es un resto de tirosina o un resto de metionina; cada uno de Y y Z se selecciona independientemente entre un enlace sencillo y un grupo peptídico divalente que consiste en 1-10 restos de aminoácido, R1 es hidrógeno o alquilo, R2 es hidroxilo, amino, alquilamino o dialquilamino, R3 es hidrógeno, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino o alquilcarbonilamino sustituido o sin sustituir, R4 es hidrógeno, alquilo, carboxilo, carbamoílo, alquilcarbamoílo, dialquilcarbamoílo o un grupo de la fórmula (2):

**(Ver fórmula)**

en la que W es un resto aminoácido, m es 1 ó 2, y n es un número entero de 0-2, con la condición de que cuando n sea 0,

R3 sea hidrógeno o alquilo,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

[2] el compuesto de acuerdo con el apartado [1]...

1. Un compuesto de la fórmula (1):

**(Ver fórmula)**

5 en la que X es un resto de tirosina o un resto de metionina; cada uno de Y y Z se selecciona independientemente entre un enlace sencillo y un grupo peptídico divalente que consiste en 1-10 restos de aminoácido, R1 es hidrógeno o alquilo, R2 es hidroxilo, amino, alquilamino o dialquilamino, R3 es hidrógeno, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino o alquilcarbonilamino sustituido o sin sustituir, R4 es hidrógeno, alquilo, carboxi, carbamoílo, alquilcarbamoílo, dialquilcarbamoílo o un grupo de la fórmula (2):

**(Ver fórmula)**

15 en la que W es un resto de aminoácido, m es 1 ó 2, y n es un número entero de 0-2, con la condición de que cuando n sea 0, R3 sea hidrógeno o alquilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que dicho alquilcarbonilamino sustituido representado por R3 es alquilcarbonilamino sustituido con uno o dos grupos de sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en carboxi, amino, alquilamino y dialquilamino.

3. El compuesto de la reivindicación 1 ó 2, o una sal farmacéuticamente

aceptable de los mismos, en el que R3 es hidrógeno o un grupo de la fórmula (3):

**(Ver fórmula)**

en la que r es un número entero de 1-3, y R4 es carboxi o un grupo de la fórmula (2'):

**(Ver fórmula)**

en la que W es un resto de glicina o un resto de β-alanina.

4. El compuesto de la reivindicación 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 es un grupo de la fórmula (3'):

**(Ver fórmula)**

y R4 es carboximetilcarbamoilo.

5. El compuesto de la reivindicación 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 es hidrógeno y R4 es carboxi.

6. Un compuesto de la fórmula (1'):

**(Ver fórmula)**

en la que X' es un resto de tirosina o un resto de metionina, R1' es hidrógeno o alquilo, R2' es hidroxilo, amino, alquilamino o dialquilamino,

5 R3' es amino, alquilamino, dialquilamino o alquilcarbonilamino sustituido

o sin sustituir, y R4' es carboxi, carbamoílo, alquilcarbamoílo o dialquilcarbamoílo,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10 7. Un compuesto de la fórmula (4):

**(Ver fórmula)**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. Un compuesto de la fórmula (5):

**(Ver fórmula)**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. Un anticuerpo que se une específicamente al compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. Una célula presentadora de antígenos en la que se presenta un complejo entre el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un antígeno HLA-A24.

11. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de las reivindicaciones 1-8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la célula presentadora de antígenos de la reivindicación 10, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, que se usa como una vacuna contra el cáncer.

13. Uso de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la célula presentadora de antígenos de la reivindicación 10 para preparar una vacuna contra el cáncer.

14. Un medicamento para la inmunoterapia contra el cáncer que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la célula presentadora de antígenos de la reivindicación 10 como un ingrediente activo.

15. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o la célula presentadora de antígenos de la reivindicación 10 para su uso en el tratamiento o prevención de un cáncer en un paciente que es positivo para HLA-A24 y positivo para WT1 que necesita el tratamiento o prevención del cáncer.