Moléculas hipoalergénicas.

Molécula hipoalergénica que consiste en Bet v 1a o un alérgeno que tiene al menos el 60% de identidad con Bet v 1a que comprende mutaciones de al menos un residuo de aminoácido en la región de los aminoácidos 100 a 125 de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 60% de identidad con Bet v 1a

, en la que la mutación de al menos un residuo de aminoácido comprende la mutación del residuo de aminoácido en la posición 114 de Bet v 1a o su residuo de aminoácido correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 60% de identidad con Bet v 1a.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2008/005324.

Solicitante: BIOMAY AG.

Nacionalidad solicitante: Austria.

Dirección: LAZARETTGASSE 19 TOP 1 1090 WIEN AUSTRIA.

Inventor/es: FERREIRA, FATIMA, HIMLY, MARTIN, WALLNER,MICHAEL, BOHLE,BARBARA, HAUSER,MICHAEL, WOPFNER,NICOLE, GADERMAIER,GABRIELE, EGGER,MATTHIAS, LACKNER,PETER.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/29 (Genes que codifican proteínas vegetales, p. ej. taumatina)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/415 (de vegetales)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/36 (del polen)

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Fragmento de la descripción:

Moléculas hipoalergénicas

La presente invención se refiere a moléculas hipoalergénicas.

En todo el mundo, 1-2 millones de personas padecen alergias al polen y de entre estos pacientes aproximadamente un tercio muestran reacciones alérgicas frente al polen de los árboles. En la zona de clima templado Bet v 1, el principal alérgeno del polen de abedul, representa la mayoría de los casos de polinosis a árboles. Adicionalmente, entre el 5 y el 93% de los individuos alérgicos al polen de abedul desarrollan reacciones de hipersensibilidad frente a alimentos relacionados con polen mediadas por anticuerpos IgE con reactividad cruzada dirigidos principalmente contra Bet v 1. Este tipo de hipersensibilidad se describe como síndrome de polen- alimentos (PFS). De ese modo, el contacto de alérgenos con la mucosa oral provoca reacciones adversas inmediatas habitualmente limitadas a la cavidad oral y la faringe. En el caso de alergia al polen de abedul, uno de los alérgenos más frecuentemente implicados con PFS es Mal d 1, el principal alérgeno de la manzana. Mal d 1 comparte el 64% de identidad de secuencia de aminoácidos con Bet v 1 y experimentos de inhibición cruzada demostraron la presencia de epítopos de IgE comunes en ambas moléculas.

En Ferreira F et al. (FASEB (1998) 12:231 -242) se describe la modulación de la reactividad frente a IgE de Bet v 1 a mediante introducción de mutaciones puntuales en Bet v 1a de tipo natural. Los autores introdujeron mutaciones en las posiciones 1, 3, 57, 112, 113 y/o 125 de Bet v 1a. Las moléculas de Bet v 1a que tienen mutaciones en estas posiciones no conducen a una pérdida completa de la estructura tridimensional y por tanto a una eliminación de la reactividad frente a IgE. Las mutaciones en estas posiciones condujeron a una disminución de la reactividad frente a IgE para algunos pacientes, pero no para todos, reflejando la naturaleza policlonal de las respuestas de IgE en individuos predispuestos. Por tanto, tales mutaciones no pudieron usarse como enfoque para generar moléculas terapéuticas para la población en general.

En Wallner et al. (Allergy Clin. Immunol., 12(2) (27):379-38) se dan a conocer proteínas quiméricas que presentan una baja reactividad frente a IgE y una alta reactividad frente a células T que se han seleccionado de una biblioteca que comprende alérgenos sometidos a intercambio de Bet v 1 y alérgenos homólogos a Bet v 1.

En Larsen et al. (Allergy Clin. Immunol., 19(1) (22):164) se comenta la reactividad cruzada entre Bet v 1 y Mal d 1.

Wallner et al. (Allergy Clin. Immunol., 19(1) (22):169) se refiere a la evolución in vitro de la familia de Bet v 1 usando métodos de intercambio génico.

En Bolhaar STHP et ai (Clin. Exp. Allergy. 35(12) (25):1638-1644) se da a conocer una variante hipoalergénica de Mal d 1 que comprende 5 mutaciones puntuales.

En el documento WO 27/7397 se dan a conocer variantes hipoalergénicas de Bet v 1. Estas variantes se obtienen mediante mutación de aminoácidos individuales dentro de la molécula de Bet v 1 de tipo natural.

Son DY et al (Eur J Nutrition 38(1999): 21-215) describen mutantes de Mal d 1 y Bet v 1. Los autores de dicho estudio encontraron que una mutación específica de residuos de aminoácido conduce a una reducción de la alergenicidad de los alérgenos respectivos.

Un objeto de la presente invención es proporcionar una molécula hipoalergénica que no muestre ninguna reactividad frente a IgE, o muestre una reactividad frente a IgE significativamente reducida, en comparación con el alérgeno de tipo natural que puede usarse para tratar el síndrome de polen-alimentos provocado por alérgenos con reactividad cruzada con Bet v 1a.

Por tanto, la presente invención se refiere aúna molécula hipoalergénica que consiste en Bet v 1 a o un alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a que comprende mutaciones de al menos un residuo de aminoácido en la región de los aminoácidos 1 a 125 de Bet v 1a de su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a, en la que la mutación de al menos un residuo de aminoácido comprende la mutación del residuo de aminoácido en la posición 114 de Bet v 1a o el alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Betv 1a.

Se encontró sorprendentemente que la mutación de al menos el residuo de aminoácido 114 ya puede conducir a una molécula hipoalergénica que tiene una estructura tridimensional que es diferente del alérgeno de tipo natural correspondiente. La mutación del aminoácido 114 de Bet v 1a o un alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a conducirá a una molécula hipoalergénica. Según una realización preferida de la presente invención esta molécula hipoalergénica comprenderá al menos una (preferiblemente al menos dos, tres, cuatro, cinco) mutación adicional dentro de los aminoácidos 1 a 125 de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a. Se prefiere particularmente la molécula hipoalergénica que

comprende una mutación en el residuo de aminoácido 12 y/o 12 de Bet v 1 a.

En una realización particular preferida de la presente invención el residuo de aminoácido 114 de Bet v 1a o un alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a se sustituye por Usina (K), ácido aspártico (D) o ácido glutámico (E). La mutación de al menos cuatro residuos amino en la región de los aminoácidos 1 a 125 de Bet v 1a o un alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a (preferiblemente que tiene una identidad de al menos el 65%, 7%, 75% o el 8%) da como resultado una molécula hipoalergénica que muestra una reactividad frente a IgE sustancialmente reducida o incluso completamente eliminada debido a la pérdida de su estructura tridimensional. La reactividad frente a IgE en el alérgeno mutado es reducida, en comparación con el alérgeno de tipo natural correspondiente. En ensayos biológicos basados en anticuerpos (IgE) (por ejemplo ELISA de inhibición o RAST, liberación de mediador inflamatorio de basófilos), se requieren concentraciones al menos 5, preferiblemente al menos 1, más preferiblemente al menos 5, incluso más preferiblemente al menos 1 veces superiores del alérgeno mutado para alcanzar la mitad de los valores máximos obtenidos con el alérgeno de tipo natural. Esto es sorprendente, a la luz de Ferreira F et al. (FASEB (1998) 12:231-242), porque en el mismo se mostró que la mutación de tres residuos de aminoácido en esta región no daba como resultado una molécula hipoalergénica con las propiedades de la molécula de la presente invención.

Las propiedades hipoalergénicas de las moléculas hipoalergénicas de la presente invención son una consecuencia de la destrucción de la estructura tridimensional en comparación con el alérgeno de tipo natural. Akdis et al. (Akdis CA et al. Eur J Immunol. 28(3) (1998):914-25) han demostrado que un alérgeno plegado nativo, en este caso alérgeno de veneno de abeja fosfolipasa A (PLA),inducía una respuesta inmunitaria diferente que la versión plegada no nativa de la misma proteína. La PLA plegada inducía anticuerpos IgE en células B y estimulaba células T cooperadoras (TH) 2, ambos marcadores de una respuesta inmunitaria alérgica, mientras que la PLA no replegada o reducida y alquilada inducía un perfil de citocinas dominado por TH1 conduciendo a una respuesta de lgG4 en células B. Se favorece claramente una respuesta inmunitaria impulsada por TH1 para moléculas que deben usarse como agentes terapéuticos para enfermedades alérgicas. Por tanto, la naturaleza no plegada de las moléculas de la presente invención es crucial.

En particular se prefiere mutar, junto a otros tres residuos de aminoácido, al menos el residuo... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Molécula hipoalergénica que consiste en Bet v 1 a o un alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a que comprende mutaciones de al menos un residuo de aminoácido en la región de los aminoácidos 1 a 125 de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a, en la que la mutación de al menos un residuo de aminoácido comprende la mutación del residuo de aminoácido en la posición 114 de Bet v 1a o su residuo de aminoácido correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a.

2. Molécula según la reivindicación 1, caracterizada porque el alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a tiene reactividad cruzada inmunológica con Bet v 1 a.

3. Molécula según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a se selecciona del grupo que consiste en Cas s 1 (AJ41755), Mal d 1, Mal d 1.32 (AY2698), Mal d 1.34 (AY186248), Mal d 1.31 (Z72425), Mal d 1.42 (Z72427), Mal d 1.43 (Z72428), Mal d 1.41 (Z72426), Pru ar 1, Pru ar 1.11 (U93165), Cor a 1, Cor a 1.41 (AF136945), Cor a 1.44 (AF323975), Cor a 1.42 (AF323973), Cor a 1.43 (AF323974), Cor a 1.31 1 (Z7244), Cor a 1.21 (Z72439), Cor a 1/5 (X7999), Cor a 1/11 (X7997), Cor a 1/6 (X71), Cor a 1/16 (X7998), Bet v 1d (X77266), Bet v 11 (X77273), Bet v 1 a1-6 (Ferreira F et al. FASEB (1998) 12:231-242), Bet v 1g (X77269), Bet v 1f (X77268), Bet v 1j (X77271), Bet v 1e (X77267), Bet v 1b (X772), Bet v 1c (X77265), Bet v 1.11 (X15877), Bet v 1.91 (X77272), Bet v 1.111 (X77599), Bet v 1.121 (X776), Bet v 1.131 (X7761), Bet v 1.141 (X81972), Bet v 1.151 (Z72429), Bet v 1.161 (Z72437), Bet v 1.171 (Z7243), Bet v 1.181 (Z72431), Bet v 1.191 (Z72433), Bet v 1.21 (Z72434), Bet v 1.211 (Z72435), Bet v 1.221 (Z72438), Bet v 1.231 (Z72436), Bet v 1.241 (Z81), Bet v 1.251 (Z811), Bet v 1.261 (Z812), Bet v 1.271 (Z813), Bet v 1.291 (Z815), Bet v 1.31 (Z816), Aln g 1 (S5892), Car b 1, Car b 1.31 (Z8169), Car b 1.32 (Z817), Car b 1.13 (Z8159), Car b 1.15 (Z8161), Car b 1.14 (Z816), Car b 1/1 a, Car b 1.11 (X66932), Car b 1.12 (X66918), Car b 1/1 b, Car b 1/2, Car b 1.16a (Z8162), Car b 1.16b (Z8163), Car b 1.16c (Z8164), Car b 1.16d (Z8165), Car b 1.17a (Z8166), Car b 1.17b (Z8167), Car b 1.21 (X66933), Car b 1.18 (Z8168), Bet p 1 a (AB4654), Bet p 1 b (AB46541), Bet p 1c (AB46542), Fag s 1 (AJ13889).

4. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque la al menos una mutación del al menos un residuo de aminoácido es una sustitución, deleción o adición de aminoácido.

5. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la región mutada de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a comprende los aminoácidos 15 a 12 de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a.

6. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la región mutada de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a comprende los aminoácidos 18 a 118 de Bet v 1 a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a.

7. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la región mutada de Bet v 1a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1a comprende los aminoácidos 19 a 116 de Bet v 1 a o su región correspondiente del alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a.

8. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque la al menos una mutación comprende la sustitución de dicha región por la región correspondiente de otro alérgeno seleccionado del grupo que consiste en Bet v 1 a y un alérgeno que tiene al menos el 6% de identidad con Bet v 1 a.

9. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque la molécula consiste en Bet v 1 y la región de los aminoácidos 19 a 116 de Bet v 1 se sustituye por la región correspondiente de Mal d 1.

1. Molécula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque la molécula consiste en Mal d 1 y la región de los aminoácidos 19 a 116 de Mal d 1 se sustituye por la región correspondiente de Bet v 1.

11. Molécula de ácido nucleico que codifica para una molécula hipoalergénica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1.

12. Vector que comprende una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 11.

13. Preparación de vacuna que comprende una molécula hipoalergénica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1.

14. Preparación según la reivindicación 13, caracterizada porque comprende además al menos un excipiente, diluyente, adyuvante y/o portador farmacéuticamente aceptable.

15. Uso de una molécula hipoalergénica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 para la fabricación de 5 una vacuna para la prevención y/o el tratamiento de alergias.