MODULACION ANTISENTIDO DE LA EXPRESION DE SURVIVINA.

Un oligonucleótido antisentido con una longitud de hasta 30 nucleótidos dirigido a una molécula de ácido nucleico que codifica la survivina humana,

que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:10, 12, 15, 16, 18, 20, 21, 23, 28, 31, 32, 34, 38, 39, 40, 41, 42, 43 y 47, o su sal farmacéuticamente aceptable

Modulación antisentido de la expresión de survivina.

Campo de la invención

La presente invención proporciona composiciones y procedimientos para modular la expresión de la survivina. En particular, esta invención se refiere a compuestos antisentido, en particular oligonucleótidos, que se hibridan de forma específica con ácidos nucleicos que codifican la survivina humana. Estos oligonucleótidos han demostrado modular la expresión de la survivina.

Antecedentes de la invención

Una característica común de las células cancerosas es la proliferación incontrolada. Entre las diferencias que se han descubierto entre las células tumorales y las células normales está la resistencia al proceso de la muerte celular programada, también denominado apoptosis (Ambrosini et al., Nat. Med., 1997, 3, 917-921). La apoptosis es un proceso que ha evolucionado en organismos multicelulares para evitar la proliferación celular descontrolada, así como para eliminar células que se han vuelto enfermas, defectuosas o que ya no son necesarias. El proceso de la apoptosis implica una cascada de múltiples etapas en que las células se degradan desde el interior a través de la acción concertada de enzimas proteolíticas y ADN endonucleasas, dando como resultado la formación de cuerpos apoptóticos que entonces son eliminados por células captadoras. Hasta la fecha, las investigaciones han demostrado que la mayor parte de la degradación intracelular se realiza a través de la acción de las caspasas, una familia de enzimas proteolíticas que producen una ruptura adyacente a los restos aspartato (Cohen, Biochemistry Journal, 1997, 326, 1-16).

El descubrimiento de que la mayoría de las células tumorales muestran resistencia al proceso apoptótico ha conducido a la opinión de que las estrategias terapéuticas dirigidas a atenuar la resistencia de las células tumorales a la apoptosis podrían representar un medio nuevo para detener la diseminación de células neoplásicas (Ambrosini et al., Nat. Med., 1997, 3, 917-921). Uno de los mecanismos a través del cual se cree que las células tumorales adquieren resistencia a la apoptosis es mediante la sobreexpresión de survivina, un miembro de la familia de inhibidores de caspasa IAP ("inhibitor of apoptosis", inhibidor de la apoptosis) descrito recientemente. Hasta la fecha se ha detectado sobreexpresión de survivina en tumores de pulmón, colon, páncreas, próstata, mama, estómago, linfoma no de Hodgkin, y neuroblastoma (Adida et al., Lancet, 1998, 351, 882-883; Ambrosini et al., Nat. Med., 1997, 3, 917-921; Lu et al., Cancer Res., 1998, 58, 1808-1812). Se ha realizado un análisis más detallada en el neuroblastoma, en el que se ha descubierto que la sobreexpresión de survivina segrega con histologías tumorales conocidas por estar asociadas a una mala prognosis (Adida et al., Lancet, 1998, 351, 882-883). Por último, Ambrosini et al. describen la transfección de células HeLa con un vector de expresión que contenía un fragmento de 708 nt del ADNc humano que codifica el receptor-1 de proteasas de células efectoras (EPR-1), cuya secuencia codificadora es en gran medida complementaria con la hebra codificadora de la survivina (Ambrosini et al., J. Bio. Chem., 1998, 273, 11177-11182) y que actúa potencialmente como ARN antisentido de la survivina. Este constructo provoca una reducción de la viabilidad celular. En el documento WO 98/22589 se describen procedimientos para modular la apoptosis y para reducir la gravedad de un estado patológico mediado por survivina utilizando agentes que modulan la cantidad o la actividad de la survivina. Este documento también describe el constructo de hebra codificadora de EPR-1/survivina antisentido descrito por Ambrosini et al., supra.

Recientemente se ha descubierto que la survivina desempeña un papel en la regulación del ciclo celular. Se ha descubierto que se expresa en la fase G2/M del ciclo celular de una manera regulada por el ciclo, y que se asocia a microtúbulos del huso mitótico. La desorganización de esta interacción produce la pérdida de la función antiapoptótica de la survivina y aumenta la actividad caspasa-3 durante la mitosis. La caspasa-3 está asociada con la muerte celular apoptótica. Por tanto, se cree que la survivina puede contrarrestar una inducción defectuosa de la apoptosis en la fase G2/M. Se cree que la sobreexpresión de la survivina en el cáncer puede superar este punto de control apoptótico, permitiendo la supervivencia y la división no deseadas de las células cancerosas. Se ha descubierto que el constructo de survivina antisentido descrito por Ambrosini (véase anteriormente) infrarregula la survivina endógena en células HeLa y aumenta la apoptosis dependiente de caspasa-3 en las células en fase G2/M (Li et al., Nature, 1998, 396, 580-584).

Como resultado de estos avances en la comprensión de la apoptosis y del papel que parece desempeñar la expresión de la survivina para conferir una ventaja de crecimiento a una amplia variedad de tipos de células tumorales, existe un gran deseo de proporcionar composiciones de materia que puedan modular la expresión de la survivina. Se desea en gran medida proporcionar procedimientos de diagnóstico y de detección de ácidos nucleicos que codifiquen la survivina en animales. También se desea proporcionar procedimientos de diagnóstico y de tratamiento de trastornos que surgen de la expresión de survivina. Además, se desean mejores kits y reactivos de investigación para la detección y el estudio de los ácidos nucleicos que codifican la survivina.

En la actualidad no existen agentes terapéuticos conocidos que inhiban de forma eficaz la síntesis de survivina. Por consiguiente, existe una necesidad, largo tiempo sentida, de agentes capaces de inhibir de manera eficaz la expresión de la survivina en células tumorales. Por tanto, los oligonucleótidos antisentido contra survivina pueden demostrar ser excepcionalmente útiles en una serie de aplicaciones terapéuticas, de diagnóstico y de investigación.

Sumario de la invención

La presente invención está dirigida a oligonucleótidos antisentido que están dirigidos a ácidos nucleicos que codifican la survivina y que modulan la expresión de la survivina. La presente invención proporciona un oligonucleótido antisentido con una longitud de hasta 30 nucleótidos dirigido a una molécula de ácido nucleico que codifica la survivina humana, que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:10, 12, 15, 16, 18, 20, 21, 23, 28, 31, 32, 34, 38, 39, 40, 41, 42, 43 y 47, o su sal farmacéuticamente aceptable. Los oligonucleótidos antisentido o sus sales farmacéuticamente aceptables de la invención pueden utilizarse en terapia y, en particular, pueden utilizarse en el tratamiento del cáncer. La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la invención en combinación con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. La invencion proporciona también el uso de un oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

Los oligonucleótidos antisentido o las composiciones de la invención son útiles en procedimientos para modular la expresión de survivina en células o tejidos, comprendiendo dichos procedimientos poner en contacto dichas células o tejidos con uno o más de dichos oligonucleótidos antisentido o composiciones. Además, los oligonucleótidos antisentido o las composiciones de la invención son procedimientos útiles para tratar a un animal, en particular a un ser humano, sospechoso o susceptible de padecer una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de survivina, mediante la administración de una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más de dichos oligonucleótidos antisentido o composiciones de la invención.

Descripción detallada de la invención

La presente invención emplea oligonucleótidos antisentido para su uso para modular la función de moléculas de ácidos nucleicos que codifican la survivina, modulando, en último término, la cantidad de survivina producida. Esto se logra proporcionando oligonucleótidos antisentido que se hibridan de forma específica con uno o más ácidos nucleicos que codifican la survivina. Tal como se emplean en la presente, las expresiones "ácido nucleico diana" y "ácido nucleico que codifica la survivina" incluyen ADN que codifica la survivina, ARN (incluyendo pre-ARNm y ARNm) transcrito a partir de dicho...

1. Un oligonucleótido antisentido con una longitud de hasta 30 nucleótidos dirigido a una molécula de ácido nucleico que codifica la survivina humana, que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:10, 12, 15, 16, 18, 20, 21, 23, 28, 31, 32, 34, 38, 39, 40, 41, 42, 43 y 47, o su sal farmacéuticamente aceptable.

2. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 1, que comprende la SEQ ID NO:38.

3. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 1 ó 2, que es un oligómero de ADN.

4. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende al menos un enlace internucleosídico modificado.

5. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 4, en el que dicho enlace internucleosídico modificado es un enlace fosforotioato.

6. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 5, en el que cada enlace internucleosídico es un enlace fosforotioato.

7. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende al menos un resto azúcar modificado.

8. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 7, en el que dicho resto azúcar modificado es un resto azúcar de 2'-O-(2-metoxietilo).

9. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, que tiene al menos una nucleobase modificada.

10. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 9, en el que dicha al menos una nucleobase modificada es una 5-metilcitosina.

11. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, que consiste en la SEQ ID NO:38.

12. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 11, que es un oligómero de ADN.

13. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 11 ó 12, que comprende al menos un enlace internucleosídico modificado.

14. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 13, en el que dicho enlace internucleosídico modificado es un enlace fosforotioato.

15. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 14, en el que cada enlace internucleosídico es un enlace fosforotioato.

16. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 11-15, que comprende al menos un resto azúcar modificado.

17. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 16, en el que dicho resto azúcar modificado es un resto azúcar de 2'-O-(2-metoxietilo).

18. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 15, en el que los nucleótidos 1-4 y 15-18 comprenden cada uno una modificación de 2'-O-(2-metoxietilo).

19. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 11-18, que tiene al menos una nucleobase modificada.

20. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 19, en el que dicha al menos una nucleobase modificada es una 5-metilcitosina.

21. El oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-20, en el que dicha sal farmacéuticamente aceptable es una sal sódica.

22. Una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable de una cualquiera de las reivindicaciones 1-21, en combinación con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

23. Un oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-21, para su uso en terapia.

24. El uso de un oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-21, para la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

25. Un oligonucleótido antisentido o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-21, para el tratamiento del cáncer.