Miembro de unión para el receptor GM-CSF.

Una composición que comprende una molécula de anticuerpo aislada y un excipiente farmacéuticamenteaceptable,

donde la molécula de anticuerpo comprende un dominio VH de anticuerpo y un dominio VL de anticuerpo,comprendiendo el dominio VH de anticuerpo las regiones determinantes de la complementariedad de cadenapesada (CDR) HCDR1, HCDR2 y HCDR3, y comprendiendo el dominio VL las CDR de cadena ligera LCDR1,LCDR2 y LCDR3, donde las secuencias de aminoácidos de las CDR son:

HCDR1 SEQ ID NO: 53

HCDR2 SEQ ID NO: 54

HCDR3 SEQ ID NO: 55

LCDR1 SEQ ID NO: 58

LCDR2 SEQ ID NO: 59 y

LCDR3 SEQ ID NO: 60.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E11167923.

Solicitante: MEDIMMUNE LIMITED.

Nacionalidad solicitante: Reino Unido.

Dirección: Milstein Building Granta Park Cambridge, Cambridgeshire CB21 6GH REINO UNIDO.

Inventor/es: SLEEMAN,MATTHEW, COHEN,EMMA, MINTER,RALPH, HARRISON,PAULA, NASH,ANDREW, FABRI,LOUIS.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/395 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • C07K16/28 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.

PDF original: ES-2424468_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Miembro de unión para el receptor GM-CSF

La presente invención se refiere a miembros de unión para la cadena alfa del Receptor del Factor de Estimulación de Colonias de Granulocitos/Macrófagos (GM-CSFRa) , especialmente moléculas de anticuerpo anti-GM-CSFRa. También se refiere al uso de estos miembros de unión en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, respiratorias y autoinmunitarias mediadas por GM-CSFRa, incuidas la artritis reumatoide, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica y la esclerosis múltiple.

El GM-CSF es una citocina proinflamatoria de tipo I, que mejora la supervivencia, la proliferación y/o la diferenciación de una amplia serie de tipos de células hematopoyéticas que incluyen neutrófilos, eosinófilos, macrófagos y sus células progenitoras. El receptor GM-CSF es un miembro de la superfamilia del receptor de la hematopoyetina. Es heterodimérico, está constituido por una subunidad alfa y una beta. La subunidad alfa es altamente específica para el GM-CSF mientras que la subunidad beta está compartida con otros receptores de citocinas, que incluyen la IL3 y la IL5. Esto se refleja en una distribución en el tejido más amplia de la subunidad beta del receptor. La subunidad alfa, GM-CSFRa, se expresa principalmente en las células mieloides y en las células no hematopoyéticas, tales como los neutrófilos, los macrófagos, los eosinófilos, las células dendríticas, las células endoteliales y las células epiteliales respiratorias. El GM-CSFRa de longitud completa es una glicoproteína de membrana de tipo I de 400 aminoácidos que pertenece a la familia de receptores de citocinas de tipo I, y está constituida por un péptido señal de 22 aminoácidos (posiciones 1-22) , un dominio extracelular de 298 aminoácidos (posiciones 23-320) , un dominio transmembrana en las posiciones 321 - 345 y un dominio intra-celular corto de 55 aminoácidos. El péptido señal se escinde para proporcionar la forma madura de GM-CSFRa como una proteína de 378 aminoácidos. Están disponibles los clones de ADNc de GM-CSFRa humano y murino y, a nivel de proteína, las subunidades del receptor tienen el 36 % de identidad. El GM-CSF es capaz de unirse con una afinidad relativamente baja a la subunidad a sola (Kd 1-5 nm) pero no se une en absoluto a la subunidad 1 sola. Sin embargo, la presencia de ambas subunidades a y 1 dan lugar a un complejo ligando-receptor de alta afinidad (Kd " 100pM) . La señalización de GM-CSF se produce mediante su unión inicial a la cadena a de GM-CSFR y el entrecruzamiento posterior con una subunidad más grande de la cadena 1 común para generar la interacción de alta afinidad, que fosforila la ruta JAK-STAT. La unión de GM-CSFR al GMCSF se examina en la ref. [1]. Esta interacción además es capaz de señalizar mediante la fosforilación de tirosina y la activación de la ruta de la cinasa MAP.

Patológicamente, se ha demostrado que el GM-CSF desempeña un papel en la exacerbación de las enfermedades inflamatorias, respiratorias y autoinmunitarias. La neutralización de la unión de GM-CSF al GM-CSFRa es, por lo tanto, un enfoque terapéutico para el tratamiento de las enfermedades y las afecciones mediadas por GM-CSFR.

Nicola y col.. [2] han descrito un anticuerpo murino contra el GM-CSFRa humano, que se denominó 2B7-17-A o "2B7", que se ha informado que tiene una afinidad relativamente alta por el GM-CSFRa humano y es un potente inhibidor de la acción biológica del GM-CSF humano en varios bioensayos diferentes. El anticuerpo 2B7 está disponible comercialmente de Chemicon como MAB1037, y la ficha de especificaciones técnicas para el MAB1037 indica que este es un potente inhibidor de la acción biológica de GM-CSF.El 2B7 se ha descrito también en el documento WO94/09149.

Usando una combinación de selecciones de las bibliotecas de fagos scFv vírgenes, mutagénesis aleatoria y ensayos biológicos y bioquímicos diseñados adecuadamente (ver la Parte experimental más abajo) , hemos identificado moléculas de anticuerpo muy potentes que se unen al GM-CSFRa humano e inhiben la acción de GM-CSF humano en su receptor. Los resultados presentados en el presente documento indican que nuestros anticuerpos se unen a una región o epítopo diferente de GM-CSFRa en comparación con el anticuerpo 2B7 anti-GM-CSFRa conocido y sorprendentemente, son aún más potentes que 2B7, como se ha demostrado en una diversidad de ensayos biológicos.

Un aspecto de la invención es una composición que comprende una molécula de anticuerpo aislada y un excipiente farmacéuticamente aceptable, donde la molécula de anticuerpo comprende un dominio VH de anticuerpo y un dominio VL de anticuerpo, comprendiendo el dominio VH de anticuerpo las regiones determinantes de la complementariedad de cadena pesada (CDR) HCDR1, HCDR2 y HCDR3, y comprendiendo el dominio VL las CDR de cadena ligera LCDR1, LCDR2 y LCDR3, donde las secuencias de aminoácidos de las CDR son:

HCDR1 SEQ ID NO: 53

HCDR2 SEQ ID NO: 54

HCDR3 SEQ ID NO: 55

LCDR1 SEQ ID NO: 58

LCDR2 SEQ ID NO: 59 y

LCDR3 SEQ ID NO: 60.

Los anticuerpos de la invención son particularmente valiosos en la unión a, y neutralización de, GM-CSFRa y, por lo tanto, se usan en tratamientos de enfermedades mediadas por el GM-CSFRa, incluidas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias, tal como se indica mediante la experimentación contenida en el presente documento y en la literatura técnica de apoyo adicional. Por ejemplo, se ha demostrado en ensayos basados en células que los anticuerpos de la invención son capaces de inhibir la liberación de citocinas (por ejemplo, IL-6 y TNFa) inducida por la unión de GM-CSF nativo a su receptor. Tal como se explica con más detalle más adelante, la inhibición de la actividad de GM-CSF mediante el bloqueo de la unión al GM-CSFRa es un enfoque terapéutico para el tratamiento de enfermedades tales como la artritis reumatoide (AR) , el asma, la inflamación de las vías respiratorias inducida por el humo, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) , reacciones alérgicas, la esclerosis múltiple (EM) , la leucemia mieloide y la aterosclerosis.

Los miembros de unión de acuerdo con la invención generalmente se unen al dominio extracelular de GM-CSFRa. Preferentemente, un miembro de unión de la invención se une a al menos un residuo de Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln (YLDFQ) , SEC ID Nº: 201, en las posiciones 226 a 230 de GM-CSFRa humano maduro (SEC ID Nº: 206) . El miembro de unión puede unirse a al menos un residuo en la secuencia YLDFQ de GM-CSFRa humano, por ejemplo, se puede unir a uno, dos, tres o cuatro residuos de la secuencia YLDFQ. Así, el miembro de unión puede reconocer uno o más residuos dentro de esta secuencia, y opcionalmente puede unirse también a residuos flanqueantes adicionales o residuos estructuralmente vecinos en el dominio extracelular de GM-CSFRa.

La unión se puede determinar por cualquier procedimiento adecuado, por ejemplo se puede usar un análisis de unión a péptidos, tal como un inmunoensayo de unión a enzima (ELISA) basado en PEPSCAN, tal como se describe con detalle en otra parte en el presente documento. En un análisis de unión a péptidos, tal como el tipo proporcionado por PEPSCAN Systems, se examinan sistemáticamente péptidos cortos superpuestos derivados de los antígenos para determinar la unión a un miembro de unión. Los péptidos se pueden acoplar covalentemente a una superficie de apoyo para formar una matriz de péptidos. En resumen, un análisis de unión a péptidos (por ejemplo, "PEPSCAN") incluye la identificación de (por ejemplo, por medio del uso del ELISA) un conjunto de péptidos a los que se une el miembro de unión, en el que los péptidos tienen secuencias de aminoácidos que corresponden a los fragmentos de SEC ID Nº: 206 (por ejemplo, los péptidos de aproximadamente 15 residuos contiguos de SEC ID Nº: 206) y la alineación de los péptidos con el fin de determinar una huella de los residuos unidos por el miembro de unión, en la que la huella comprende los residuos comunes a los péptidos superpuestos. De acuerdo con la invención, la huella identificada mediante el análisis de la unión a péptidos o PEPSCAN puede comprender al menos un residuo de YLDFQ correspondiente a las posiciones 226 a 230 de la SEC ID Nº: 206. La huella puede comprender uno, dos, tres, cuatro o todos los residuos de YLDFQ. Un miembro de unión de acuerdo con la presente invención se puede unir a un fragmento de péptido (por ejemplo, de 15 residuos) de SEC ID Nº: 206 que comprende uno o más, preferentemente todos, los residuos de YLDFQ correspondientes a las posiciones 226 a 230 de la SEC ID Nº: 206, por ejemplo, tal como se determina por un procedimiento de análisis de unión a péptidos o PEPSCAN descritos en el presente... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una composición que comprende una molécula de anticuerpo aislada y un excipiente farmacéuticamente aceptable, donde la molécula de anticuerpo comprende un dominio VH de anticuerpo y un dominio VL de anticuerpo, comprendiendo el dominio VH de anticuerpo las regiones determinantes de la complementariedad de cadena pesada (CDR) HCDR1, HCDR2 y HCDR3, y comprendiendo el dominio VL las CDR de cadena ligera LCDR1, LCDR2 y LCDR3, donde las secuencias de aminoácidos de las CDR son:

HCDR1 SEQ ID NO: 53 HCDR2 SEQ ID NO: 54 HCDR3 SEQ ID NO: 55 LCDR1 SEQ ID NO: 58 LCDR2 SEQ ID NO: 59 y LCDR3 SEQ ID NO: 60.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, donde la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo humano o humanizado.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde la molécula de anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 52 del dominio VH de anticuerpo.

4. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la molécula de anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 218 del dominio VL de anticuerpo.

5. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-4, donde la molécula de anticuerpo es una IgG4.

6. Una composición de acuerdo con la reivindicación 5, donde la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo IgG4 humano que comprende una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 52 de dominio VH y una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 218 del dominio VL.

7. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para utilizar en un método de tratamiento de la artritis reumatoide, asma, respuesta alérgica, esclerosis múltiple, leucemia mieloide, aterosclerosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica o inflamación de las vías respiratorias inducida por el humo.

8. Una composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 7, donde el tratamiento comprende administrar la composición combinada o junto con uno o más de los siguientes: AINE, corticosteroides y fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (FARME) .

9. Una composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 8, donde el tratamiento comprende administrar la composición combinada con uno o más de los siguientes: inhibidores de cox, prednisona, Humira (adalimumab) , metotrexato, Arava, Enbrel (Etanercept) , Remicade (Infliximab) , Kineret (Anakinra) , Rituxan (Rituximab) , Orencia (Abatacept) , sales de oro, antimaláricos, sulfasalazina, d-penicilamina, ciclosporina A, diclofenac, ciclofosfamida y azatioprina.

10. Una composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 9, donde el tratamiento comprende administrar la composición combinada con metotrexato.

11. Un método para producir una molécula de anticuerpo que comprende cultivar una célula huésped que contiene el ácido nucleico que codifica la molécula de anticuerpo, a continuación purificar la molécula de anticuerpo, donde la molécula de anticuerpo compite por la unión al dominio extracelular de GM-CSFRa con una molécula de anticuerpo que tiene la SEQ ID NO: 52 del dominio VH y la SEQ ID NO: 218 del dominio VL.

12. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde la molécula de anticuerpo se une al dominio extracelular de GM-CSFRa humano con una afinidad (KD) inferior a 5 nM en un ensayo de resonancia de plasmón superficial.

13. Un método para producir una molécula de anticuerpo para GM-CSFRa humano, comprendiendo el método proporcionar, a través de la inserción, supresión o sustitución de uno o más aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de un dominio VH de partida que comprende HCDR1, HCDR2 y HCDR3, un dominio VH que sea una variante de la secuencia de aminoácidos del dominio VH de partida; donde la CDR1 del VH de partida tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 53; la CDR2 del VH de partida tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 54; y la CDR3 del VH de partida tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 55;

combinar el dominio VH así proporcionado con uno o más dominios VL para proporcionar una o más combinaciones VH/VL; donde dichos dominios VL se proporcionan a través de la inserción, supresión o sustitución de uno o más aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de un dominio VL de partida que comprende LCDR1, LCDR2 y

LCDR3; donde

la CDR1 del VL de partida tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 58;

la CDR2 del VL de partida tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 59; y

la CDR3 del VL de partida tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 60; y

analizar la combinación o combinaciones VH/VL para identificar una molécula de anticuerpo para GM-CSFRa humano.


 

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