MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA MEJORAR LA EFICACIA Y ESPECIFICIDAD DE FNAI.

Un método para mejorar la capacidad de una hebra anticodificante de un agente ARNi para actuar como un hebra guía en mediar ARNi,

que comprende disminuir la fuerza de los pares base entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante del dúplex cuando se compara con la fuerza del par base entre el extremo 3' de la hebra anticodificante y el extremo 5' de la hebra codificante, en donde el extremo 5' de las hebras codificantes y anticodificantes es los cinco nucleótidos en el terminal 5' de las hebras respectivas, y el extremo 3' de las hebras codificantes y anticodificantes es la región de cinco nucleótidos en el terminal 3' de las hebras respectivas que son complementarias con el extremo 5' de las hebras complementarias respectivas

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/017256.

Solicitante: UNIVERSITY OF MASSACHUSETTS.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: ONE BEACON STREET, 26TH FLOOR BOSTON, MA 02108 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ZAMORE,PHILLIP,D, SCHWARZ,DIANNE, SIMARD,MARTIN, HUTVAGNER,GYORGY.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 2 de Junio de 2004.

Clasificación PCT:

  • C07H21/02 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › C07H 21/00 Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos. › con ribosilo como radical sacárido.
  • C07H21/04 C07H 21/00 […] › con desoxirribosilo como radical sacárido.
  • C12N15/63 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12N15/88 C12N 15/00 […] › utilizando la micro-encapsulación, p. ej. utilizando vesículas liposómicas.
  • C12P19/34 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Clasificación antigua:

  • C07H21/02 C07H 21/00 […] › con ribosilo como radical sacárido.
  • C07H21/04 C07H 21/00 […] › con desoxirribosilo como radical sacárido.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12N15/88 C12N 15/00 […] › utilizando la micro-encapsulación, p. ej. utilizando vesículas liposómicas.
  • C12P19/34 C12P 19/00 […] › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
  • C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

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Ilustración 1 de MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA MEJORAR LA EFICACIA Y ESPECIFICIDAD DE FNAI.
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MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA MEJORAR LA EFICACIA Y ESPECIFICIDAD DE FNAI.

Fragmento de la descripción:

Derechos Gubernamentales

Esta invención se hace por lo menos en parte con el apoyo del gobierno de los Estados Unidos bajo los nos. de consesión R01 GM62862-01, GM65236-01, y R21 NS44952-01 adjudicado por los Institutos Nacionales de Salud. El 5 gobierno de los Estados Unidos puede tener ciertos derechos en esta invención.

Antecedente de la Invención

Dos tipos de activadores de ARN ~21 nt de silenciamiento de gen post-transcripcional en animales: ARN de interferencia pequeña (siARN) y microARN (miARN). Los siARN y miARN se producen mediante la división de precursores de ARN bicatenario (dsARN) por Dicer, una familia RNasa III de endonucleasas específicas por dsARN 10 (Bernstein et al.,2001; Billy et al., 2001; Grishok et al., 2001; Hutvágner et al., 2001; Ketting et al., 2001;Knight y Bass, 2001; Paddison et al., 2002; Park et al., 2002; Provost et al., 2002; Reinhart et al., 2002; Zhang et al., 2002; Doi et al., 2003; Myers et al., 2003). Los siARN resultan cuando los transposones, virus o genes endógenos expresan dsARN largo o cuando el dsARN se introduce experimentalmente en células de planta o animal para activar silenciamiento de gen, un proceso conocido como interferencia de ARN (ARNi) (Fire et al., 1998; Hamilton 15 and Baulcombe, 1999; Zamore et al., 2000; Elbashir et al., 2001 a; Hammond et al., 2001; Sijen et al., 2001; Catalanotto et al., 2002). En contraste, los miARN son los productos de genes endógenos, no codificantes cuyos transcriptos ARN precursores pueden formar bucles de tallo pequeño de los que se dividen miARN maduros por Dicer (Lagos-Quintana et al., 2001; Lau et al., 2001; Lee and Ambros, 2001; Lagos-Quintana et al., 2002; Mourelatos et al., 2002; Reinhart et al., 2002; Ambros et al., 2003; Brennecke et al., 2003; Lagos-Quintana et al., 2003; Lim et 20 al., 2003a; Lim et al., 2003b). Se codifican miARN en genes distintos de los mARN cuya expresión ellos controlan.

Los siARN primero se identifican como los determinantes de especificidad de la ruta de interferencia de ARN (ARNi) (Hamilton y Baulcombe, 1999; Hammond et al., 2000), en donde ellos actúan como guías para dirigir la división endonucleolítica de sus ARN objetivo (Zamore et al., 2000; Elbashir et al., 2001 a). Los dúplex siARN prototípicos son 21 nt, los ARN bicatenarios que contienen 19 pares base, con dos nucleótidos, extremos suspendidos 3' 25 (Elbashir et al., 2001 a; Nykänen et al., 2001; Tang et al., 2003). Los siARN activos contienen fosfatos 5' e hidroxilos 3' (Zamore et al., 2000; Boutla et al., 2001; Nykänen et al., 2001; Chiu and Rana, 2002). De forma similar, los miARN contienen grupos fosfato 5' e hidroxilo 3', que reflejan su producción por Dicer (Hutvágner et al., 2001; Mallory et al., 2002).

En las plantas, los miARN regulan la expresión de proteínas importantes desarrolladas, frecuentemente al dirigir la 30 división de mARN (Rhoades et al., 2002; Reinhart et al., 2002; Llave et al., 2002a; Llave et al., 2002b; Xie et al., 2003; Kasschau et al., 2003; Tang et al., 2003; Chen, 2003). Aunque los miARNde planta muestran un alto grado de complementariedad con sus objetivos mARN, miARN de animal solo tienen complementariedad limitada para los mARN cuya expresión ellos controlan (Lee et al., 1993; Wightman et al., 1993; Olsen and Ambros, 1999; Reinhart et al., 2000; Slack et al., 2000; Abrahante et al., 2003; Brennecke et al., 2003; Lin et al., 2003; Xu et al., 2003). Se 35 considera que el miARN de animal reprime la traducción del mARN, que promueve la destrucción de mARN objetivo (Lee et al., 1993; Wrightman et al., 1993; Olsen and Ambross, 1999; Brennecke et al., 2003). La evidencia actual sugiere que las dos clases de ARN pequeños son funcionalmente intercambiables, con la elección de la división de mARN o represión traduccional determinada únicamente por el grado de complementariedad entre el ARN pequeño y su objetivo (Hutvágner and Zamore, 2002; Doench et al., 2003). Adicionalmente, los siARN y los miARN se 40 encuentran en complejos similares, si no idénticos, que sugieren que un único complejo bifuncional – complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC) - media la división y el control traduccional (Mourelatos et al., 2002; Hutvágner and Zamore, 2002; Caudy et al., 2002; Martinez et al., 2002). No obstante, los estudios en plantas y animales muestran que en estado de equilibrio, los siARN y los miARN difieren en por lo menos un respecto crucial: in vivo y e vitro, los siARN son bicatenarios, aunque los miARN son monocatenarios (Lee et al., 1993; Hamilton and 45 Baulcombe, 1999; Pasquinelli et al., 2000; Reinhart et al., 2000; Elbashir et al., 2001a; Djikeng et al., 2001; Nykänen et al., 2001; Lagos-Quintana et al., 2001; Lau et al., 2001; Lee and Ambros, 2001; Lagos-Quintana et al., 2002; Reinhart et al., 2002; Llave et al., 2002a; Silhavy et al., 2002; Llave et al., 2002b; Tang et al., 2003).

Los dúplex siARN se pueden ensamblar en RISC en la ausencia de mARN objetivo, in vivo e in vitro (Tuschl et al., 1999; Hammond et al., 2000; Zamore et al., 2000). Cada RISC solo contiene una de las dos hebras del dúplex 50 siARN (Martinez et al., 2002). Debido a que los dúplex siARN no tienen conocimiento anterior de lo cual la hebra siARN guiará la división objetivo, ambas hebras se pueden unir con las proteínas apropiadas para formar un RISC. Previamente, nosotros y otros muestran que ambas hebras siARN son competentes para dirigir ARNi (Tuschl et al., 1999; Hammond et al., 2000; Zamore et al., 2000; Elbashir et al., 2001b; Elbashir et al., 2001a; Nykänen et al., 2001). Es decir, la hebra anticodificante de un siARN puede dirigir la división de un objetivo ARN codificante 55

correspondiente, aunque la hebra siARN codificante dirige la división de un objetivo anticodificante. En esta forma, el dúplex siARN parece ser funcionalmente simétrico. La capacidad de controlar que hebra de un dúplex siARN entra en el complejo RISC para dirigir la división de un objetivo ARN correspondiente proporcionaría un avance significativo para la investigación y las aplicaciones terapéuticas de tecnología de ARNi.

Resumen de la Invención 5

Una etapa clave en la interferencia de ARN (ARNi) es el ensamble de un complejo de ARN de proteína catalíticamente activa, el complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC), que media la división de ARN objetivo. La presente invención se basa, por lo menos en parte, en el descubrimiento de las dos hebras de un dúplex siARN que no contribuye igualmente al ensamble de RISC. Las estabilidades absoluta y relativa de los pares bases en el extremo 5' de las dos hebras siARN determina el grado al cual cada hebra participa en la ruta de ARNi. De 10 hecho, el siARN puede ser funcionalmente asimétrico, con sólo una de las dos hebras capaces de activar el ARNi. La presente invención también se basa en el descubrimiento que los miARN monocatenarios se generan inicialmente como dúplex similares a siARN cuyas estructuras predestinan una hebra a ingresar al RISC y la otra hebra a ser destruida. Este hallazgo ayuda a explicar la biogénesis de los miARN monocatenarios; la hebra de miARN de un intermedio similar a dúplex siARN de larga vida se ensambla en un complejo RISC, provocando que se 15 acumulen miARN in vivo como ARN monocatenarios.

La presente invención se basa adicionalmente en el descubrimiento que el RISC puede dividir los objetivos de ARN con hasta cinco emparejamientos incorrectos contiguos en el extremo 5' siARN y ocho emparejamientos incorrectos en el extremo 3' siARN, lo que indica que las bases 5' contribuyen desproporcionalmente a la unión de ARN objetivo, pero no juegan un papel en determinar el índice catalítico, kcat. Este hallazgo explica que las secuencias 5', central 20 y 3' de la hebra guía siARN funcionan para dirigir la división objetivo.

La invención se basa adicionalmente en el descubrimiento que las bases 3' del siARN contribuyen mucho menos que las bases 5' a la longitud general de la unión, pero en su lugar ayuda a establecer la geometría helicoidal requerida para la división objetivo mediada por RISC, consistente con la vista que la catálisis por RISC requiere una hélice central en forma de A (Chiu et al., 2003). Este hallazgo indica que la complementariedad es esencial para 25 represión traduccional mediante siARN diseñados para actuar como miARN de animal, que típicamente represionan la traducción (Doench et al., 2004).

La presente invención se basa adicionalmente en el descubrimiento que cuando un siARN falla en hacer par con los primeros tres, cuatro o cinco nucleótidos del ARN objetivo, el enlace fosfodiéster cortado en el ARN objetivo no se cambia;... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método para mejorar la capacidad de una hebra anticodificante de un agente ARNi para actuar como un hebra guía en mediar ARNi, que comprende disminuir la fuerza de los pares base entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante del dúplex cuando se compara con la fuerza del par base entre el extremo 3' de la hebra anticodificante y el extremo 5' de la hebra codificante, en donde el extremo 5' de las hebras 5 codificantes y anticodificantes es los cinco nucleótidos en el terminal 5' de las hebras respectivas, y el extremo 3' de las hebras codificantes y anticodificantes es la región de cinco nucleótidos en el terminal 3' de las hebras respectivas que son complementarias con el extremo 5' de las hebras complementarias respectivas.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el agente ARNi es un dúplex siARN.

3. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la resistencia de par base es menor debido a pocos pares 10 base G:C entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante que entre el extremo 3' de la hebra anticodificante y el extremo 5' de la hebra codificante.

4. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base con emparejamiento incorrecto entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante. 15

5. El método de la reivindicación 4, en donde el par base con emparejamiento incorrecto se selecciona del grupo que consiste de G:A, C:A, C:U, G:G, A:A, C:C y U:U.

6. El método de la reivindicación 4, en donde el par base con emparejamiento incorrecto se selecciona del grupo que consiste de G:A, C:A, C:T, G:G, A:A, C:C y U:T.

7. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos 20 un par base oscilante entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante.

8. El método de la reivindicación 7, en donde el par base oscilante es G:U.

9. El método de la reivindicación 7, en donde el par base oscilante es G:T.

10. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la resistencia de par base es menor debido a:

(a) por lo menos un par base de con emparejamiento incorrecto entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el 25 extremo 3' de la hebra codificante; y

(b) por lo menos un par base oscilante entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante.

11. El método de la reivindicación 10, en donde el par base de emparejamiento incorrecto se selecciona del grupo que consiste de G:A, C:A, C:U, G:G, A:A, C:C y U:U. 30

12. El método de la reivindicación 10, en donde el par base de emparejamiento incorrecto se selecciona del grupo que consiste de G:A, C:A, C:T, G:G, A:A, C:C y U:T.

13. El método de la reivindicación 10, en donde el par base oscilante es G:U.

14. El método de la reivindicación 10, en donde el par base oscilante es G:T.

15. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos 35 un par base que comprende un nucleótido raro.

16. El método de la reivindicación 10, que comprende adicionalmente por lo menos un nucleótido raro entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante.

17. El método de la reivindicación 15 o 16, en donde el nucleótido raro es inosina (I).

18. El método de la reivindicación 17, en donde el par base se selecciona del grupo que consiste de un I:A, I:U 40 e I:C.

19. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base que comprende un nucleótido modificado.

20. El método de la reivindicación 10, que comprende adicionalmente por lo menos un nucleótido modificado entre el extremo 5' de la hebra anticodificante y el extremo 3' de la hebra codificante.

21. El método de la reivindicación 19, en donde el nucleótido modificado se selecciona del grupo que consiste 5 de 2-amino-G, 2- amino-A, 2,6-diamino-G, 2,6-diamino-A.

22. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde el agente ARNi o dúplex siARN se sintetiza químicamente.

23. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde el agente ARNi o dúplex siARN se sintetiza enzimáticamente.

24. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde el agente ARNi o dúplex siARN se deriva de un precursor 10 construido por ingeniería.

25. El uso in vitro de un agente ARNi o dúplex siARN como se define en cualquier reivindicación precedente en un método para mejorar silenciamiento de un mARN objetivo, que comprende poner en contacto una célula que tiene una ruta de ARNi con el agente ARNi o dúplex siARN bajo condiciones tales que se mejora el silenciamiento.

26. Un agente ARNi o dúplex siARN como se define en cualquier reivindicación precedente para uso en un 15 método para mejorar silenciamiento de un mARN objetivo en un sujeto en donde una composición farmacéutica que comprende el agente ARNi o dúplex siARN se administra a dicho sujeto de tal manera que the silenciamiento se mejora.

27. Un método in vitro para reducir silenciamiento de mARN objetivo inadvertido mediante un agente dsARNi, el agente dsARNi que comprende una hebra codificante y una hebra anticodificante comprenden: 20

(a) detectar un grado significativo de complementariedad entre la hebra codificante y el objetivo inadvertido; y

(b) mejorar la resistencia de par base entre el extremo 5' de la hebra codificante y el extremo 3' de la hebra anticodificante con relación a la resistencia de par base entre el extremo 3' de la hebra codificante y el extremo 5' de la hebra anticodificante; de tal manera que se reduce silenciamiento del mARN objetivo inadvertido; en donde el extremo 5' de las hebras codificantes y anticodificantes es los cinco nucleótidos en el terminal 5' de las hebras 25 respectivas, y el extremo 3' de las hebras codificantes y anticodificantes es la región de cinco nucleótidos en el terminal 3' de las hebras respectivas que es complementario con el extremo 5' de las hebras complementarias respectivas.

28. El método de la reivindicación 27, en donde silenciamiento del mARN objetivo inadvertido se reduce con relación al silenciamiento de un mARN objetivo deseado. 30

29. Un dúplex siARN que comprende una hebra codificante y una hebra anticodificante, en donde la resistencia de par base entre el extremo 5' de la hebra anticodificante (AS 5') y el extremo 3' de la hebra codificante (S 3') es menor que la resistencia de par base entre el extremo 3' de la hebra anticodificante (AS 3') y el extremo 5' de la hebra codificante (S 5'), de tal manera que la hebra anticodificante guía preferiblemente la división de un mARN objetivo, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base de emparejamiento 35 incorrecto entre el AS 5' y el S 3', o la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base oscilante entre el AS 5' y el S 3', o la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base que comprende un nucleótido raro, o la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base que comprende un nucleótido modificado, y en donde el extremo 5' de las hebras codificantes y anticodificantes es los cinco nucleótidos en el terminal 5' de las hebras respectivas, y el extremo 3' de las hebras codificantes y anticodificantes es la región 40 de cinco nucleótidos en el terminal 3' de las hebras respectivas que es complementario con el extremo 5' de las hebras complementarias respectivas.

30. El dúplex siARN de la reivindicación 29, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base de emparejamiento incorrecto entre el AS 5' y el S 3'.

31. El dúplex siARN de la reivindicación 30, en donde el par base de emparejamiento incorrecto se selecciona 45 del grupo que consiste de G:A, C: A, C:U, G:G, A:A, C:C y U:U.

32. El dúplex siARN de la reivindicación 30, en donde el par base de emparejamiento incorrecto se selecciona del grupo que consiste de G:A, C: A, C:T, G:G, A:A, C:C y U:T.

33. El dúplex siARN de la reivindicación 29, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo menos un par base oscilante entre el AS 5' y el S 3'.

34. El dúplex siARN de la reivindicación 30, en donde el par base oscilante es G:U.

35. El dúplex siARN de la reivindicación 30, en donde el par base oscilante es G:T.

36. El dúplex siARN de la reivindicación 29, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo 5 menos un par base que comprende un nucleótido raro.

37. El dúplex siARN de la reivindicación 36, en donde el nucleótido raro es inosina (I).

38. El dúplex siARN de la reivindicación 37, en donde el par base se selecciona del grupo que consiste de un I:A, I:U e I:C.

39. El dúplex siARN de la reivindicación 29, en donde la resistencia de par base es menor debido a por lo 10 menos un par base que comprende un nucleótido modificado.

40. El dúplex siARN de la reivindicación 39, en donde el nucleótido modificado se selecciona del grupo que consiste de 2-amino- G, 2-amino-A, 2,6-diamino-G, y 2,6-diamino-A.

41. Una composición que comprende el dúplex siARN de una cualquiera de las reivindicaciones 29-40 formuladas para facilitar la entrada del agente ARNi del dúplex siARN en una célula. 15

42. Una composición farmacéutica que comprende el dúplex siARN de una cualquiera de las reivindicaciones 29-40.

43. Un pre-miARN construido por ingeniería que comprende el dúplex siARN de una cualquiera de las reivindicaciones 29-40.

44. Un vector que codifica el pre-miARN de la reivindicación 43. 20

45. Un pri-miARN que comprende el pre-miARN de la reivindicación 44.

46. Un vector que codifica el pri-miARN de la reivindicación 45.

47. Un ARN de horquilla pequeña (shARN) que comprende secuencias de nucleótido idénticas a la hebra codificante y anticodificante del dúplex siARN de una cualquiera de las reivindicaciones 29-40.

48. El shARN de la reivindicación 47, en donde la secuencia de nucleótido idéntica a la hebra codificante está 25 en la dirección 5' de la secuencia de nucleótido idéntica a la hebra anticodificante.

49. El shARN de la reivindicación 47, en donde la secuencia de nucleótido idéntica a la hebra anticodificante está en la dirección 5' de la secuencia de nucleótido idéntica a la hebra codificante.

50. Un vector que codifica el shARN de una cualquiera de las reivindicaciones 47-49.

51. Una célula que comprende el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 44, 46 o 50. 30

52. La célula de la reivindicación 51, que es una célula de mamífero.

53. La célula de la reivindicación 51, que es una célula humana.

54. Un transgen que codifica el shARN de una cualquiera de las reivindicaciones 47-49.


 

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Secuenciación dirigida y filtrado de UID, del 15 de Julio de 2020, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento para generar una biblioteca de polinucleótidos que comprende: (a) generar una primera secuencia del complemento (CS) de un polinucleótido diana a partir […]

Métodos para la recopilación, estabilización y conservación de muestras, del 8 de Julio de 2020, de Drawbridge Health, Inc: Un método para estabilizar uno o más componentes biológicos de una muestra biológica de un sujeto, comprendiendo el método obtener un […]

Evento de maíz DP-004114-3 y métodos para la detección del mismo, del 1 de Julio de 2020, de PIONEER HI-BRED INTERNATIONAL, INC.: Un amplicón que consiste en la secuencia de ácido nucleico de la SEQ ID NO: 32 o el complemento de longitud completa del mismo.

Composiciones para modular la expresión de SOD-1, del 24 de Junio de 2020, de Biogen MA Inc: Un compuesto antisentido según la siguiente fórmula: mCes Aeo Ges Geo Aes Tds Ads mCds Ads Tds Tds Tds mCds Tds Ads mCeo Aes Geo mCes Te (secuencia […]

Aislamiento de ácidos nucleicos, del 24 de Junio de 2020, de REVOLUGEN LIMITED: Un método de aislamiento de ácidos nucleicos que comprenden ADN de material biológico, comprendiendo el método las etapas que consisten en: (i) efectuar un lisado […]

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