Método para producir un hidrolizado de proteína de trigo, comprendiendo:

a) adición de una endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC ID nº : 1 a una composición comprendiendo proteína de trigo, e

b) incubación para hidrolizar la proteína de trigo.

Método para la producción de un hidrolizado de proteína de trigo

REFERENCIA A UN LISTADO DE SECUENCIAS

Esta solicitud contiene un listado de secuencias en formato legible por ordenador. El formato legible por ordenador se incorpora aquí por referencia.

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a un método para la producción de un hidrolizado de proteína de trigo utilizando una endopeptidasa microbiana.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los hidrolizados de proteína de trigo han sido utilizados tradicionalmente como aditivos alimentarios y ahora se utilizan a nivel mundial en la cocina, por ejemplo, para dar sabor. Los hidrolizados de proteína de trigo se utilizan además para el enriquecimiento de las proteínas, por ejemplo, en bebidas para deportistas, dado que la proteína de trigo proporciona niveles de glutamina mayores que, por ejemplo, la proteína de soja, y en otras bebidas dietéticas, bebidas en polvo o barritas nutritivas, etc. Los hidrolizados de proteína de trigo pueden fabricarse usando enzimas proteolíticas para hidrolizar la proteína de trigo. En la fabricación industrial de hidrolizados de proteína de trigo es importante una solubilidad o suspendibilidad alta de la proteína hidrolizada desde ambos, el punto de vista del procesamiento, desde un punto de vista del factor económico o de eficiencia, y por una sensación en la boca y los propiedades sensoriales. Ha sido por lo tanto un objeto de los presentes inventores identificar las enzimas proteolíticas, que son útiles para la elaboración de hidrolizados de proteína de trigo con una alta solubilidad.

Las endopeptidasas que se consideran aplicables según la presente invención han sido descritas previamente. Por ejemplo, la endopeptidasa derivada de Nocardiopsis sp. NRRL 18262 se divulga en el documento WO88/03947 (aquí se hace referencia a la cepa como cepa Nocardiopsis sp. 10R) y el documento WO01/58276. Otras endopeptidasas útiles según la invención se describen en los documentos WO88/03947, WO04/111220 WO04/111222 WO04/11122 WO05/123911, y WO04/072279.

El documento WO 98/27827 divulga un proceso para obtener material proteínico enzimáticamente hidrolizado, tal como proteína de trigo, utilizando una exopeptidasa en combinación con una o más endopeptidasas adecuadas.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Los presentes inventores han identificado endopeptidasas que se han descubierto que son aplicables en la producción de hidrolizados de proteína de trigo, con una alta solubilidad y que dan lugar a suspensiones uniformes. Estas endopeptidasas son más eficaces que otras endopeptidasas usadas en la técnica cuando se comparan con una cantidad igual de proteína enzimática, lo que se traduce en una economía de producto mejor para los productores de hidrolizados de proteína de trigo. Consecuentemente, la presente invención se refiere a un método de producción de un hidrolizado de proteína de trigo, comprendiendo: a) adición de una endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC ID nº :1 a una composición de proteína de trigo y b) incubación para hidrolizar la proteína de trigo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Endopeptidasa [0007] El término endopeptidasa como se utiliza en este caso es una enzima que hidroliza enlaces internos de péptido (tiene actividad de endopeptidasa) .

No hay limitaciones en lo que respecta al origen de la endopeptidasa para el uso según la invención. De esta manera, el término endopeptidasa incluye no sólo endopeptidasas de tipo natural o salvaje, sino también algunas mutantes, variantes, fragmentos etc., de las mismas mostrando actividad de endopeptidasa, al igual que las endopeptidasas sintéticas, como por ejemplo, las endopeptidasas redistribuidas. Las variantes de endopeptidasa modificadas genéticamente se pueden preparar de forma generalmente conocida en la técnica, por ejemplo, por mutagénesis dirigida, por PCR (usando un fragmento PCR que contenga la mutación deseada como una de las cargas en las reacciones PCR) , o por mutagénesis aleatoria. Ejemplos de variantes de endopeptidasa, como se usan en el presente contexto, son endopeptidasas en las cuales uno o varios aminoácidos se han eliminado, insertado o sustituido por otros aminoácidos.

Ejemplos de endopeptidasas para uso según la invención son

(i) la endopeptidasa derivada de Nocardiopsis sp. NRRL 18262, descrita en el documento WO01/58276, cuya secuencia se muestra como la SEC ID nº : 1 del presente documento;

(ii) endopeptidasas con al menos 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, o al menos un 95% de identidad de aminoácido con la endopeptidasa de (i) ;

(iii) mutantes, variantes o fragmentos de endopeptidasas de (i) o (ii) que muestran actividad de endopeptidasa.

Para los fines de la presente invención, podrá determinarse la alineación de dos secuencias de aminoácidos usando el programa Needle del paquete EMBOSS (http://emboss.org) versión 2.8.0. El programa Needle ejecuta el algoritmo de alineación global descrito en Needleman, S. B. and Wunsch, C. D. (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453. La matriz de sustitución usada es BLOSUM62, la penalización de abertura de espacio es 10, y la penalización de extensión de espacio es 0.5.

El grado de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se calcula como el número de coincidencias exactas en una alineación de las dos secuencias, dividido por la longitud de la más corta de las dos secuencias. El resultado se expresa en porcentaje de identidad.

Una coincidencia exacta ocurre cuando las dos secuencias poseen residuos de aminoácidos idénticos en las mismas posiciones de la coincidencia. La longitud de una secuencia es el número de residuos de aminoácidos de la secuencia (p. ej. la longitud de la SEC ID nº : 1 es 188) .

Como ejemplos de endopeptidasas bacterianas aplicables para uso según la invención pueden nombrarse además la endopeptidasa de Nocardiopsis alba (previamente Nocardiopsis dassonvillei) NRRL 18133 divulgada en el documento WO88/03947, las endopeptidasas de Nocardiopsis dassonvillei subesp. dassonvillei DSM 43235, Nocardiopsis alba DSM 15647, Nocardiopsis sp. DSM 16424 y la proteasa sintética 22, divulgadas las cuatro en el documento WO04/111220, la endopeptidasa de Nocardiopsis prasina DSM 15648 divulgada en el documento WO04/111222, la endopeptidasa de Nocardiopsis prasina DSM 15649 divulgada en el documento WO04/111223, las endopeptidasas de Nocardiopsis prasina (antes Nocardiopsis alba) DSM 14010, Nocardiopsis alkaliphila DSM 44657 y Nocardiopsis lucentensis DSM 44048, divulgadas las tres en el documento WO05/123911, las endopeptidasas de Brachysporiella gayana CGMCC 0865, Metarhizium anisopliae, Gliocladium sp. CBS 114001, Periconia sp. CBS 114002, Periconia sp. CBS 114000 y Curvularia lunata CBS 114003, las seis divulgadas en el documento WO04/072279, y mutantes, variantes o fragmentos de cualquiera de ellas que muestre actividad de endopeptidasa.

Una endopeptidasa para uso según la invención es una endopeptidasa microbiana, preferiblemente una endopeptidasa bacteriana, indicando el término bacteriano, que la endopeptidasa se deriva de o ha sido originada por una bacteria, o se trata de un análogo, un fragmento, una variante, un mutante, o una endopeptidasa sintética derivada de una bacteria. Se puede producir o expresar en la cepa bacteriana de tipo salvaje original, en otra cepa microbiana, o en una planta; es decir, el término engloba la expresión de endopeptidasas de tipo salvaje de origen natural, así como la expresión en cualquier huésped de endopeptidasas recombinantes, modificadas genéticamente o sintéticas.

En el proceso de la invención, la endopeptidasa puede ser purificada. El término "purificado" usado en este contexto engloba preparaciones de proteínas enzimáticas en las que la preparación ha sido enriquecida para dicha proteína enzimática en cuestión. Dicho enriquecimiento podría ser por ejemplo: la eliminación de las células del organismo a partir del cual se produjo una proteína enzimática extracelular, la eliminación de material no-proteínico por una precipitación proteínica específica o mediante el uso de un procedimiento cromatográfico en el que se adsorbe de forma selectiva la proteína enzimática en cuestión y se eluye de una matriz cromatográfica. Las endopeptidasas pueden haber sido purificadas hasta tal punto que sólo estén presentes cantidades menores de otras proteínas. La expresión "otras proteínas" hace referencia concretamente a otras enzimas. Una endopeptidasa... [Seguir leyendo]

1. Método para producir un hidrolizado de proteína de trigo, comprendiendo:

a) adición de una endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC ID nº : 1 a una composición comprendiendo proteína de trigo, e b) incubación para hidrolizar la proteína de trigo.

2. Método según la reivindicación 1, en el que la endopeptidasa tiene al menos un 60% de identidad con la SEC ID nº :

1.

3. Método según la reivindicación 1, en el que la endopeptidasa tiene al menos un 80% de identidad con a SEC ID nº :

1.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el pH óptimo de la endopeptidasa se encuentra entre pH 9.5 y pH 10.5.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la temperatura óptima de la endopeptidasa con pH 9 es de al menos 60 º C.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la endopeptidasa es de Nocardiopsis.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que se añade la endopeptidasa en una concentración de entre 1 y 1000 mg de proteína enzimática por kg de proteína de trigo.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que se añade la endopeptidasa con una actividad de entre 0.01 y 50 UA por kg de proteína de trigo.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la composición comprende de aproximadamente 5% a aproximadamente 25% de proteína de trigo.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además el tratamiento de la composición de proteína de trigo con una o más enzimas adicionales con actividad de proteasa.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además el tratamiento de la composición de proteína de trigo con una o más exopeptidasas.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además el tratamiento de la composición de proteína de trigo con una o más enzimas del grupo comprendiendo amilasa, fitasa, celulasa, hemicelulasa, fosfolipasa, lipasa y xilanasa.

13. Hidrolizado de proteína de trigo producido por el método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

14. Uso de un hidrolizado de proteína de trigo producido por el método según cualquiera de las reivindicaciones 1-12 en un producto alimenticio.