Método para la producción de anticuerpos.
Un método de producción de un anticuerpo IgG1 o un fragmento del mismo,
que comprende permitir a una célula producir el anticuerpo o el fragmento, en el que la célula contiene un número mayor de copias de ADN exógeno que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma que el número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma, y es una célula en la que se ha introducido un vector que comprende una copia de ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma y dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2008/068588.
Solicitante: CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA.
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 5-1 UKIMA 5-CHOME KITA-KU TOKYO 115-8543 JAPON.
Inventor/es: KIYASU, TATSUYA, YAMADA,YOSHIKI, TABATA,KAZUYUKI, KUZUMAKI,AKIHIRO, YAMASHIRO,MAI.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K16/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
- C12N15/09 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
- C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.
PDF original: ES-2499391_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Método para la producción de anticuerpos Campo técnico
La invención se refiere a un método de producción de un anticuerpo lgG1, o un fragmento del mismo, que comprende permitir producir a una célula el anticuerpo o el fragmento, en el que la célula contiene un mayor número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma que el número de copias contenidas en la célula de ADN exógeno que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma, y es una célula en la que se ha introducido un vector que comprende una copia de ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma y dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
Antecedentes de la técnica
En la producción de anticuerpos recombinantes útiles como productos farmacéuticos usando tecnología recombinante genética, el uso de células animales posibilita la complicada modificación y plegado postraduccional que las células procarióticas son incapaces de efectuar. Por lo tanto, las células animales se han usado frecuentemente como células hospedadoras para producir anticuerpos recombinantes.
Recientemente, se han producido un gran número de productos farmacéuticos biológicos, tales como anticuerpos y proteínas fisiológicamente activas. En particular, en preparaciones de anticuerpo en que las dosis son habitualmente del orden de miligramos (mg) para administración, son necesarias cantidades considerables de anticuerpos como ingredientes activos. Las tecnologías que permiten una producción eficaz de anticuerpos recombinantes por células animales conducirán a una reducción del coste de preparaciones de anticuerpo y ofrecerán un suministro estable a pacientes.
Por lo tanto, se desean métodos más eficaces de producción de anticuerpos recombinantes.
En la preparación de una célula hospedadora para producir un anticuerpo recombinante, se transfieren habitualmente a la célula hospedadora una copia del ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo y una copia del ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo (documentos no de patente n° 1 y 2).
[Documento no de patente 1] Reff ME, Carner K, Chambers KS, Chinn PC, Leonard JE, Raab R et al. Depletion of B cells in vivo by a chimeric mouse human monoclonal antlbody to CD2. Blood. 15 de enero de 1994; 83(2): 435-45.
[Documento no de patente n° 2] Presta LG, Chen H, O'Connor SJ, Chisholm V, Meng YG, Krummen L, et al. Humanization of an anti-vascular endothelial growth factor monoclonal antibody for the therapy of solid tumors and other disorders. Cáncer Res. 15 de octubre de 1997; 57(2): 4593-9.
Divulgación de la invención
Problema para resolver por la invención
Por otro lado, no se sabe hasta la fecha si en una célula de expresión estable transformada se contribuye a la mejora de la producción de un anticuerpo recombinante deseado cuando se han transferido a la misma una copia de ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo y dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo.
Es un objeto de la invención proporcionar un método para la producción elevada de un anticuerpo.
Medios para resolver el problema
Como resultado de amplias y arduas investigaciones hacia la solución del problema anterior, se ha encontrado que es posible aumentar los rendimientos de anticuerpo usando una célula que contiene un mayor número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena ligera del anticuerpo de interés que el número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena pesada del anticuerpo que contiene. Por tanto, se ha conseguido la presente invención.
La presente invención se refiere a lo siguiente.
(1) Un método de producción de un anticuerpo lgG1, o un fragmento del mismo, que comprende permitir a una célula producir el anticuerpo o fragmento, en el que la célula contiene un mayor número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma que el número de copias contenidas en la célula de ADN exógeno que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la
misma, y es una célula en la que se ha introducido un vector que comprende una copia de ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento del mismo y dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento del mismo.
(2) El método según (1), en el que la célula es una célula animal.
(3) El método según (2) anterior, en el que la célula es célula de ovarlo de hámster chino.
(4) El método según una cualquiera de (1) a (3) anteriores, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado o anticuerpo humano.
(5) El método según una cualquiera de (1) a (4) anteriores, en el que el anticuerpo se selecciona del grupo consistente en anticuerpo añil-receptor de IL-6, anticuerpo antl-IL6, anticuerpo anti-glipicano 3, anticuerpo anti- CD3, anticuerpo antl-CD2, anticuerpo anti-GPIIb/llla, anticuerpo antl-TNF, anticuerpo anti-CD25, anticuerpo antl-EGFR, anticuerpo antl-Her2/neu, anticuerpo anti-RSV, anticuerpo anti-CD33, anticuerpo anti-CD52, anticuerpo anti-lgE, anticuerpo anti-CD11a, anticuerpo anti-VEGF y anticuerpo anti-VLA4.
(6) Un vector recombinante que comprende una copia de ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma y dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
(7) Una célula en que se ha introducido el vector según (6) anterior.
(8) Una célula cultivada en la que se ha introducido un vector que comprende una copia de ADN que codifica la cadena pesada de un anticuerpo lgG1 o un fragmento de la misma y dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
(9) El método según una cualquiera de (1) a (5) anteriores, en el que la célula expresa establemente el anticuerpo o el fragmento del mismo.
(1) La célula según (7) u (8) anteriores, que expresa establemente el anticuerpo o el fragmento del mismo.
Efecto de la invención
Según la presente invención, se hace posible producir un anticuerpo recombinante deseado a bajo coste.
Breve descripción de los dibujos
La Fig. 1 muestra el plásmido de expresión de una copia de cadena L phGC33CAG#1 que alberga una copia de la unidad de expresión de cadena ligera y una copia de la unidad de expresión de cadena pesada por plásmido, y el plásmido de expresión de dos copias de cadena L phGC33CAG1 que alberga dos copias de la unidad de expresión de cadena ligera y una copia de la unidad de expresión de cadena pesada por plásmido.
La Fig. 2 es una gráfica que muestra la productividad del anticuerpo (anticuerpo humanizado anti-glipicano 3 humano) por el clon o clones celulares transferidos con el plásmido de expresión de una copia de cadena L y el clon o clones celulares transferidos con el plásmido de expresión de dos copias de cadena L.
La Fig. 3 muestra el plásmido de expresión de una copia de cadena L que comprende una copia de la cadena pesada del gen de anticuerpo humanizado anti-IL-6R humano y una copia de la cadena ligera del gen, y el plásmido de expresión de dos copias de cadena L que comprende una copia de la cadena pesada y dos copias de la cadena ligera.
La Fig. 4 es una gráfica que muestra la productividad del anticuerpo (anticuerpo humanizado anti-IL-6R humano) por el clon o clones celulares transferidos con el plásmido de expresión de una copia de cadena L y el clon o clones celulares transferidos con el plásmido de expresión de dos copias de cadena L.
Mejor modo de llevar a cabo la invención
De aquí en adelante en la presente memoria, se describirán con detalle realizaciones de la invención.
La invención proporciona un método de producción de un anticuerpo lgG1, o un fragmento del mismo, que comprende permitir a una célula producir el anticuerpo o el fragmento, en el que la célula contiene un mayor número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma que el número de copias contenidas en la célula de ADN exógeno que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma.
En el método de la invención, una célula que contiene un mayor número de copias de ADN exógeno que codifica la cadena ligera de un anticuerpo o un fragmento de la misma que el número de copias contenidas en la célula de ADN exógeno que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma puede ser, por ejemplo, una célula transformada en la que se ha introducido una copla de... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un método de producción de un anticuerpo lgG1 o un fragmento del mismo, que comprende permitir a una célula producir el anticuerpo o el fragmento, en el que la célula contiene un número mayor de coplas de ADN exógeno que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma que el número de copias de ADN exógeno que
codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma, y es una célula en la que se ha introducido un
vector que comprende una copla de ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo o un fragmento de la misma y
dos o más copias de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
2. El método según la reivindicación 1, en el que la célula es una célula animal.
3. El método según la reivindicación 2 en el que la célula es célula de ovario de hámster chino.
4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el anticuerpo es un anticuerpo
quimérico, anticuerpo humanizado o anticuerpo humano.
5. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el anticuerpo se selecciona del grupo consistente en anticuerpo anti-receptor de IL-6, anticuerpo anti-IL6, anticuerpo anti-glipicano 3, anticuerpo anti-CD3, anticuerpo anti-CD2, anticuerpo antl-GPIIb/llla, anticuerpo anti-TNF, anticuerpo anti-CD25, anticuerpo anti-EGFR,
anticuerpo anti-Her2/neu, anticuerpo anti-RSV, anticuerpo anti-CD33, anticuerpo anti-CD52, anticuerpo anti-lgE, anticuerpo antl-CD11a, anticuerpo antl-VEGF y anticuerpo anti-VLA4.
6. Un vector recombinante que comprende una copia de ADN que codifica la cadena pesada de un anticuerpo lgG1 o un fragmento de la misma y dos o más coplas de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
7. Una célula en la que se ha Introducido el vector según la reivindicación 6.
8. Una célula cultivada en la que se ha Introducido un vector que comprende una copla de ADN que codifica la cadena pesada de un anticuerpo lgG1 o un fragmento de la misma y dos o más coplas de ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo o un fragmento de la misma.
9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la célula expresa establemente el 25 anticuerpo o el fragmento del mismo.
1. La célula según la reivindicación 7 u 8, que expresa establemente el anticuerpo o el fragmento del mismo.
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