MÉTODO PARA LA OBTENCIÓN DEL PERFIL GENÉTICO DE UN INDIVIDUO.

Método para la obtención del perfil genético de un individuo.

La invención se relaciona con un método para obtener el perfil genético de un individuo que comprende el análisis de 4 ó más loci hasta un total 21,

en un extracto de ADN de dicho individuo mediante una reacción de amplificación PCR multiplex, en donde

a) al menos uno de los 4 loci se selecciona del grupo formado por los loci STRs CSF1PO, D5S818, D7S820, TPOX y D13S317, y

b) al menos dos de los 4 loci se selecciona del grupo formado por los loci STRs D2S441, D1S1656, D12S391, D22S1045 y D10S1248.

La presente invención también contempla el kit que comprende las parejas de cebadores para la puesta en práctica de dicho método, siendo ambos útiles en la identificación de individuos en el área de la genética forense y de poblaciones, antropología y biomedicina.

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201132133.

Solicitante: UNIVERSIDAD DEL PAIS VASCO.

Nacionalidad solicitante: España.

Inventor/es: MARTÍNEZ DE PANCORBO GÓMEZ,MARÍA DE LOS ÁNGELES, AZNAR OVIEDO,JOSÉ MARÍA, ODRIOZOLA MARTÍNEZ,ADRIÁN, CELORRIO HERRERA,DAVID.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2416836_A1.pdf

 


Fragmento de la descripción:

MÉTODO PARA LA OBTENCiÓN DEL PERFIL GENÉTICO DE UN INDIVIDUO

CAMPO DE LA INVENCIÓN

5 \O La invención se relaciona con un método para obtener el perfil genético de un individuo o resto biológico que comprende el análisis de 4 ó más loci STRs, hasta un total de 20 loci STRs más ellocus amelogenina determinante del sexo (en total 21 loci) , en un extracto de ADN de dicho individuo o resto mediante una reacción de amplificación PCR multiplexo Asimismo, la presente invención también se dirige a la producción de un kit que comprende las parejas de cebadores para la puesta en práctica del método de la invención. Tanto el método como el kit aquí descritos son de aplicación en la identificación de individuos en el área de la genética forense, así como en genética de poblaciones, antropología y biomedicina.

15 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

20 El análisis de marcadores microsatélites denominados STRs (del inglés, Short Tandem Repeats) es hoy en día la técnica de referencia para la obtención de pertiles genéticos destinados a identificación de individuos, restos biológicos, determinación de parentesco o criminalística.

25 Del mismo modo, a partir del análisis de dichos marcadores STRs se han ido creando bases de datos de perfiles genéticos en diferentes países del mundo. Dichas bases de datos permiten la utilización de los perfiles genéticos en investigación criminal así como la utilización del conocimiento acumulado sobre los distintos loci STRs en diferentes grupos poblacionales, a la hora de cotejar los datos disponibles y estimar el poder de discriminación en cada caso cotejado.

30 Existe un amplio número de bases de datos de perfiles genéticos, entre ellas las más relevantes son Combined Index system (CODIS) creada por el FBI, Interpol Standard Se! oI Loei (ISSL) , ElIropean eore loei (ECL) , UK National Criminal Intelligenee DNA Database (NDNAD) , Extended European Standard Set (ESS) y German Core loei (GCL) . Todas las bases de datos incluyen un núcleo común de STRs (D18S51, D21S11, D3S1358,

08S1179, FGA, THOI, vWA) aunque difieren en el número total yen al¡, 'Unos de los loci STRs incluidos en cada una de ellas (Tabla 1) .

Tabla l. Loci STRs incluidos en las principales bases de datos.

CODIS ECLINDNAD ESS GCL ISSL FEI European & UK European E'Ctended Gemwn Core Loci Interpol

DI8S51 DI8S51 DI8S51 DI8S51 DI8S51

021SI1 D21SI1 D2ISI1 D2ISI1 D2ISI1

O3S1358 D3S135H D3S1358 O3S1358 O3S1358

08S1I79 OHSI179 mSI179 D8S1179 D8S1179

FGA FGA FGA FGA FGA

THOI THOI THOI THOI THOI

vWA v\VA v\VA vWA vWA

DI6S539 0I6S539

DI3S317

CSFIPO

TPOX

D7S820

D5S818

DI9S433

D2S1338

DIOSI248

DI2S391

DI SI656

D22SI045

D2S44 I

SE}3

CODIS es la base de datos que más loci STRs incluye, un total de 13, además del locus amelogenina para la determinación del sexo. ECL y la base de datos del Reino Unido incluyen 10 loci STRs y amelogenina, el núcleo de 7 loci STRs junto con el 016S539 10 compartido con el CODIS y dos loci STRs adicionales 019S433 y 02S1338, además de recomendar el análisis de TPOX, incluido en el CODlS. ISSL incluye el núcleo universal de 7 loci STRs y considera opcional el análisis de amelogenina. Por último, GCL incluye el núcleo universal de 7 loci STRs, amelogenina y el locus SE33. Recientemente se ha recomendado el uso de 5 nuevos loci STRs (OIS1656, 02S441, 0I0S1248, 012S391,

D22S1045) además del núcleo de 7 loci STRs por la Extended European Standard Set (ESS) .

En la actualidad existen numerosas empresas que comercializan kits para la elaboración de perfiles genéticos. Applied Biosystems'~ comercializa AmpFlSTR1\l Identifiler'" PCR amplification kit (2004, Applied Biosystems''', Foster City, CA) . Promega fabrica TM ·w

PowerPlex 16 (2004, Promega Corporation, USA) . Mediante estos kits puede alcanzarse una probabilidad de coincidencia entre los perfiles genéticos de dos individuos de alrededor de uno entre un trillón, tras el análisis de 15 regiones STRs. Ambos kits incluyen los 13 loci del CODIS; en el caso de Identifiler'" incluye además los loei autosómicos D2S1338 y D19433, Y Powerplex™ 16 incluye los loci autosomicos Penta E y Penta D.

Recientemente se han desarrollado otros nuevos kits comerciales AmpFISTR® NGM ™ Amplification Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA) , PowerPlex® ES X Y PowerPlex® ES Y (Promega® Corporation, USA) , Investigator ESSplex Kit (Qiagen, (Valencia, California, U.S.A.) dirigidos especialmente a analizar los 5 nuevos loci recomendados por la EDNAP (European DN4 Projiling Group) and ENFSI (EL¡ropean Network o (Forensic Science lnstitutes) .

Uno de los principales inconvenientes de éstos y otros kits actualmente disponibles en el mercado es su falta de capacidad para amplificar la totalidad de los loci STRs que se incluyen en el conjunto de las principales bases de datos. Este problema dificulta la comparación de los perfiles obtenidos mediante estos kits comerciales y los registrados en las diferentes bases de datos haciendo en muchos casos ineficaz dicha comparación al no obtenerse una probabilidad de coincidencia suficiente (ver Tabla 9 de los Ejemplos) .

En este contexto han surgido numerosas solicitudes de patentes relacionadas con la obtención de perfiles genéticos mediante el análisis simultáneo de varios loci STRs, que describen nuevos métodos de obtención de perfiles genéticos cada vez más discriminati vos basados en el análisis de nuevos STRs además de incluir algunos de los loci STRs utilizados hoy día.

La solicitud de patente US6090558 describe el uso de la espectrometría de masas para detectar la variación de longitud en repeticiones de secuencias de nucleótidos, tales como microsatélites y repeticiones cortas en tándem, y cebadores de ADN para el análisis de polimorfismos en repeticiones de nucleótidos en tándem en loci específicos.

Tanto la solicitud de patente US6479235 como la patente ES2273367 describen la detección de loci genéticos, más específicamente, la amplificación simultánea de múltiples loci genéticos polimórficos diferentes utilizando la reacción en cadena de la polimerasa u otros sistemas de amplificación para determinar los alelos de cada locus. Los loci genéticos amplificados comprenden HUMvWFA31, HUMLIPOL, HUMBFXIII, HUMF13A01, HUMFESFPS, HUMTH01, HUMTPOX, HUMCSF1PO, D22S683, D20S481, D19S253, D17S1299, D17S1298, D16S753, D16S539, D16S490, D14S562, D14S548, D14S118, D13S317, D10S1239, D9S930, D7S820, D5S818, D4S2368, D3S1539. Aunque integra un alto número de loci STRs, incluye únicamente 8 de los 13 loci objeto del CODIS, y 3 de los 10 loci incluidos en la base de datos europea, lo que disminuye su rendimiento en cuanto a comparación de los resultados obtenidos con los millones de perfiles genéticos disponibles en las bases de datos existentes.

La solicitud de patente US6479235 describe métodos y materiales para la amplificación simultánea de, al menos, 13 STRs del CODIS en una reacción multiplex cuyos tamaños de amplificado exceden las 360 pb.

La solicitud de patente US2003/0186272 describe un método rápido para determinar la longitud de los fragmentos de los alelos presentes en una pluralidad de loci en una muestra que contiene ADN que comprende: (a) obtener una muestra que contiene ADN, b) amplificar mediante PCR multiplex los loci FGA, vWA, TH01, TPOX, CSF1PO, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51 y D21S11 (la reacción PCR multiplex se lleva a cabo empleando una pluralidad de parejas de cebadores, donde al menos un cebador de cada pareja de cebadores está marcado con una etiqueta detectable, y la amplificación produce una mezcla de amplicones marcados) , y (c) analizar por electroforesis dicha mezcla de amplicones, para determinar la longitud de los fragmentos de los alelos en dicha pluralidad de loci de la muestra que contiene ADN.

Actualmente la obtención de perfiles genéticos mediante el análisis de loci STRs autosómicos plantea el problema técnico del escaso éxito de la mayoría de las reacciones para resolver casos de parentesco complejo en los que por falta de un progenitor, o por ser un parentesco lejano, el reducido número de STRs analizados en los diferentes kits hace que la probabilidad de parentesco obtenida resulte insuficiente para determinar con seguridad el grado de parentesco. En estos casos se hace necesario un nuevo análisis de los individuos con otros kits de STRs autosómicos y STRs sexuales (STRs del cromosoma X y del cromosoma Y) con el fin de aumentar el número de STRs analizados para alcanzar una probabilidad suficiente o para descartar el parentesco.

Por lo tanto, el estado de la técnica revela la necesidad... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método para obtener el perfil genético de un individuo que comprende el análisis, en un extracto de ADN procedente de dicho individuo mediante una reacción de amplificación multiplex, de los loci CSF1PO, D5S818, D7S820, D21S11, D2S441, D1S1656, TPOX, VWA, D8S1179, D19S433, D12S391, TH01, D16S539, D3S1358, D18S51, D2S1338, D13S317, Amelogenina, FGA, D22S1045 y D10S1248.

2. Método según la reivindicación 1, en donde la pareja de cebadores empleada en la reacción de amplificación multiplex específica para cada uno de los loci analizados es la pareja de oligonucleótidos mostrada en las secuencias

- SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 para el locus CSF1PO, -SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 para el locus D5S818, -SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 6 para el locus D7S820, -SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 8 para el locus D21S11, -SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10 para el locus D2S441, -SEQ ID NO: 11 y SEQ ID NO: 12 para el locus D1S1656, -SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 14 para el locus TPOX, -SEQ ID NO: 15 y SEQ ID NO: 16 para el locus VWA, -SEQ ID NO: 17 y SEQ ID NO: 18 para el locus D8S1179, -SEQ ID NO: 19 y SEQ ID NO: 20 para el locus D19S433, -SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 22 para el locus D12S391, -SEQ ID NO: 23 y SEQ ID NO: 24 para el locus TH01, -SEQ ID NO: 25 y SEQ ID NO: 26 para el locus D16S539, -SEQ ID NO: 27 y SEQ ID NO: 28 para el locus D3S1358, -SEQ ID NO: 29 y SEQ ID NO: 30 para el locus D18S51, -SEQ ID NO: 31 y SEQ ID NO: 32 para el locus D2S1338, -SEQ ID NO: 33 y SEQ ID NO: 34 para el locus D13S317, -SEQ ID NO: 35 y SEQ ID NO: 36 para el locus Amelogenina, -SEQ ID NO: 37 y SEQ ID NO: 38 para el locus FGA, -SEQ ID NO: 39 y SEQ ID NO: 40 para el locus D22S1045, y -SEQ ID NO: 41 y SEQ ID NO: 42 para el locus D10S1248.

3. Método según la reivindicación 2, en donde la temperatura de fusión de la reacción de amplificación multiplex que comprende los oligonucleótidos SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 42 está comprendida entre 57 y 63ºC.

4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde uno de los oligonucléotidos de cada pareja de cebadores está marcado en uno de sus extremos.

5. Método según la reivindicación 4, en donde los compuestos empleados en el marcaje de los oligonucleótidos se seleccionan del grupo que consiste en un radioisótopo, un material fluorescente, digoxigenina y biotina.

6. Método según la reivindicación 5, en donde el material fluorescente se selecciona del grupo que consiste en 5-carboxifluoresceína (5-FAM) , 6-FAM, análogo tetraclorinado de t-FAM (TET) , análogo hexaclorinado de 6-FAM (HEX) , 6carboxitetrametilrodamina (TAMRA) , 6-carboxi-X-rodamina (ROX) , 6-carboxi-4’, 5’-dicloro-2’, 7’-dimetoxifluoresceína (JOE) , NED, Cy-3, Cy-5, Cy-5.5, fluorescein-6-isotiocinato (FITC) y tetrametilrodamina-5-isotiocinato (TRITC) .

7. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el extracto de ADN procede de una muestra de sangre, pelo, saliva, epidermis, esperma, cenizas, tejidos o fluidos vaginales.

8. Uso de un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para identificar un individuo, determinar relaciones de parentesco entre individuos o para identificar restos humanos.

9. Un kit que comprende parejas de cebadores específicas para amplificar los loci CSF1PO, D5S818, D7S820, D21S11, D2S441, D1S1656, TPOX, VWA, D8S1179, D19S433, D12S391, TH01, D16S539, D3S1358, D18S51, D2S1338, D13S317, Amelogenina, FGA, D22S1045 y D10S1248.

10. Kit según la reivindicación 9, en donde la pareja de cebadores empleada en la reacción de amplificación multiplex específica para cada uno de los loci analizados es la pareja de oligonucleótidos mostrada en las secuencias

- SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 para el locus CSF1PO, -SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 para el locus D5S818, -SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 6 para el locus D7S820, -SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 8 para el locus D21S11, -SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10 para el locus D2S441, -SEQ ID NO: 11 y SEQ ID NO: 12 para el locus D1S1656, -SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 14 para el locus TPOX, -SEQ ID NO: 15 y SEQ ID NO: 16 para el locus VWA, -SEQ ID NO: 17 y SEQ ID NO: 18 para el locus D8S1179, -SEQ ID NO: 19 y SEQ ID NO: 20 para el locus D19S433, -SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 22 para el locus D12S391, -SEQ ID NO: 23 y SEQ ID NO: 24 para el locus TH01, -SEQ ID NO: 25 y SEQ ID NO: 26 para el locus D16S539, -SEQ ID NO: 27 y SEQ ID NO: 28 para el locus D3S1358, -SEQ ID NO: 29 y SEQ ID NO: 30 para el locus D18S51, -SEQ ID NO: 31 y SEQ ID NO: 32 para el locus D2S1338, -SEQ ID NO: 33 y SEQ ID NO: 34 para el locus D13S317, -SEQ ID NO: 35 y SEQ ID NO: 36 para el locus Amelogenina, -SEQ ID NO: 37 y SEQ ID NO: 38 para el locus FGA, -SEQ ID NO: 39 y SEQ ID NO: 40 para el locus D22S1045, y -SEQ ID NO: 41 y SEQ ID NO: 42 para el locus D10S1248.

11. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10, en el que la pareja de cebadores comprende un oligonucleótido marcado en uno de sus extremos.

12. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11 que además, comprende, los reactivos necesarios para marcar las parejas de cebadores.

13. Kit según la reivindicación 12, en donde los reactivos empleados para marcar las parejas de cebadores se seleccionan del grupo que consiste en un radioisótopo, un material fluorescente, digoxigenina y biotina.

14. Kit según la reivindicación 13, en donde el material fluorescente se selecciona del grupo que consiste en 5-carboxifluoresceína (5-FAM) , 6-FAM, análogo tetraclorinado de t-FAM (TET) , análogo hexaclorinado de 6-FAM (HEX) , 6carboxitetrametilrodamina (TAMRA) , 6-carboxi-X-rodamina (ROX) , 6-carboxi-4’, 5’-dicloro-2’, 7’-dimetoxifluoresceína (JOE) , NED, Cy-3, Cy-5, Cy-5.5,

fluorescein-6-isotiocinato (FITC) y tetrametilrodamina-5-isotiocinato (TRITC) .

15. Uso de un kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14 para obtener el perfil genético de un individuo, para identificar un individuo, para determinar relaciones de parentesco entre individuos, para identificar restos humanos.

16. Un conjunto de parejas de cebadores que comprende parejas de cebadores dirigidas a amplificar los loci CSF1PO, D5S818, D7S820, D21S11, D2S441, D1S1656, TPOX, VWA, D8S1179, D19S433, D12S391, TH01, D16S539, D3S1358, D18S51, D2S1338, D13S317, Amelogenina, FGA, D22S1045 y D10S1248.

17. Uso de un conjunto de parejas de cebadores según la reivindicación 16 para obtener el perfil genético de un individuo, para identificar un individuo, para determinar relaciones de parentesco entre individuos o para identificar restos humanos.

Figura 2

FLUDRESC:ENT []VE

100 1$0 200 250 300 350 390

0151856 6_FAr\llTFl

CSF1PO 05S818 075820 021511

D135317 D2251045 11 D10S1248 PET'

~I

FGA

SEQUENCE LISTING

<110> UNIVERSIDAD DEL PAÍS VASCO

<120> METHOD FOR OBTAINING THE GENE PROFILE OF AN INDIVIDUAL

<130> P7636ESOO

<160> 42

<170> PatentIn version 3.5

<21 O> <211> <212> <213> 1 22 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify CSF1PO locus

<400> 1 actgccttca tagatagaag at 22

<210> <211> <212> <213> 2 21 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify CSF1PO locus

<400> 2 gccctgttct aagtacttcc t 21

<210> <211> <212> <213> 3 23 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify D5S818 locus

<400> 3 ttaatagcaa gtatgtgaca agg 23

<21 O> <211> <212> <213> 4 27 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify D5S818 locus

<400> 4 gacatttgta tctttatctg tatcctt 27

<210> 5

<211> 26

<212> DNA

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Forward primer designed to amp1ify D7S820 locus <400> 5 gaattataac gattccacat ttatcc 26

<210> 6

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Reward primer designed to amp1ify D7S820 locus <400> 6 ataaagggta tgatagaaca cttg 24

<21 O> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Forward primer designed to amp1ify D21S11 locus <400> 7 ccctgattct tcagcttgta 20

<21 O> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Reward primer designed to amp1ify D21S11 locus <400> 8 gcagagacag actaatagga gg 22

<21 O> 9

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence <220>

<223> Forward primer designed to amp1ify D2S441 locus <400> 9 ctctgaagag attcttaaga ccc 23

<210> <211> <212> <213> 10 21 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify D2S44l locus

<400> 10 gttcactctc cttcccaaat g 21

<210> <211> <212> <213> 11 21 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify DlS1656 locus

<400> 11 atccccatat aagttcaagc c 21

<210> <211> <212> <213> 12 25 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify DlS1656 locus

<400> 12 gctttcaggc atttcagaga ttatg 25

<210> <211> <212> <213> 13 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify TPOX locus

<400> 13 cttagggaac cctcactg 18

<210> <211> <212> <213> 14 19 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify TPOX locus

<400> 14

gcagcgttta tttgcccaa

<210> <211> <212> <213> 15 21 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify VWA locus

<400> 15 tcagtatgtg acttggattg a 21

<210> <211> <212> <213> 16 25 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify VWA locus

<400> 16 gtaggttaga tagagatagg acaga 25

<210> <211> <212> <213> 17 23 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify D8S1179 locus

<400> 17 ttgtatttca tgtgtacatt cgt 23

<210> <211> <212> <213> 18 25 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify D8S1179 locus

<400> 18 gttgtgttca tgagtatagt ttcac 25

<210> <211> <212> <213> 19 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify D19S433 locus

<400> 19 catgttggca cattcctg 18

<210> <211> <212> <213> 20 22 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify D19S433 locus

<400> 20 agttctttag cagtgatttc tg 22

<210> <211> <212> <213> 21 26 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify D12S391 locus

<400> 21 caaattgtga tagtagtttc ttctgg 26

<210> <211> <212> <213> 22 19 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify D12S391 locus

<400> 22 gttagacctg gactgagcc 19

<210> <211> <212> <213> 23 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify TH01 locus

<400> 23 aacacagact ccatggtg 18

<210> <211> <212> <213> 24 19 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify TH01 locus

<400> 24 gttcctccct tatttccct 19

<210> <211> <212> <213> 25 21 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify D16S539 locus

<400> 25 cctcttccct agatcaatac a 21

<210> <211> <212> <213> 26 24 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify D16S539 locus

<400> 26 atctgtaagc atgtatctat catc 24

<210> <211> <212> <213> 27 20 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amp1ify D3S1358 locus

<400> 27 tgtagtgagc tatgattccc 20

<210> <211> <212> <213> 28 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amp1ify D3S1358 locus

<400> 28 gtattccctg tgcctttg 18

<210> <211> <212> <213> 29 18 DNA Artificial Sequence

<220>

<223> Forward primer designed to amplify D18S51 locus

<400> 29 gtctcagcta cttgcagg 18

<210> <211> <212> <213> 30 24 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify D18S51 locus

<400> 30 ggagatgtct tacaataaca gttg 24

<210> <211> <212> <213> 31 19 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify D2S1338 locus

<400> 31 ggaggtgcct aaagacttc 19

<210> <211> <212> <213> 32 19 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify D2S1338 locus

<400> 32 gcctaccaga atgccagtc 19

<210> <211> <212> <213> 33 25 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify D13S317 locus

<400> 33 cgcctatctg tatttacaaa tacat 25

<210> <211> <212> <213> 34 27 DNA Artificial Sequence

<220>

<223> Reward primer designed to amplify D13S317 locus

<400> ggacagaaag atagatagat gattgat

<210> <211> <212> <213> 35 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify Amelogenina locus

<400> 35 ccctgggctc tgtaaaga 18

<210> <211> <212> <213> 36 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify Amelogenina locus

<400> 36 gggcttgagg ccaaccat 18

<210> <211> <212> <213> 37 22 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify FGA locus

<400> 37 ctcacagatt aaactgtaac ca 22

<210> <211> <212> <213> 38 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify FGA locus

<400> 38 ttgtctgtaa ttgccagc 18

<210> <211> <212> <213> 39 20 DNA Artificial Sequence

<220>

<223> Forward primer designed to amplify D22S1045 locus

<400> tctgcataag acccactatg

<210> <211> <212> <213> 40 18 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify D22S1045 locus

<400> 40 atagtgacag tgcctgtg 18

<210> <211> <212> <213> 41 24 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Forward primer designed to amplify D10S1248 locus

<400> 41 agctattatt accaaagcat gaac 24

<210> <211> <212> <213> 42 21 DNA Artificial Sequence

<220> <223> Reward primer designed to amplify D10S1248 locus

<400> 42 gttccagtcc aactagatcc t 21

 

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