Método de obtención de datos útiles para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con biterapia estándar (interferón pegilado + ribavirina) en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1).

Método de obtención de datos útiles para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con biterapia estándar (interferón pegilado + ribavirina) en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1).

La presente invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con interferón pegilado más ribavirina en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1), combinando varios predictores: los niveles de IP-10, cortisol basal, polimorfismo genético de la Interleucina 28B (IL28B), aclaramiento de la creatina, 2 cargas virales (RNA-VHC) y 5 determinaciones de las lipoproteínas: LDL-colesterol, HDL-colesterol y triglicéridos. Además, la presente invención divulga el kit para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con interferón pegilado más ribavirina en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1) según se indica en la presente invención y sus diferentes usos.

Método de obtención de datos útiles para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con biterapia estándar (interferón peailado + ribavirina) en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1).

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuentra dentro del campo de la biomedicina y la biotecnología, y se refiere a un método de obtención de datos útiles para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con interferón pegilado más ribavirina en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1), combinando varios predictores: los niveles de IP-10, cortisol basal, polimorfismo genético de la Interleucina 28B (IL28B), aclaramiento de la creatina, 2 cargas virales (RNA-VHC) y 5 determinaciones de las lipoproteínas: LDL-colesterol, HDL-colesterol y triglicéridos.

ESTADO DE LA TÉCNICA

A principios del 2012 fue aprobada en nuestro país el empleo de los nuevos antivirales de acción directa (AAD): Boceprevir (Victrelis, MSD) y Telaprevir (Incivo, Janssen-Cilag) en asociación con la biterapia estándar (interferón pegilado + Ribavirina), la cual incrementaba las tasas de curación tanto en pacientes naive (no tratados previamente) como en pacientes no respondedores a terapias previas (recidivantes o relapsers, parciales y nulos o refractarios) en aproximadamente un 25-30 % adicional respecto a la biterapia estándar, tal como se pone de manifiesto en los estudios realizados en pacientes naive (SPRINT-2 y ADVANCE), como en previamente tratados (RESPOND-2 y REALIZE).

El inconveniente que tiene la incorporación de estos fármacos radica en que han sido incorporados en un momento delicado de grave crisis económica global, que obliga a una gestión eficiente de los recursos sanitarios en terapias de alto coste como éstas. Además estos nuevos antivirales son responsables de una mayor tasa de anemia secundaria (que en algunas series puede afectar al 50% de los casos tratados, lo que va a incrementar, a su vez, los costes derivados del uso de Epoetina alfa y un mayor consumo de hemoderivados (mayor necesidad de transfusiones sanguíneas). Además aparecen interacciones farmacológicas y resistencias con el empleo de estos nuevos fármacos que antes no existían cuando usamos la biterapia. Se ha demostrado con los nuevos antivirales unas mejores de tasas de curación en pacientes portadores del genotipo viral 1b cuando los

comparamos con los pacientes portadores de genotipos 1a, los cuales son más difíciles de curar con la triple terapia.

Patrones cinéticos virales como la presencia de respuesta virológica rápida (RVR) en los pacientes con genotipo 1 tratados con biterapia antiviral, que aparece en un 8-15%, así como la presencia de la respuesta virológica rápida extendida (RVRe) en pacientes con genotipo 1 tratados con Telaprevir , que son aquellos que logran alcanzar una viremia indetectable tanto a la 4a como a la 12a semana, como aquellos que al ser tratados con Boceprevir consiguen alcanzar una viremia indetectable tanto en la semana 8a como en la 24a, que es conocido como respondedor precoz, son respuesta cinéticas que están asociadas a unas tasas de curación virológica o respuesta virológica sostenida (RVS) muy altas, generalmente superiores al 90 %, de forma que en pacientes tratados con biterapia que alcanzan la RVR, el añadir un AAD no aporta ningún beneficio terapeútico, alcanzando, por tanto, una tasa de curación similares, independientemente de que se use la biterapia estándar o la triple terapia.

El polimorfismo genético de la interleucina 28b (IL-28B) fue descubierto en 2009 (Ge et al., 2009. Nature, 461 {7262), 399-401) como potente predictor de la respuesta a la terapia antiviral en pacientes naive diagnosticados de hepatitis crónica C (HCC), demostrando que los pacientes que tenían un genotipo favorable (CC) se curaban de forma estadísticamente significativa mayor (80%) que aquellos que tenían un genotipo desfavorable de la IL-28B (CT: 40% y TT: 35%).

Estudios previos habían usado dosis mayores de interferón pegilado durante 12 semanas para valorar si alcanzaban mayores tasas de curación, demostrándose que ésto no aportaba beneficio, pero sí observaron que la reducción de la viremia respecto a la carga viral basal (CVB) era dosis-dependiente. Partiendo del hecho que el interferón pegilado alfa-2a alcanzaba sus mayores concentraciones plasmáticas a las 72 horas de haber recibido la 1a dosis de dicho fármaco y que sus efectos desaparecen al 7° día de terapia, partimos de la hipótesis que una dosis de inducción de interferón pegilado (360 pg) podría ser empleada para poner de manifiesto la sensibilidad viral al interferón exógeno durante la 1a semana de terapia, en función de la reducción virémica alcanzada en 2 momentos distintos: 72 horas y 1a semana de terapia. La máxima reducción de la viremia alcanzada, bien a las 72 horas o al alcanzar la 1a semana de terapia, conocida como RV1, podría reflejar el grado de sensibilidad viral al interferón pegilado, lo que podría ser empleado en nuestro modelo

predictivo para predecir las tasas de RVS. Probablemente los pacientes más difíciles de

curar (aquellos con mayor fibrosis hepática: METAVIR F4 o portadores de una cirrosis hepática), así como aquellos con mayor carga viral basal (> 850000 UI/mL), para alcanzar la curación virológica vayan a precisar durante la primera semana de terapia antiviral una reducciones mayores de la viremia respecto a la carga viral basal que aquellos sujetos portadores de un grado de fibrosis más baja (F0-F3) o inicien la terapia antiviral con una carga viral basal más baja (<850000 UI/mL).

Variables como IP-10 elevada (quimioquina que se libera en procesos inflamatorios, que se ha asociado a la primera fase de reducción virémica correspondiente a la 1a semana de terapia antiviral) ha sido asociada a menores tasas de curación. Por otra parte, partiendo del hecho de que la Ribavirina, como antiviral empleado en ambos regímenes terapeúticos (dual y triple), presenta una aclaramiento renal, Lindahl elaboró una fórmula para un ajuste pretratamiento personalizado de la dosis de Ribavirina, lo que permitiría una mejor optimización de la dosis diaria de dicho fármaco, dependiendo del grado de aclaramiento de Creatinina y de Ribavirina. Esto es algo que no se ha tenido en cuenta en la práctica clínica, pese a que es un fármaco hoy por hoy totalmente indispensable, independientemente del régimen terapeútico antiviral empleado (dual o triple terapia antiviral). También la resistencia insulínica se ha asociado a bajas tasas de curación (valores de HOMA-IR elevados). Se han publicado estudios en que la asociación de las variables IP-10 y el polimorfismo genético de la IL-28B ha generado modelos predictivos no basado en scores como los que se emplean en la presente invención, que mejoraba su poder pronóstico.

Cuando los pacientes son tratados con biterapia, se producen cambios en el metabolismo de las lipoproteinas, de forma que las LDL-colesterol, HDL-colesterol y nivel de triglicéridos se ven modificados. En concreto, el grado de reducción de la LDL-colesterol durante las primeras semanas, junto con el grado de hipertrigliceridemia producido podría reflejar el grado de actividad de la lipoprotein lipasa, responsable de la conversión de la VLDL segregadas por el hepatocito a IDL y posteriormente a LDL-colesterol, generando un grado distinto de competencia con las lipoviropartículas LDL por los receptores LDL-colesterol hepatocitarios y un grado de competencia mayor o menor por los receptores Scavenger entre las moléculas de VLDL e IDL ricas en triglicéridos y las moléculas HDL-colesterol.

Actualmente no se dispone de modelos predictivos basados en puntuaciones o scores con suficiente valor predictivo negativo y suficientemente específicos que permita suspender la biterapia estándar de forma muy precoz (antes del 1° mes) y oriente en cuanto a la posible duración recomendada de la terapia.

Actualmente sólo se dispone de 2 variables predictivas de respuesta al tratamiento con biterapia estándar en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1): la presencia de respuesta virológica rápida (RVR) y el genotipo favorable (CC) de la interleucina 28b (IL- 28B), que aunque tienen un alto valor predictivo positivo (VPP), desafortunadamente no tienen capacidad por sí solas para predicir aquellos pacientes que finalmente no se curarán con biterapia estándar. No existen escalas basada en puntuaciones que discrimine los pacientes que realmente no van a poderse curar.

En la presente invención se elabora por primera vez una escala predictiva de respuesta al tratamiento antiviral para pacientes con hepatitis crónica VHC genotipo 1 basada en las puntuaciones de 3 escalas predictivas obtenidas en... [Seguir leyendo]

1. Un método de obtención de datos útiles para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con interferón pegilado + ribavirina en pacientes con hepatitis crónica C genotipo

1 (HCC-G1), que comprende:

a) obtener muestras biológicas aisladas de un individuo a distintos tiempos T0, T1, T2,

T3 y T4,

b) identificar a T0:

(i) la IP-10 sérica (pg/mL),

(ii) el genotipo de IL-28 (CC, CT y TT),

(iii) el cortisol sérico (mg/dl)

(iv) el aclaramiento de la creatina (mL/hora),

- a T0, T1, T2:

(v) la carga viral (log10 Ul/mL),

- a T0, T1, T2, T3 y T4

(vi) valor medio de LDL-c durante el primer mes, tomado a T0, T1, T2, T3 y T4

(vii) grado de fibrosis hepática

(viii) valor del ratio de infectividad, que se considera como el cociente entre LDL-colesterol media durante 1° mes de terapia y la concentración media de HDL- colesterol durante este periodo)

c) calcular dos índices (Week y Month) asignando una puntuación según los distintos valores de los marcadores a los distintos tiempos, donde:

(i) si la IP-10 < 409,9 pg / mL, se le asignan +2 puntos; si la IP-10 = 410-599 pg/mL, se le asigna -1 punto; Si la IP-10>600 pg/mL se le asigna -2 puntos.

(ii) si el genotipo de IL-28B es CC se le asignan +2 puntos; si el genotipo de IL-28B es CT o TT se le asigna -1 puntos.

(iii) si el cortisol sérico < 12,9 mg / dl se le asignan + 2 puntos; si el cortisol sérico = 13-17,9 mg/dl se le asigna -1 punto; si el cortisol sérico > 18 mg/dl se le asignan -2 puntos.

(iv) si el aclaramiento de la creatinina es < 115,9 mililitro/hora se le asignan +

2 puntos; si el aclaramiento de la creatinina es = 116-139 mililitro/hora se le asignan -2 puntos; si el aclaramiento de la creatinina es > 140 mililitro/hora se le asignan -4 puntos.

(v) si la carga viral basal es > 6 x 106 UI/mL y si RV1 < 2,5 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan - 5 puntos; si la carga viral basal es > 6 x 106 UI/mL y si RV1 > 2,5 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan +5 puntos; si carga viral basal está comprendida entre 5999999-3000000 UI/mL o si F4

(Cirrosis) y si RV1 <1,4 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan - 5 puntos; si carga viral basal comprendida entre 5999999-3000000 UI/mL o si F4 (Cirrosis) y si RV1> 1,4 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan + 5 puntos; si carga viral basal está comprendida entre 2999999-850000 UI/mL y si F0- F3 (No cirrosis) y si RV1 <1,2 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan - 4 puntos; si carga viral basal está comprendida entre 2999999-850000 UI/mL y si F0-F3 (No cirrosis) y si RV1> 1,2 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan + 4 puntos; si carga viral basal está comprendida entre 849999- 100000 UI/mL y si F0-F3 (No cirrosis) y si RV1 < 0,8 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan - 4 puntos; si carga viral basal está comprendida entre 849999-100000 UI/mL y si F0-F3 (No cirrosis) y si RV1> 0,8 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan +4 puntos; si carga viral basal es <100000 UI/mL y si F0-F3 (No cirrosis) y si RV1 < 0,5 log10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan - 4 puntos; si carga viral basal es <100000 UI/mL y si F0-F3 (No cirrosis) y si RV1> 0,5 log 10 UI/mL respecto a la carga viral basal se le asignan +4 puntos.

(vi) si existe cirrosis (F4) y ratio de infectividad alto (Rl > 3,2) e independientemente de la carga viral basal o si no existe cirrosis y ratio de infectividad alto (Rl > 3,2) y carga viral basal > 3000000 UI/mL) y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) >_110 mg/dl se le asignan +4 puntos; si existe cirrosis (F4) y ratio de infectividad alto (Rl > 3,2) e independientemente de la carga viral basal o si no existe cirrosis y ratio de infectividad alto (Rl > 3,2) y la carga viral basal > 3000000 UI/mL) y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) < 110 mg/dl se le asignan -4 puntos; si existe cirrosis (F4) y ratio de infectividad bajo (Rl < 3,2) y carga viral basal ( < 3000000 UI/mL) o si no existe cirrosis y ratio de infectividad bajo (Rl < 3,2) y la carga viral basal es > 3000000 UI/mL) y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) > 105 mg/dl se le asignan +4 puntos; si cirrosis (F4) y ratio de infectividad bajo (Rl < 3,2) y carga viral basal ( < 3000000 UI/mL) o si no existe cirrosis y ratio de infectividad bajo (Rl < 3,2) y carga viral basal es > 3000000 UI/mL) y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) < 105 mg/dl se le asignan -4 puntos; si no cirrosis y ratio de infectividad alto (Rl > 3,2) y carga viral basal se encuentra comprendida entre 2999999-100000 UI/mL y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) > 80 mg/dl se le asignan +3 puntos; si no cirrosis y ratio de infectividad alto (Rl > 3,2) y carga viral basal se encuentra comprendida entre 2999999-100000 UI/mL y si el valor medio de LDL-c

durante el primer mes de terapia (mLDL-c) < 80 mg/dl se le asignan -3 puntos; si no

cirrosis y ratio de infectividad bajo (RI < 3,2) y carga viral basal que presenta el paciente está comprendida entre 2999999-100000 Ul/mL y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) > 65 mg/dl se le asignan +3 puntos; si no cirrosis y ratio de infectividad bajo (RI < 3,2) y carga viral basal está comprendida entre 2999999-100000 Ul/mL y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) < 65 mg/dl se le asignan -3 puntos; si no cirrosis y ratio de infectividad bajo (RI < 3,2) y carga viral basal es < 100000 Ul/mL y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) > 45 mg/dl se le asignan +2 puntos; si no cirrosis y ratio de infectividad bajo (RI < 3,2) y carga viral basal muy baja (< 100000 Ul/mL) y si el valor medio de LDL-c durante el primer mes de terapia (mLDL-c) < 45 mg/dl se le asignan -2 puntos.

2.- El método según la reivindicación anterior, que además comprende:

d) predecir a la semana del inicio del tratamiento la respuesta viral sostenida del individuo del paso (a) según el índice:

Week = i + ii + iii + iv + v

e) predecir al mes del inicio del tratamiento la respuesta viral sostenida del individuo del paso (a) según el índice:

Month = i + ii + iii + iv + v + vi

f) donde los tiempos T0, T1, T2, T3 y T4, corresponden a 0, 3, 7, 14 y 30 días desde el inicio del tratamiento de la reivindicación 1, respectivamente.

3.- El método según la reivindicación anterior, donde si Week está comprendido entre -4 y - 18 puntos se recomienda suspender la biterapia y se recomienda iniciar la triple terapia; si la suma está comprendida entre -3 y +18 se recomienda mantener la terapia hasta finalizar el primer mes y adicionar la siguiente puntuación Month.

4.- El método según las reivindicaciones 2-3 donde si Month está comprendido entre +1 y +17 puntos se debe mantener la terapia antiviral; si la suma está comprendida entre 0 y -18 se debe suspender la biterapia e iniciar la triple la terapia antiviral.

5.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la determinación de la cantidad de IP10 sérica se realiza utilizando la técnica ELISA.

6.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la determinación del genotipo de IL28B se realiza mediante PCR.

7.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la determinación del cortisol sérico se realiza mediante técnica de ELISA.

8.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde el aclaramiento de la creatina se realiza mediante la fórmula estandarizada: Aclaramiento de creatinina (mililitro /hora) para (sexo masculino) = (140-edad) x peso / 72 x creatinina sérica basal (mg/dl) y para la (sexo femenino)= (140-edad) x peso x 0,85 / 72 x creatinina sérica basal (mg/dl).

9.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la determinación de la carga viral se realiza mediante PCR.

10.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la determinación de LDL-c, HDL-c y triglicéridos se realiza mediante métodos enzimático-calorimétricos (Roche Diagnostics), usando tubos Vacutainer con EDTA. Las lipoproteínas de baja densidad (LDL- colesterol) se calcularon por la fórmula de Friedewald.

11.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la determinación del grado de fibrosis se realiza según la escala metavir (F0-F4).

12.- Un kit para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con interferón pegilado + ribavirina en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1), que comprende los elementos necesarios para detectar:

(i) la IP-10 sérica

(ii) el genotipo de IL-28

(iii) el cortisol sérico

(iv) el aclaramiento de la creatina

(v) la carga viral

(vi) valor LDL-c, HDL-c y triglicéridos

(vii) grado de fibrosis hepática

13.- El kit según la reivindicación anterior, donde la IP-10 sérica se determina mediante el kit humano Quantikine IP-10/CXCL10/IP-10, basado en enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) (Vitro SA).

14.- El kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-13, donde el genotipo de IL-28 se determina mediante cabo por Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) en tiempo real.

15.- El kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-14, donde el cortisol sérico se determina mediante inmunoensayo basado en la electroquimioiluminiscencia.

16.- El kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-15, donde el aclaramiento de la creatina se determina mediante la fórmula estandarizada: Aclaramiento de creatinina (mililitro /hora) para (sexo masculino) = (140-edad) x peso / 72 x creatinina sérica basal (mg/dl) y para la (sexo femenino)= (140-edad) x peso x 0,85 / 72 x creatinina sérica basal (mg/dl).

17.- El kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-16, donde la carga viral se determina mediante PCR (reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real)

18.- El kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-17, donde el valor LDL-c, HDL-c y triglicéridos se determina mediante métodos enzimático-colorimétricos.

19.- El kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-18, donde el grado de fibrosis hepática se determina mediante la realización de una biopsia hepática percutánea obtenida en los 6 meses previos a la fecha de inicio de la terapia antiviral aplicando el score METAVIR.

20.- El uso del kit según cualquiera de las reivindicaciones 12-19 para predecir o pronosticar la respuesta al tratamiento con interferón pegilado + ribavirina en pacientes con hepatitis crónica C genotipo 1 (HCC-G1).