Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón.

Método de obtención de datos, útiles para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón.

Uso de los genes PKP1

, KRT15, DSG3, o de las proteínas PKP1, KRT15, DSG3, para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón, kis de diagnóstico y usos.

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201201292.

Solicitante: UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Nacionalidad solicitante: España.

Inventor/es: SÁNCHEZ-PALENCIA RAMOS,Abel, GÓMEZ MORALES,Mercedes, GÓMEZ CAPILLA,José Antonio, FÁREZ VIDAL,M. Esther.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)

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Fragmento de la descripción:

Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial del

cáncer de pulmón.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuentra dentro de la medicina y la biología molecular, y se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial de los distinto tipos de cáncer d pulmón, permitiendo el 10 establecimiento de grupos de pacientes.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El cáncer de pulmón es la principal causa de muerte por cáncer en todo el 15 mundo.

Los dos tipos principales de cáncer de pulmón son el cáncer de pulmón de células no pequeñas (de inglés Non-small cell lung cáncer (NSCLC)) (* 85% de todos los cánceres de pulmón) y el cáncer de pulmón de células pequeñas (del inglés Small cell lung cáncer (SCLC)) (* 15%). El cáncer de 20 pulmón de células no pequeñas se puede dividir en tres grandes subtipos histológicos:

- Carcinoma de células escamosas, que supone del 25 al 30% de

NSCLC. Este tipo es generalmente encontrado cerca de los bronquios, hacia el centro de la cavidad torácica (del pecho). Es 25 también conocido como carcinoma epidermoide y está usualmente

asociado a la exposición al humo de tabaco.

Adenocarcinoma: conforma el 40% de todos los NSCLC. Este tipo de cáncer se encuentra generalmente en las regiones más externas

del pulmón. También existe una forma rara de adenocarcinoma, llamado carcinoma broncoalveolar (Bronchioalveolar Carcinoma (BAC)) que se está viendo con mayor frecuencia a nivel mundial. BAC se disemina a lo largo de todo el pulmón a diferencia de otros 5 tipos de cáncer de pulmón más comunes que forman tumores únicos.

Se desconoce la causa del BAC. A pesar de presentarse en persona que fuman, generalmente se da en aquellas que nunca han fumado.

- Carcinoma de Células Grandes: conforma del 10% al 15% de

NSCLC. Es de crecimiento rápido y puede aparecer en cualquier 10 parte del pulmón., el cáncer de pulmón.

CÁNCER DE PULMÓN DE CÉLULAS NO PEQUEÑAS (NSCLC)

CÁNCER DE PULMÓN DE CÉLULAS PEQUEÑAS (SCLC)

Carcinoma de células escamosas

Adenocarcinoma

Carcinoma de Células Grandes

Tabla 1. Tipos de cáncer de pulmón.

La capacidad de responder a este problema de salud depende de la continua 15 investigación sobre los mecanismos fundamentales celulares y moleculares que controlan la tumorigénesis y metástasis.

La inmunohistoquímica es una herramienta muy valiosa y de uso frecuente en el diagnóstico diferencial de los carcinomas pulmonares. Disponibilidad de marcadores específicos de tumor de pulmón sería importante para el 20 diagnóstico diferencial de pulmón o de sus tipos histológicos. La importancia de las proteínas de unión de célula a célula-(incluyendo proteínas armadillo) en la biología del tumor se conoce, pero el conocimiento es limitado con respecto a las proteínas específicas de las adhesiones intercelulares.

El contacto entre las células epiteliales está mediado por varios tipos de 25 uniones de células. Estas uniones se componen de complejas agregaciones de proteínas transmembrana y de placa, y están típicamente conectados a los

componentes del citoesqueleto. Los desmosomas son complejos célula-célula que se encuentran principalmente en los tejidos epiteliales. Además de las proteínas constitutivas de la placa desmosomal, al menos uno de los tres miembros clásicos de la familia de placofilinas (PKP1 a PKP3) es necesaria para la formación de desmosomas funcionales. La placofilina 1 (PKP1) es un componente principal de placa desmosomal que funciona para reclutar filamentos intermedios a los sitios de contacto célula-célula a través de interacciones con desmoplaquina. Las cadherinas desmosómicas son posibles moléculas de adhesión celular del tipo desmosoma de unión celular en virtud de su homología con la clase cadherina de moléculas de adhesión celular. Dos clases de cadherinas desmosómicas son conocidas, a saber, los desmogleínas y la desmocolinas. El dominio citoplasmático de las cadherinas desmosómicas interactuar con las proteínas de placa que a su vez interactúan con filamentos intermedios de queratina del citoesqueleto.

En los últimos años, se ha acumulado evidencia de que varias proteínas de unión desempeñan papeles importantes en la carcinogénesis, invasión del tumor, y la metástasis. Múltiples estudios han implicado a miembros de la familia de proteínas armadillo, incluyendo placoglobina y p-catenina en la regulación aberrante de células de adhesión celular que promueve la progresión del tumor. Sin embargo, carecemos de la evidencia de un papel para PKPs y otras proteínas desmosomales en la patología tumoral.

Recientemente (Sanchez-Palencia et al., 2010. Int J Cáncer 129(2):355-364) se han establecido perfiles de expresión génica en NSCLC, en carcinomas primarios de células escamosas o epidermoides y adenocarcinomas. Después del análisis de microarrays de muestras tumorales y no tumorales, el nivel de expresión de 92 genes seleccionados fue validado por qPCR utilizando el test robusto test de Bonferroni en un conjunto independiente de las muestras. En este primer estudio, que mostró resultados acerca de las secuencias de genes expresados diferencialmente en función del tipo de tumor, el estadio y el grado de diferenciación en NSCLC. También puso de manifiesto los datos relacionados con las secuencias de genes expresados diferencialmente correspondientes a las proteínas desmosómicas placofilina 1, queratina 15 y desmogleína 3 en el cáncer no microcítico de pulmón.

Después de que el tipo de cáncer de pulmón es identificado y el estadio determinado, el paciente y su familia pueden discutir opciones de tratamiento con el equipo médico. El tratamiento para cáncer de pulmón se basa en el tipo y estadio del cáncer. Los tratamientos pueden incluir: cirujía para remover el 5 tumor, quimioterapia (medicamentos que matan o reducen el tamaño del tumor) o radiación (rayos X que destruyen o dañan las células cancerosas).

Es por tanto, necesario, desarrollar un método de diagnóstico diferencial que permita conocer el tipo específico de cáncer de pulmón, así como elestadío en 10 el que se encuentra.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

En los ejemplos de la presente invención se muestra la localización 15 inmunohistoquímica de las proteínas PKP1, KRT15 y DSG3 involucradas en las adhesiones intercelulares, en setenta y cinco muestras de tumores de NSCLC primarios de pulmón de pacientes no tratados. El patrón de tinción de estas proteínas fue diferente entre los carcinomas escamosos y adenocarcinomas. Los adenocarcinomas no mostraron tinción de membrana. La tinción de 20 membrana es característica de los carcinomas escamosos de pulmón para las tres proteínas analizadas. En nuestro estudio, en los carcinomas de células escamosas, se observó una relación entre la presencia o ausencia de estas proteínas en la membrana y el grado de diferenciación con una tinción más intensa en las áreas mejor diferenciadas en cada neoplasia. La expresión de 25 estas proteínas dibujaron las uniones intercelulares que son características del estrato escamoso del epitelio plano monoestratificado y de neoplasias con este tipo de diferenciación (carcinomas de células escamosas) y se puede utilizar en el diagnóstico de los pacientes afectados por carcinoma de células escamosas del pulmón.

Los autores de la presente invención han desarrollado un método que permite el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón mediante la detección... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1.- El uso de los genes PKP1, KRT15, DSG3, o de las proteínas PKP1, 5 KRT15, DSG3, para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón.

2.- El uso de los genes PKP1, KRT15, DSG3, o de las proteínas PKP1, KRT15, DSG3 según la reivindicación anterior, donde el cáncer de pulmón es cáncer de pulmón de células no pequeñas.

3.- El uso de los genes PKP1, KRT15, DSG3, o de las proteínas PKP1, 10 KRT15, DSG3 según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde el cáncer de

pulmón es el carcinoma de células escamosas.

4.- Un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón, que comprende:

a. obtener una muestra biológica aislada que comprende células de un 15 individuo, y

b detectar simultáneamente el nivel de expresión de los genes PKP1, KRT15, DSG3, o la cantidad de las proteínas PKP1, KRT15, DSG3, en la muestra aislada de (a), y

c. comparar la expresión de los genes del paso (b) con una cantidad de 20 referencia.

5.- Un método para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón, que comprende los pasos (a) - (c) según la reivindicación 4, y además comprende

(d) diagnosticar al individuo del paso (a) como un individuo con carcinomas escamoso, cuando presente una expresión aumentada del 25 gen PKP1, KRT15 y/o DSG3 o una cantidad mayor de la proteína PKP1,

KRT15 y/o DSG3 en la muestra obtenida en (a), en relación a la cantidad de expresión detectada para dicho gen o dicha proteína en una población de pacientes de referencia.

6.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 4-5, donde la expresión aumentada del gen PKP1, o una cantidad mayor de la proteína PKP1 se detecta en el citoplasma y la membrana de las células.

7.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 4-6, donde el individuo del paso (a) se diagnostica como un individuo con adenocarcinoma de pulmón, cuando presenta la proteína PKP1 y/o KRT15 en el núcleo de la célula y está ausente en membrana.

8.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 4-7, donde el individuo del paso (a) se diagnostica como un individuo con adenocarcinoma, cuando no presenta la proteína DSG3 ni en la membrana, ni en el citoplasma, ni en el núcleo de la célula.

9.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 5-8, donde la muestra biológica aislada de un individuo del paso (a) es una muestra de tejido, preferiblemente tumoral.

10.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 5-9, donde la detección de los niveles de expresión de los genes PKP1, KRT15 y/o DSG3 se realiza mediante Q-RT-PCR.

11.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 5-10, donde la identificación de la cantidad de proteínas PKP1, KRT15 y/o DSG3, se realiza mediante técnicas inmmunológicas.

12.- El método según la reivindicación 11, donde las técnicas inmunológicas están basadas en reacciones de precipitación, basadas en reacciones de aglutinación, inmunomarcación, radioinmunoanálisis y técnicas radioinmunométricas, ELISA (Enzime Linked ImmunoadSorbent Assay), o en cualquiera de sus combinaciones.

13.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 11-12, donde las técnicas inmunológicas comprenden el inmunomarcaje.

14.- El método según la reivindicación 13, donde el inmunomarcaje se selecciona de entre inmunomarcaje con anticuerpos conjugados a enzimas , inmunomarcaje con anticuerpos conjugados a fluorocromos, o citometría.

15.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 4-14, donde el cáncer de pulmón es cáncer de pulmón de células no pequeñas.

16.- El método según cualquiera de las reivindicaciones 4-14, donde el cáncer de pulmón es el carcinoma de células escamosas.

17.- Un kit o dispositivo que comprende los elementos necesarios para analizar

el nivel de expresión de los genes PKP1, KRT15 y/o DSG3 o la cantidad de proteína PKP1, KRT15 y/o DSG3.

18.- El kit o dispositivo según la reivindicación anterior, que comprende un un anticuerpo anti- PKP1, un anticuerpo anti- KRT15, y/o un anticuerpo anti-

DSG3.

19.- El kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 17-18, donde el anticuerpo es monoclonal

20.- El kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 17-19, donde el anticuerpo se encuentra marcado con un fluorocromo.

21.- El kit o dispositivo según la reivindicación anterior, donde el fluorocromo se

selecciona de la lista que comprende Fluoresceína (FITC), Tetrametilrodamina y derivados, Ficoeritrina (PE), PerCP, Cy5, Texas, aloficocianina, o cualquiera de sus combinaciones.

22.- El uso del kit o dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 17-22, 20 para el diagnóstico diferencial del cáncer de pulmón.